培養(yǎng)基制備的九個步驟關(guān)注要點：步驟一：稱取數(shù)量：用1/100的電子天平稱出培養(yǎng)基所需的藥物。首先參照配方計算出配制相應(yīng)培養(yǎng)基需要各成分的數(shù)量，然后用電子天平準(zhǔn)確稱取重量。步驟二：培養(yǎng)基溶化：將培養(yǎng)基納入燒杯容器中，加小適量的水，緩慢加水并用玻璃棒小幅度攪拌。倘若培養(yǎng)基中不含瓊脂，則不需要對培養(yǎng)基加熱；相反含有瓊脂，就需要用本生燈/電磁爐加熱煮沸。步驟三：調(diào)培養(yǎng)基pH：雖然培養(yǎng)基中含有緩沖物質(zhì)，可以盡量使培養(yǎng)基的pH值保持在標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)，但如果配制的培養(yǎng)基不能要求，則必須進(jìn)行必要的調(diào)整。如果您有校準(zhǔn)過的pH計，則可以使用pH計。步驟四：培養(yǎng)基過濾：如果對配制的培養(yǎng)基沒有特殊要求，這一步可以省略。步驟五：培養(yǎng)基分裝：準(zhǔn)備好的培養(yǎng)基根據(jù)用途不同分為燒瓶、試管等容器，分裝試管量大采用自動分液器，分裝試管量小，可以用漏斗分液。確定這批培養(yǎng)基的較終pH值。步驟六：培養(yǎng)基滅菌處理：分裝完成的培養(yǎng)基應(yīng)馬上滅菌。高壓蒸汽滅菌一般使培養(yǎng)基pH降低，應(yīng)在配制培養(yǎng)基時加以調(diào)節(jié)。培養(yǎng)基消毒 培養(yǎng)基制備器廠家

培養(yǎng)基的稱量和溶解：小心稱量所需量的脫水合成培養(yǎng)基（必要時佩戴口罩或在通風(fēng)柜中操作，以防吸入含有有毒物質(zhì)的培養(yