細胞活力鑒定——臺盼藍染色法
臺盼藍(Trypan Blue),也稱二胺藍(Diamine Blue)和加拉藍(Niagra Blue),是一種用于選擇性著色死細胞和即將死亡的細胞的重要染料。這種染料不能進入細胞膜完整的細胞,而能在細胞膜受損的死細胞或即將死亡的細胞內(nèi)迅速積累,從而在顯微鏡下顯出藍色。若染色時間過長,臺盼藍可能通過胞吞或胞飲作用進入細胞。
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單細胞測序?qū)嶒灥牡谝徊绞菃渭毎麘乙旱闹苽洌鴳乙褐苽渲屑毎嫈?shù)的準確性直接影響單細胞測序的數(shù)據(jù)質(zhì)量,但是關于細胞計數(shù)您真的了解嗎?
目前細胞計數(shù)主要使用臺盼藍染色法和雙熒光AO/PI染色法。
1)臺盼藍染色原理:臺盼藍不能透過活細胞正常完整的細胞膜,故活細胞不著色。而死細胞的細胞膜透性增高,可使染料進入細胞內(nèi)而使細胞著色(藍色)。
2)雙熒光AO/PI染色原理:吖啶橙(AO)可以通過完整的細胞膜,嵌入所有細胞(活細胞和死細胞)的細胞核,呈現(xiàn)綠色熒光;碘化丙啶(PI)只能通過不完整的細胞膜,即死細胞的細胞膜,嵌入所有死細胞的細胞核,呈現(xiàn)紅色熒光。
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全自動細胞計數(shù)和活率分析
我們國家近十幾年在生物制藥行業(yè)的蓬勃發(fā)展,對于以上這種計數(shù)和活率分析方法,已無法滿足生物制藥研發(fā)和生產(chǎn)發(fā)展的需要,因此正在逐漸被自動化細胞計數(shù)和活率分析儀所替代。
自動化細胞計數(shù)和活率分析儀首先解決的是對細胞做死活標記,并且自動統(tǒng)計具體的死活細胞數(shù)量和計算細胞活率和濃度。
相比傳統(tǒng)手動計數(shù)法,避免了操作人員用眼疲勞和計數(shù)人為誤差的問題
自動化細胞計數(shù)和活率分析儀還會保存拍攝的照片,軟件分析使用的細胞參數(shù)和分析結(jié)果,以便符合法規(guī)要求的數(shù)據(jù)真實性和可追溯性
對比細胞計數(shù)儀和血球計數(shù)板。
對比1:準確度主觀差異性不論采用哪種細胞計數(shù)方法,依靠操作人員的判斷都會導致結(jié)果出錯。TANK-CA0008全自動細胞計數(shù)儀器采用了先進的算法來確定比較好焦距和光強度;可去除諸多主觀變量,同時還可節(jié)省時間。利用定量方法,根據(jù)細胞大小、亮度和圓度對細胞進行設門,而不是依靠操作人員的判斷,這有助于減少主觀性錯誤,提高樣本和用戶間的重復性
1. 采用血球計數(shù)板與 TANK-CA0008全自動細胞計數(shù)儀器進行計數(shù)的用戶差異比較。由三位不同的操作人員,采用 TANK-CA0008全自動 細胞 計數(shù)儀以及血球計數(shù)板和顯微鏡,對相同的 A549、COS-7、HeLa 和 U2OS 細胞樣本進行計數(shù)。血球計數(shù)板的用戶間差 異明顯高于TANK-CA0008全自動細胞計數(shù) 儀器。 細胞計數(shù)儀的使用評價。
實驗中儀器之間數(shù)據(jù)的一致性
對于生物制藥公司的工藝開發(fā)和生產(chǎn)質(zhì)控部門,一般會選擇使用相同的分析儀器,這樣采用相同的分析方法,可以保持上下游測試條件的一致性。另外,不同地區(qū)的生產(chǎn)車間要保持生產(chǎn)質(zhì)量的一致性,很多時候也會使用同型號的分析儀器,但所使用儀器之間檢測結(jié)果的可比性就成了一個考察因素,并且檢測過程中人工操作的影響越小越好,以減少人為操作帶來的誤差。
這樣得到的生物藥質(zhì)量才可以有保證,這也是為何GMP和FDA等法規(guī)會有這方面的要求。所以,對于生產(chǎn)質(zhì)控部門采購細胞活率分析儀,這點就特別需要考慮。 細胞計數(shù)儀適用于什么領域?天津高速細胞計數(shù)儀咨詢報價
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生物科技界細胞計數(shù)三大派系
血球計數(shù)板派(你數(shù)派)
血球計數(shù)板派(你數(shù)派)一直秉承著“只要眼睛好,世界很美好”的宗旨,通?!澳銛?shù)派”師兄妹都是火眼金睛視力好,心無旁騖定力強,心算筆算能力強,實驗室的細胞計數(shù)活少,人力成本低,時間不值錢。血球計數(shù)板計數(shù)很容易受主觀影響,結(jié)果不準確,重復性也不好,每次計數(shù)結(jié)果都不一樣,不同師兄妹計數(shù)結(jié)果也不一樣!若是哪天有幾十個細胞樣本要計數(shù),那真是要讓人發(fā)瘋了!相信很多伙伴都是親身經(jīng)歷過的
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