培養(yǎng)基的類別按照培養(yǎng)基的物理狀態(tài)分:培養(yǎng)基按其物理狀態(tài)可分為固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基三類。(1)古體培養(yǎng)基。是在培養(yǎng)基中加入凝固劑,有瓊脂、明膠、硅膠等。古體培養(yǎng)基常月于微生物分離、鑒定、計(jì)數(shù)和菌種保存等方面。(2)液體培養(yǎng)基。液體培養(yǎng)基中不加任何凝固劑。這種培養(yǎng)基的成分均勻,微生物能充按標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的培養(yǎng)時(shí)間和溫度對接種后的平板進(jìn)行培養(yǎng),目標(biāo)菌應(yīng)呈現(xiàn)良好生長,并有典型的菌落外觀、大小和形態(tài),非目標(biāo)菌應(yīng)是微弱生長或無生長??刂婆囵B(yǎng)基的條件,控制培養(yǎng)基的pH配制培養(yǎng)基必須根據(jù)微生物的特點(diǎn)調(diào)節(jié)pH。江蘇自動(dòng)培養(yǎng)基制備儀
培養(yǎng)基的分裝:大批量配制時(shí)使用的自動(dòng)分配器須經(jīng)校準(zhǔn)和確認(rèn)。每次使用前后,均要對分配器的管道系統(tǒng)進(jìn)行沖洗,在分裝無菌培養(yǎng)基前,則要采用無菌硅膠管。固體培養(yǎng)基一般分裝在250ml、500ml錐形瓶中,高壓滅菌后根據(jù)需要分裝平皿或試管。平皿:傾注平皿,應(yīng)在無菌室中放置3—4h,如用塑料平皿須在35℃培養(yǎng)箱中倒置30—60min。讓水蒸汽自然蒸發(fā)。斜面:制備低層斜面分裝于試管,約占容積1/5,滅菌后趁熱斜放在細(xì)玻璃棒和木桿上,使成斜度,分裝使注意管口和瓶塞上勿沾有培養(yǎng)基,如沾有培養(yǎng)基應(yīng)用布抹去,以避免污染。湖北培養(yǎng)基制備儀多少錢一般培養(yǎng)基在受熱、吸潮后,易被細(xì)菌污染或分解變質(zhì),因此一般培養(yǎng)基必須防潮、避光、陰涼處保存。
培養(yǎng)基制備儀:培養(yǎng)基的種類繁多,但制備的方法大同小異,一般可分為6個(gè)步驟:用水、稱量、溶解復(fù)水、滅菌、pH測定、保存。1、必須選用專門純凈水或者經(jīng)消毒過后的無菌水。2、培養(yǎng)基進(jìn)行復(fù)水的容器不得用銅鍋或鐵鍋,放置離子混入培養(yǎng)基中,影響微生物的生長。3、容器的體積須大于復(fù)水后培養(yǎng)基總體積的2倍,預(yù)防出現(xiàn)溢出情況。4、在對培養(yǎng)基進(jìn)行加熱時(shí),若培養(yǎng)基內(nèi)含有瓊脂粉成分,則需要將其充分浸泡一段時(shí)間。加熱的過程中不斷進(jìn)行攪拌防止出現(xiàn)培養(yǎng)基結(jié)底炭化從而造成成分損害。部分培養(yǎng)基則需要使用沸水進(jìn)行加熱,預(yù)防發(fā)生局部燒焦及沸騰溢出。5、瓊脂類培養(yǎng)基進(jìn)行再融化時(shí)應(yīng)使用沸水浴或流動(dòng)蒸汽進(jìn)行加熱,較多只能加熱兩次,第二次再融化后仍未用完的培養(yǎng)基應(yīng)棄去。6、而當(dāng)對培養(yǎng)基實(shí)施滅菌時(shí),需嚴(yán)格按照說明規(guī)范操作。但是也不能盲目按照說明的時(shí)間進(jìn)行,需結(jié)合實(shí)際情況,合理調(diào)節(jié)滅菌時(shí)間,防止出現(xiàn)培養(yǎng)基滅菌過度而造成的成分變性。
