動(dòng)物卒中模型的制作也是臨床前實(shí)驗(yàn)研究的前提,缺血性卒中的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)P途哂嗅槍?duì)性與多樣性的特點(diǎn),并被不斷地進(jìn)行改進(jìn)與創(chuàng)新,力爭制作的動(dòng)物模型能無限接近真實(shí)的人類腦卒中。目前,大鼠、小鼠、猿、猴、犬、兔、羊、豬等多種動(dòng)物被用于制備局灶性腦缺血模型。線栓法、開顱法、栓子栓塞法、光化學(xué)法、FeCl3誘導(dǎo)法、內(nèi)皮素-1誘導(dǎo)法和自發(fā)性卒中法為常用方法,其中線栓法大腦中動(dòng)脈栓塞(MCAO)為制作局灶性缺血卒中模型*常用的方法。 實(shí)驗(yàn)外包團(tuán)隊(duì)可以根據(jù)科研人員的需求,設(shè)計(jì)并執(zhí)行各種實(shí)驗(yàn)。艾菱菲生物腦梗MCAO模型多少錢
造模方法 頸部備皮常規(guī)消毒,取頸正中切口剪開皮膚,分離皮膚下軟組織并暴露頸動(dòng)脈鞘; 游離出頸總動(dòng)脈1.5cm,穿線備用; 向遠(yuǎn)心端找到頸外側(cè)動(dòng)脈,游離涌現(xiàn)結(jié)扎,提起頸總備用線,在近心端,遠(yuǎn)心端用動(dòng)脈夾夾住; 在近心端動(dòng)脈夾處,用5mL注射器針頭刺破血管,稍微提起動(dòng)脈夾,用鑷子夾住線栓,從小口插入動(dòng)脈后,去掉遠(yuǎn)心端動(dòng)脈夾,然后用鑷子夾住線栓,線栓插入到頸內(nèi)距分叉處1.8-2.0cm; 用備用線將頸總和線栓一起結(jié)扎住,*好是結(jié)扎雙道,記錄線栓插入時(shí)間,在將動(dòng)脈夾另一邊近心端頸總結(jié)扎住,去掉動(dòng)脈夾; 注意縫合時(shí)不要將線栓帶出,*后根據(jù)評(píng)分來判斷成模性。 線栓法是國內(nèi)外*常用的制作腦局部缺血再灌注損傷的方法。Koizumi 于 1986 年首先報(bào)道了用線栓法制備大鼠腦缺血再灌注模型,此后 Longa等對(duì)該方法進(jìn)行了改良。線栓法腦缺血模型的研究已經(jīng)取得很多突破和進(jìn)展,但模型制備的穩(wěn)定性受很多因素的影響,如小鼠體質(zhì)量、線栓的選擇等。小鼠缺血再灌注損傷后腦梗死體積百分比的變化可以為研究治*腦卒中藥物時(shí)間窗提供基礎(chǔ)依據(jù),對(duì)進(jìn)一步深入研究大鼠缺血再灌注損傷模型有重要的意義。南京定制腦梗MCAO模型造模方法通過制備腦局部缺血再灌注損傷動(dòng)物模型研究腦缺血再灌注損傷的作用機(jī)制已成為國內(nèi)外的研究熱點(diǎn)。
缺血性卒中的病理生理及藥物治*缺血性卒中主要誘發(fā)神經(jīng)血管單元(NVU)一系列的缺血級(jí)聯(lián)反應(yīng)(包括興奮性氨基酸毒性,氧(氮)化應(yīng)激和缺血后炎癥等),從而造成神經(jīng)細(xì)胞受損甚至部分死亡細(xì)胞凋亡,*終誘發(fā)大腦功能的異常。NVU是由神經(jīng)元,神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞,血管細(xì)胞(內(nèi)皮細(xì)胞、周細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞)以及基底膜共同構(gòu)成,這些細(xì)胞相互作用,共同調(diào)節(jié)營養(yǎng)物質(zhì)在細(xì)胞間質(zhì)間的流動(dòng)和腦血流,維持和修復(fù)髓鞘,清*代謝產(chǎn)物,從而實(shí)現(xiàn)和維持大腦的正常功能。在缺血發(fā)生時(shí),NVU的各部分細(xì)胞發(fā)生不同程度的損傷,誘發(fā)神經(jīng)元細(xì)胞的生理生化異常。部分凋亡細(xì)胞會(huì)進(jìn)展為梗死灶,而梗死灶周圍受損的神經(jīng)細(xì)胞雖然出現(xiàn)了生理生化異常和功能障礙,但尚未死亡,及時(shí)低灌注可能可以改善其損傷狀況使之恢復(fù)正常。這部分及時(shí)搶救仍然可以改善其功能的神經(jīng)細(xì)胞一般被稱為“缺血半暗帶”。
