熒光素雙醋酸酯（FDA）是一種常用的培養(yǎng)動(dòng)植物細(xì)胞以及植物細(xì)胞原生質(zhì)體的生活力鑒定染料，其染色機(jī)理也利用了死活細(xì)胞在代謝上的差異：FDA本身不產(chǎn)生熒光，也無(wú)極性，能自由滲透出入完整的細(xì)胞膜。

當(dāng)FDA進(jìn)入活細(xì)胞后，被細(xì)胞內(nèi)的脂酶分解，生成有極性的、能產(chǎn)生熒光的物質(zhì)——熒光素，該物質(zhì)不能自由透過(guò)活的細(xì)胞膜，積累在細(xì)胞膜內(nèi)，因而使有活力的細(xì)胞產(chǎn)生綠色熒光；而無(wú)活力的細(xì)胞因不能使FDA分解，而無(wú)法產(chǎn)生熒光。

除此之外，還有一些細(xì)胞器的專(zhuān)有染料。如液泡系的專(zhuān)有染料中性紅。中性紅是一種低毒性染料，可以使活細(xì)胞液泡著紅色，而細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核不被著色；死細(xì)胞的液泡不被著色或淺染，染料彌散于整個(gè)細(xì)胞中，細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)被染成紅色。有時(shí)侯為了增加染色效果可以將兩種染料結(jié)合使用，如甲基藍(lán)-中性紅混合染色法。 全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的壽命。廣東現(xiàn)代細(xì)胞計(jì)數(shù)儀哪家便宜

細(xì)胞離心下來(lái)的離心速率應(yīng)為多少?

細(xì)胞傳代或凍存時(shí)欲回收細(xì)胞，其離心速度一般為800-1000 rpm/min，室溫離心5-8分鐘，轉(zhuǎn)速過(guò)高，將造成細(xì)胞破裂死亡。

如何用臺(tái)盼蘭計(jì)數(shù)活細(xì)胞?

用無(wú)血清培養(yǎng)基把細(xì)胞懸液稀釋到200～2000 個(gè)/毫升，在0.1 毫升的細(xì)胞懸液中加入0.1 毫升的0.4%的臺(tái)盼蘭溶液。輕輕混勻，用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)細(xì)胞?；罴?xì)胞排斥臺(tái)盼蘭，因而染成藍(lán)色的細(xì)胞是死細(xì)胞，注意計(jì)數(shù)需在加入臺(tái)盼藍(lán)10min內(nèi)完成。有細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的，可直接用計(jì)數(shù)儀進(jìn)行。 上海高科技細(xì)胞計(jì)數(shù)儀比較價(jià)格全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的標(biāo)準(zhǔn)是什么？

細(xì)胞傳代培養(yǎng)常見(jiàn)問(wèn)題匯總

一般拿到細(xì)胞后，應(yīng)該注意什么?

收到細(xì)胞先不開(kāi)蓋,用酒精將整個(gè)細(xì)胞瓶外壁進(jìn)行消毒，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后(看細(xì)胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時(shí)的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細(xì)胞100X，200X各兩張)，排除細(xì)胞本身污染的情況。

何時(shí)須更換培養(yǎng)基?

視細(xì)胞生長(zhǎng)密度而定，常規(guī)細(xì)胞2-3天更換培養(yǎng)基。

細(xì)胞何時(shí)進(jìn)行傳代較好?

一般情況下細(xì)胞生長(zhǎng)至完全匯合后就應(yīng)該傳代，所有細(xì)胞生長(zhǎng)都有一個(gè)要求不宜生長(zhǎng)過(guò)密(也就是常說(shuō)的長(zhǎng)老了)，但有接觸抑制的細(xì)胞，在匯合前就必須進(jìn)行傳代，這類(lèi)細(xì)胞一般在密度70-80%就進(jìn)行傳代，否則會(huì)引起細(xì)胞分化。

染色法鑒定機(jī)理

染色法分化學(xué)染色法和熒光染色法，根據(jù)染色機(jī)理的不同，染料或使死細(xì)胞著色，或使活細(xì)胞著色。死活細(xì)胞在生理機(jī)能和性質(zhì)上的差異主要包括：

死活細(xì)胞細(xì)胞膜通透性的差異：

活細(xì)胞的細(xì)胞膜是一種選擇性膜，對(duì)細(xì)胞起保護(hù)和屏障作用，只允許物質(zhì)選擇性的通過(guò)；而細(xì)胞死亡之后，細(xì)胞膜受損，通透性增加。常用的以臺(tái)盼藍(lán)鑒別細(xì)胞死活的方法就是利用了這一性質(zhì)。

臺(tái)盼藍(lán)，又稱(chēng)錐藍(lán)，是一種陰離子型染料，不能透過(guò)完整的細(xì)胞膜。所以經(jīng)臺(tái)盼藍(lán)染色后只能使死細(xì)胞著色，而活細(xì)胞不被著色 全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀怎么使用？

細(xì)胞抱團(tuán)怎么處理?

一些懸浮細(xì)胞抱團(tuán)生長(zhǎng)是正?，F(xiàn)象，大部分懸浮細(xì)胞在細(xì)胞密度很高的情況下，很可能會(huì)出現(xiàn)部分細(xì)胞抱團(tuán)生長(zhǎng)的現(xiàn)象，聚團(tuán)細(xì)胞很容易死亡并演化成絮狀物，殃及周?chē)膽腋〖?xì)胞，因此在培養(yǎng)懸浮細(xì)胞時(shí)需控制好細(xì)胞密度。如果出現(xiàn)了細(xì)胞團(tuán)，可以通過(guò)細(xì)胞篩去掉部分較大的細(xì)胞團(tuán)，也可以嘗試一下方法：將細(xì)胞懸液收集到15 ml離心管中，靜置20 min左右，小心取上層細(xì)胞上清培養(yǎng)(該方法只能去除部分較大的細(xì)胞團(tuán)，需要大家酌情而定)。 細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的型號(hào)對(duì)比。發(fā)展細(xì)胞計(jì)數(shù)儀價(jià)目表

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傳統(tǒng)手動(dòng)計(jì)數(shù)法

回答這個(gè)問(wèn)題前，我們拿一個(gè)可以比較的對(duì)象，即原始的細(xì)胞計(jì)數(shù)及活率分析方法——1臺(tái)光學(xué)顯微鏡+血球計(jì)數(shù)板，待測(cè)的細(xì)胞懸液樣品被滴加在血球計(jì)數(shù)板上，通過(guò)肉眼人工計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)細(xì)胞數(shù)量和計(jì)算細(xì)胞活率。

顯微鏡下我們可以看到血球計(jì)數(shù)板上4個(gè)區(qū)域，其中的活細(xì)胞和死細(xì)胞數(shù)目被分別統(tǒng)計(jì)。這個(gè)方法比較大的優(yōu)勢(shì)是整套設(shè)備很便宜，配套一塊血球計(jì)數(shù)板，以及自配的臺(tái)盼藍(lán)溶液即可開(kāi)始整個(gè)實(shí)驗(yàn)，所以使用成本會(huì)很低，比較適合高校研究所中用于學(xué)生的教學(xué)實(shí)驗(yàn)。 廣東現(xiàn)代細(xì)胞計(jì)數(shù)儀哪家便宜

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