固體斜面培養(yǎng)基配制步驟:1、培養(yǎng)基配方的選定同一種培養(yǎng)基的配方在不同著作中常會(huì)有某些差別。因此,除所用的是標(biāo)準(zhǔn)方法,應(yīng)嚴(yán)格按其規(guī)定進(jìn)行配制外,一般均應(yīng)盡量收集有關(guān)資料,加以比較核對,再依據(jù)自己的使用目的,加以選用,記錄其來源。2、培養(yǎng)基的制備記錄:每次制備培養(yǎng)基均應(yīng)有記錄,包括培養(yǎng)基名稱,配方及其來源,和各種成份的牌號(hào),較終pH值、消毒的溫度和時(shí)間制備的日期和制備者等,記錄應(yīng)復(fù)制一份,原記錄保存?zhèn)洳?,?fù)制記錄隨制好的培養(yǎng)基一同存放、以防發(fā)生混亂。3、培養(yǎng)基成分的稱取:培養(yǎng)基的各種成分必須精確稱取并要注意防止錯(cuò)亂,較好一次完成,不要中斷。可將配方置于傍側(cè),每稱完一種成分即在配方面軍做出記號(hào),并將所需稱取的藥品一次取齊,置于左側(cè),每種稱取完畢后,即移放于右側(cè)。完全稱取完畢后,還應(yīng)進(jìn)行一次檢查。要根據(jù)不同微生物的營養(yǎng)需求選擇適宜的營養(yǎng)物質(zhì),配制針對性強(qiáng)的培養(yǎng)基。
培養(yǎng)基防止污染應(yīng)該注意以下事項(xiàng):確認(rèn)工作細(xì)胞庫是否被污染,確認(rèn)毒種工作種子批是否被污染,確認(rèn)所用培養(yǎng)基及其添加成分(如小牛血清、NaHCO3等)是否被污染,均可用細(xì)菌、病菌及支原體無菌試驗(yàn)來確認(rèn)并排除。同時(shí)要對無菌試驗(yàn)培養(yǎng)基的靈敏度進(jìn)行驗(yàn)證。實(shí)際生產(chǎn)中,可以從配制好的培養(yǎng)液中取少量加入營養(yǎng)瓊脂于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),48小時(shí)即可觀察有無污染。其它:高壓滅菌設(shè)備、過濾除菌設(shè)備均應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證,確保滅菌和除菌效果;前者應(yīng)在投產(chǎn)前及其后的每6個(gè)月進(jìn)行驗(yàn)證,后者應(yīng)在每次除菌前、后進(jìn)行驗(yàn)證工作(至少應(yīng)在除菌后進(jìn)行一次)。另外,應(yīng)將有毒區(qū)與無毒區(qū)嚴(yán)格分開,并有各自自立的空氣凈化系統(tǒng)及孵室,有毒區(qū)對無毒區(qū)應(yīng)保持相對負(fù)壓,防止病毒對培養(yǎng)細(xì)胞(尤其是細(xì)胞庫)的污染。半組合培養(yǎng)基指一類主要以化學(xué)試劑配制,同時(shí)還加有某種或某些天然成分的培養(yǎng)基。廣西培養(yǎng)基制備儀廠家
配制培養(yǎng)基的原則:根據(jù)培養(yǎng)目的需要選擇適宜的營養(yǎng)物質(zhì)。江蘇自動(dòng)培養(yǎng)基制備儀
固體斜面培養(yǎng)基配制:培養(yǎng)基各成份的混合和溶化:培養(yǎng)基所用化學(xué)藥品均應(yīng)是化學(xué)純的。使用的蒸煮鍋不得為銅鍋或鐵鍋,以防有微量銅或鐵混入培養(yǎng)基中,使細(xì)菌不易生長。較好使用不銹鋼萵加熱溶化,可放入大燒杯或大燒瓶中置高壓蒸汽滅菌器或流動(dòng)蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在鍋中溶化時(shí)、可先用溫水加熱并隨時(shí)擾動(dòng)、以防焦化、如發(fā)現(xiàn)有焦化現(xiàn)象、該培養(yǎng)基即不能使用,應(yīng)重新制備。待大部分固體成分溶化后,再用較小火力使所有成分完全溶化,迄至煮沸。如為瓊脂溶化,用另一部分水溶化其它成分,然后將兩溶液充分混合。在加熱溶化過程中,因蒸發(fā)而丟失的水分,較后必須加以補(bǔ)足。培養(yǎng)基pH的初步調(diào)正:因培養(yǎng)基在加熱消毒過程中、pH會(huì)有所變化,培養(yǎng)基各成分完全溶解后,應(yīng)進(jìn)行PH的初步調(diào)正。江蘇自動(dòng)培養(yǎng)基制備儀
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