細(xì)胞傳代培養(yǎng)常見問題匯總

一般拿到細(xì)胞后，應(yīng)該注意什么?

收到細(xì)胞先不開蓋,用酒精將整個細(xì)胞瓶外壁進(jìn)行消毒，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細(xì)胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細(xì)胞100X，200X各兩張)，排除細(xì)胞本身污染的情況。

何時須更換培養(yǎng)基?

視細(xì)胞生長密度而定，常規(guī)細(xì)胞2-3天更換培養(yǎng)基。

細(xì)胞何時進(jìn)行傳代較好?

一般情況下細(xì)胞生長至完全匯合后就應(yīng)該傳代，所有細(xì)胞生長都有一個要求不宜生長過密(也就是常說的長老了)，但有接觸抑制的細(xì)胞，在匯合前就必須進(jìn)行傳代，這類細(xì)胞一般在密度70-80%就進(jìn)行傳代，否則會引起細(xì)胞分化。 全自動細(xì)胞計數(shù)儀只能用來計數(shù)嗎？廣東應(yīng)用細(xì)胞計數(shù)儀哪家便宜

貼壁細(xì)胞傳代如何使用胰酶?

一般使用trypsin-EDTA濃度為0.25% trypsin-0.53 mM EDTA.2Na或0.05%trypsin-0.02 mM EDTA.2Na。消化液濃度過高時，易造成培養(yǎng)基中細(xì)胞碎片增多，黑渣子增多，常規(guī)細(xì)胞傳代時建議用0.05%的胰酶進(jìn)行消化，對于難消化的細(xì)胞可采用0.25%胰酶進(jìn)行消化，細(xì)胞密度過高超過80%時，采用分步消化法。胰酶儲存在–20°C，解凍在4°C進(jìn)行，開瓶后應(yīng)立即少量分裝于無菌試管中，保存于–20°C，避免反復(fù)冷凍解凍造成trypsin之活性降低，并可減少污染之機(jī)會。 蘇州通用細(xì)胞計數(shù)儀細(xì)胞計數(shù)儀的體積有多大？

如何獲取高質(zhì)量的細(xì)胞懸液，下面就帶您一步步***從組織到細(xì)胞懸液的旅程，讓細(xì)胞懸液制備不再成為困擾您的難題。

樣本準(zhǔn)備

新鮮組織樣本是制備細(xì)胞懸液的首要條件，新鮮組織從***取下后，去除周圍的脂肪、結(jié)締組織或者壞死組織，用預(yù)冷的PBS或者生理鹽水沖洗干凈，快速轉(zhuǎn)移到解離實驗室進(jìn)行細(xì)胞懸液制備，一般1個黃豆大小的組織量（200 mg）即可滿足一次組織解離。如果收集到新鮮樣本后無法立即進(jìn)行懸液制備，可暫時用組織保存液4℃保存，盡快完成細(xì)胞懸液制備。

細(xì)胞內(nèi)有空泡，是否是正?，F(xiàn)象?

部分細(xì)胞本身存在一定的空泡(如HepG2，Ishikawa及一些耐藥株等)，這個是正常現(xiàn)象。如果只有少數(shù)細(xì)胞有內(nèi)出現(xiàn)極少空泡，則很可能是細(xì)胞狀態(tài)不佳，可以通過調(diào)整血清濃度，控制消化，控制傳代比例及時間等方法來調(diào)整細(xì)胞狀態(tài);如果大部分細(xì)胞出現(xiàn)空泡，且單個細(xì)胞內(nèi)空泡數(shù)目偏多，則可能細(xì)胞代次較高，細(xì)胞老化所致，需更換代次較早的細(xì)胞。

細(xì)胞傳兩代后開始逐漸死亡的原因

很可能是培養(yǎng)體系不適合細(xì)胞(未使用推薦的培養(yǎng)體系);或者消化過度，對細(xì)胞有嚴(yán)重影響;或者是傳代比例不合適(具有密度依賴性的細(xì)胞，傳代太稀;或者生長較快的細(xì)胞，傳代較密，細(xì)胞嚴(yán)重堆疊生長)。 TANK全自動細(xì)胞計數(shù)儀價格。

傳統(tǒng)手動計數(shù)法

回答這個問題前，我們拿一個可以比較的對象，即原始的細(xì)胞計數(shù)及活率分析方法——1臺光學(xué)顯微鏡+血球計數(shù)板，待測的細(xì)胞懸液樣品被滴加在血球計數(shù)板上，通過肉眼人工計數(shù)統(tǒng)計細(xì)胞數(shù)量和計算細(xì)胞活率。

顯微鏡下我們可以看到血球計數(shù)板上4個區(qū)域，其中的活細(xì)胞和死細(xì)胞數(shù)目被分別統(tǒng)計。這個方法比較大的優(yōu)勢是整套設(shè)備很便宜，配套一塊血球計數(shù)板，以及自配的臺盼藍(lán)溶液即可開始整個實驗，所以使用成本會很低，比較適合高校研究所中用于學(xué)生的教學(xué)實驗。 全自動細(xì)胞計數(shù)儀怎么選擇？重慶自動化細(xì)胞計數(shù)儀銷售電話

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實驗中儀器之間數(shù)據(jù)的一致性

對于生物制藥公司的工藝開發(fā)和生產(chǎn)質(zhì)控部門，一般會選擇使用相同的分析儀器，這樣采用相同的分析方法，可以保持上下游測試條件的一致性。另外，不同地區(qū)的生產(chǎn)車間要保持生產(chǎn)質(zhì)量的一致性，很多時候也會使用同型號的分析儀器，但所使用儀器之間檢測結(jié)果的可比性就成了一個考察因素，并且檢測過程中人工操作的影響越小越好，以減少人為操作帶來的誤差。

這樣得到的生物藥質(zhì)量才可以有保證，這也是為何GMP和FDA等法規(guī)會有這方面的要求。所以，對于生產(chǎn)質(zhì)控部門采購細(xì)胞活率分析儀，這點就特別需要考慮。 廣東應(yīng)用細(xì)胞計數(shù)儀哪家便宜

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