局灶性缺血模型/線栓法引起的大腦中動(dòng)脈栓塞(Middle Cerebral Artery Occlusion,MCAO)由于大(?。┦竽X血管解剖結(jié)構(gòu)與人類相似,大腦中動(dòng)脈也是臨床缺血性卒中的高發(fā)部位,同時(shí),采用線栓法也便于觀察缺血和再灌注、永jiu(持續(xù))和短暫性損傷等多種狀態(tài),在評(píng)價(jià)藥物量效關(guān)系和確認(rèn)治*時(shí)間窗等方面有一定優(yōu)勢,因此,MCAO是目前*廣為接受一種藥效模型。神經(jīng)元尼氏體與細(xì)胞核呈藍(lán)紫色,背景呈淺藍(lán)色。結(jié)果顯示:假手術(shù)組海馬 CA1 區(qū)神經(jīng)元排列規(guī)整,神經(jīng)元胞體及樹突內(nèi)尼氏體豐富;實(shí)驗(yàn)組神經(jīng)元排列紊亂,并伴有細(xì)胞水腫和壞死發(fā)生,尼氏體染色較淺,模糊不清;陽性*組神經(jīng)元尼氏體排列較為規(guī)整,偶見神經(jīng)細(xì)胞水腫,和溶解。小鼠缺血性腦梗死模型在神經(jīng)科學(xué)研究中具有重要意義。
通過神經(jīng)功能缺損評(píng)分,研究人員可以定量地評(píng)估腦梗死后對(duì)動(dòng)物神經(jīng)功能的影響。這對(duì)于研究腦梗死的病理過程、治*方法以及藥物效果具有重要的意義。同時(shí),這種評(píng)分方法也可以為臨床醫(yī)生提供參考,幫助他們更好地評(píng)估患者的神經(jīng)功能缺損程度。 需要注意的是,神經(jīng)功能缺損評(píng)分只是一種評(píng)估方法,不能完全戴*動(dòng)物的神經(jīng)功能狀態(tài)。因此,在實(shí)驗(yàn)中還需要結(jié)合其他指標(biāo)和方法進(jìn)行綜合評(píng)估。此外,由于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的個(gè)體差異和環(huán)境因素的影響,實(shí)驗(yàn)結(jié)果也可能存在一定的誤差。因此,在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究時(shí)需要嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件和操作過程,以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。在成功建立小鼠腦梗模型后,認(rèn)知功能的檢測可以通過以下方法進(jìn)行: 1. 迷宮測試:這是一個(gè)常用的方法,通過讓小鼠在迷宮中尋找食物,觀察其尋找食物的速度和正確性,來評(píng)估其認(rèn)知功能。 2. 物體識(shí)別測試:給小鼠展示兩個(gè)相似的物體,觀察其是否能夠正確識(shí)別并記住這兩個(gè)物體。 3. 社交互動(dòng)測試:觀察小鼠與其他小鼠的互動(dòng)情況,包括是否能夠正確識(shí)別其他小鼠,以及是否能夠進(jìn)行正常的社交行為。 這些測試可以幫助評(píng)估小鼠的認(rèn)知功能,從而了解腦梗對(duì)其認(rèn)知功能的影響。進(jìn)栓長度過長,易造成蛛網(wǎng)膜下腔出血,死亡率較高、模型制備失敗。國內(nèi)腦梗MCAO模型費(fèi)用
行為學(xué)檢測是評(píng)估腦梗MCAO模型動(dòng)物行為變化的一種方法。艾菱菲生物腦梗MCAO模型多少錢
TTC染色如何測定腦梗MCAO面積-TTC(2,3,5—氯化三苯基四氮唑)是呼吸鏈中吡啶—核苷結(jié)構(gòu)酶系統(tǒng)的質(zhì)子受體,與正常組織中的脫氫酶反應(yīng)而呈紅色,而缺血組織內(nèi)脫氫酶活性下降,不能反應(yīng),故不會(huì)產(chǎn)生變化呈蒼白。將模型動(dòng)物大鼠安樂死,解剖取材完整的腦組織,在-20℃速凍20min,便于切片。切片切成6片,每隔2mm切一片。將切片至于2%TTC磷酸緩沖液(PH 7.4)溶液中,用錫箔紙蓋住培養(yǎng)皿,放入37℃溫箱30min,15min后翻動(dòng)腦切片,使其均勻接觸到染液。艾菱菲生物腦梗MCAO模型多少錢