利用三角培養(yǎng)瓶制備培養(yǎng)基：包扎，分裝好后，塞上棉塞，在用牛皮紙將棉塞包裹好，防止滅菌時水份進入把棉塞弄濕。滅菌，按配方上要求的溫度、壓力進行高壓蒸汽滅菌。如果滅菌的溫度太高，營養(yǎng)成分會被破壞，培養(yǎng)基中的糖、氨基酸會使培養(yǎng)基的顏色變深。擺斜面，滅菌后需要擺斜面的試管要趁熱斜著擺放，使其凝固成為一個斜面，約占試管長度的1/2。貯存，培養(yǎng)基在30℃下放置，無污染的即可使用。一般用牛皮紙包裹好存放于2-8℃冰箱中備用。培養(yǎng)基是細胞生長的必需營養(yǎng)物質，利用三角培養(yǎng)瓶制備培養(yǎng)基可按照以上步驟操作，在使用前需確保培養(yǎng)基的無菌性，以免影響細胞正常繁殖。培養(yǎng)基pH值的調正：pH因培養(yǎng)基在加熱消毒過程中、pH會有所變化。山西不銹鋼內桶培養(yǎng)基制備器

培養(yǎng)基配制后一般都有沉渣或混濁出現(xiàn)醫(yī)學，需過濾成清晰透明后方可使用，常用的過濾方法如下：1.液體培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基必須清晰，以便觀察細菌的生長情況，常用濾紙過濾，亦可在加熱前加入用水稀釋的雞蛋白（1000ml培養(yǎng)基用1個雞蛋白）在100℃加熱后保持60～70℃，40～60分鐘，使其不溶性物質附于凝固的蛋白上而沉淀，然后再用虹吸法吸出上清液或以濾紙過濾。2.固體培養(yǎng)基：如系瓊脂培養(yǎng)基，于加熱融化后需趁熱以絨布或兩層紗布中夾脫脂棉過濾；亦可用自然沉淀法，即將瓊脂培養(yǎng)基盛人鋁鍋或廣口搪瓷容器內，以高壓（103.43kPa）蒸汽融化15分鐘后，靜置高壓鍋內過夜，次日將瓊脂傾出，用刀將底部沉渣切去，再融化即可收清晰的瓊脂培養(yǎng)基。觸摸屏培養(yǎng)基制備器哪個品牌好培養(yǎng)基配好后不宜久置，很好現(xiàn)配現(xiàn)用。

培養(yǎng)基在使用前通過高壓或過濾滅菌。防止污染應該注意以下事項：確認工作細胞庫是否被污染，確認毒種工作種子批是否被污染，確認所用培養(yǎng)基及其添加成分（如小牛血清、NaHCO3等）是否被污染，均可用細菌、及支原體無菌試驗來確認并排除。同時要對無菌試驗培養(yǎng)基的靈敏度進行驗證。實際生產中，可以從配制好的培養(yǎng)液中取少量加入營養(yǎng)瓊脂于恒溫培養(yǎng)箱內培養(yǎng)，48小時即可觀察有無污染。其它：高壓滅菌設備、過濾除菌設備均應進行驗證，確保滅菌和除菌效果;前者應在投產前及其后的每6個月進行驗證，后者應在每次除菌前、后進行驗證工作（至少應在除菌后進行一次）。另外，應將有毒區(qū)與無毒區(qū)嚴格分開，并有各自獨自的空氣凈化系統(tǒng)及孵室，有毒區(qū)對無毒區(qū)應保持相對負壓，防止病毒對培養(yǎng)細胞（尤其是細胞庫）的污染。

配制培養(yǎng)基的原則：滅菌處理：為了避免雜菌污染，獲得微生物純培養(yǎng)物，培養(yǎng)基必須及時嚴格滅菌。通常采用高壓蒸汽滅菌。一般培養(yǎng)基用0.IMPa(121℃)維持15~30min即可徹底滅菌。長時間的高溫滅菌會使某些不耐熱的物質破壞，如使糖類物質形成氨基糖、焦糖。因此，含糖培養(yǎng)基常用0.05MPa(110℃)滅菌20~30min某些對糖類要求更高的培養(yǎng)基，可先將糖過濾除菌或間歇滅菌，再與其他已滅菌的成分混合。長時間高溫滅菌也會使磷酸鹽、碳酸鹽與鈣、鎂鐵等陽離子形成難溶性化合物而產生沉淀。為了防止這類沉淀發(fā)生，可將這些物質分別滅菌，冷卻后再混合；也可在培養(yǎng)基中加入少量整合劑(0.01%乙二胺四乙酸，即EDTA)使金屬離子形成可溶性絡合物，防止沉淀的產生。高壓蒸汽滅菌一般使培養(yǎng)基pH降低，應在配制培養(yǎng)基時加以調節(jié)。培養(yǎng)基制備器微生物細胞組成元素的調查或分析，是設計培養(yǎng)基時的重要參考依據。

實驗室在制作培養(yǎng)基時候的經驗總結：培養(yǎng)基分裝：培養(yǎng)基的分裝，應按使用的目的和要求，分裝于試管、燒瓶等適當容器內。分裝量不得超過容器裝盛量的2/3。容器口可用墊有防濕紙的棉塞封堵，其外還須用防水紙包扎(現(xiàn)試管一般多有用螺旋蓋者)。分裝時較好能使用半自動或電動的定量分裝器。分裝瓊脂斜面培養(yǎng)基時，分裝量應以能形成2/3底層和1/3斜面的量為恰當。分裝容器應預先清洗干凈并經干烤消毒，以利于培養(yǎng)基的徹底滅菌。每批培養(yǎng)基應另外分裝20ml培養(yǎng)基于一小玻璃瓶中，隨該批培養(yǎng)基同時滅菌，以為測定該批培養(yǎng)基較終pH之用。培養(yǎng)基制備器對于采用表面接種形式培養(yǎng)的固體培養(yǎng)基，應先對瓊脂表面進行干燥。觸摸屏培養(yǎng)基制備器哪個品牌好

培養(yǎng)基制備器蓋子和分裝孔是采用溫度和壓力控制的，不能隨意打開。山西不銹鋼內桶培養(yǎng)基制備器

制作牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基：（1）方法步驟：計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。（2）倒平板操作的步驟：①將滅過菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上，右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，左手拔出棉塞。②右手拿錐形瓶，將瓶口迅速通過火焰。③用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基（約10～20mL）倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋。④等待平板冷卻凝固，大約需5～10min。然后，將平板倒過來放置，使培養(yǎng)皿蓋在下、皿底在上。倒平板操作的討論1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？提示：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進行倒平板了。山西不銹鋼內桶培養(yǎng)基制備器

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