倒平板:滅菌溶化的培養(yǎng)基冷卻到50℃左右后,倒入無菌干燥的培養(yǎng)皿中。培養(yǎng)基的溫度不能過高,否則容易在培養(yǎng)皿的內蓋上形成太多的冷凝水;溫度太低,培養(yǎng)基又容易凝固成塊,無法制成平板。倒平板時,應在靠近酒精燈火焰進行,以免外界的雜菌落入平板內,左手拿培養(yǎng)皿,右手拿三角瓶的底部,用左手的小指和手掌部位把三角瓶的棉塞拔下,灼燒瓶口,用大拇指和食指把培養(yǎng)皿蓋打開一條縫,至瓶口剛好伸入,倒入培養(yǎng)基,以鋪滿底為限,不超過培養(yǎng)皿高度的三分之一,迅速蓋好蓋,放在桌面上,輕輕地轉動培養(yǎng)皿,使培養(yǎng)基分布均勻,冷凝后即可。按一般微生物生長繁殖所需要的基本營養(yǎng)物質配制的培養(yǎng)基即成為基礎培養(yǎng)基。上海瓊脂分裝機
液體培養(yǎng)基:為確定液體培養(yǎng)基的生長率,應接種適當?shù)呐囵B(yǎng)物。下面介紹的是用定量、半定量和定性方法評估生長率和選擇性的方法。所推薦的這些方法都是通過將液體培養(yǎng)基以傾注或劃線方式接種到瓊脂平板上培養(yǎng)后,計數(shù)或計算液體培養(yǎng)基分數(shù)而得出其生長數(shù)量的。對于液體培養(yǎng)基定性測試方法,則通過肉眼觀察來實現(xiàn)。目標菌和非目標菌的定量稀釋法步驟如下:選擇液體培養(yǎng)基10mL/管待檢。接種目標菌:將少量測試菌株培養(yǎng)物(每管10CFU~100CFU)接種測試肉湯和標準肉湯,混勻。接種非目標菌:將大量測試菌株培養(yǎng)物(每管大于1000CFU)接種測試肉湯和標準肉湯,混勻。貴州分裝機安裝調試半合成培養(yǎng)基在合成培養(yǎng)基中,加入某種或幾種天然成分。
配制好的培養(yǎng)基保存:滅菌以后培養(yǎng)基應該迅速冷卻至所需溫度,避免長時間保存在滅菌鍋內,造成過度滅菌,影響培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分或選擇性效果。所配制的培養(yǎng)基的量,應該是在較長保存期限內正好使用完。含染料的培養(yǎng)基應閉光保存;倒好的瓊脂平板如果配制的當天未使用完,應于冷藏保存,如果保存時間超過2天,應將其放入密封的塑料袋中保存;配好的肉湯類培養(yǎng)基如果保存時間超過2個星期,應將其放在帶有螺旋蓋的試管或其它密閉的試管或容器中防止蒸發(fā)。
簡單制作培養(yǎng)基,需要完成以下幾個主要步驟:需要選擇培養(yǎng)基配方,同一種培養(yǎng)基,其表達方式往往存在著差異。所以,除了應當嚴格按照標準方法的規(guī)定編制之外,我們一般應盡可能收集有關數(shù)據(jù),加以比較和核對,然后根據(jù)自己的目的選擇和記錄數(shù)據(jù)來源。需記錄培養(yǎng)基的制備,培養(yǎng)基的制備記錄包括培養(yǎng)基的名稱、配方及其來源、pH值、滅菌溫度、時間、配制日期、制備人等,并且要復印記錄和保存原始記錄備查。對副本的記錄應該和培養(yǎng)基一起保存,以防出現(xiàn)混亂。需稱重培養(yǎng)基的成分,培養(yǎng)基成分要準確稱量,并注意防止混淆。每一種成分稱量完畢后,都要在分裝的一面打上記號,然后將分裝的藥物一起放在左邊。每一個成分稱量完之后,都會向右移動。全部稱量完畢,應再次檢查。半組合培養(yǎng)基指一類主要以化學試劑配制,同時還加有某種或某些天然成分的培養(yǎng)基。
培養(yǎng)基的分類:培養(yǎng)基的分裝,應按使用的目的和要求,分裝于試管、燒瓶等適當容器內。分裝量不得超過容器裝盛量的2/3。容器口可用墊有防濕紙的棉塞封堵,其外還須用防水紙包扎(現(xiàn)試管一般多有用螺旋蓋者)。分裝時較好能使用半自動或電動的定量分裝器。分裝瓊脂斜面培養(yǎng)基時,分裝量應以能形成2/3底層和1/3斜面的量為洽當。分裝容器應預先清洗干凈并經(jīng)干烤消毒,以利于培養(yǎng)基的徹底滅菌。每批培養(yǎng)基應另外分裝20ml培養(yǎng)基于一小玻璃瓶中,隨該批培養(yǎng)基同時滅菌,以為測定該批培養(yǎng)基較終pH之用。培養(yǎng)基各成份的混合和溶化:培養(yǎng)基所用化學藥品均應是化學純的。河北高速分裝機
在配制用于觀察和定量測定微生物生長狀況的合成培養(yǎng)基時,常需在培養(yǎng)基中加入少量螯合劑。上海瓊脂分裝機
根據(jù)培養(yǎng)基的用途來區(qū)分,可分為選擇培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基等。1)選擇培養(yǎng)基在培養(yǎng)基中加入某種物質以殺死或克制不需要的菌種生長的培養(yǎng)基,稱之為選擇培養(yǎng)基。如鏈霉素、氯霉素等克制原核微生物的生長;而制霉菌素、灰黃霉素等能克制真核微生物的生長;結晶紫能克制革蘭氏陽性細菌的生長等。2)增殖培養(yǎng)基在自然界中,不同種的微生物常生活在一起,為了分離我們所需要的微生物,在普通培養(yǎng)基中加入一些某種微生物特別喜歡的營養(yǎng)物質,以增加這種微生物的繁殖速度,逐漸淘汰其它微生物,這種培養(yǎng)基稱為增殖培養(yǎng)基,這種培養(yǎng)基常用于菌種篩選和選擇增菌中。在某種程度上講,增殖培養(yǎng)基也是一種選擇培養(yǎng)基。3)鑒別培養(yǎng)基在培養(yǎng)基中加入某種試劑或化學藥品,使難以區(qū)分的微生物經(jīng)培養(yǎng)后呈現(xiàn)出明顯差別,因而有助開快速鑒別某種微生物。這樣的培養(yǎng)基稱之為鑒別培養(yǎng)基。例如用以檢查飲水和乳品中是否含有腸道致病菌的伊紅美藍培養(yǎng)基就是一種常用的鑒別性培養(yǎng)基。上海瓊脂分裝機
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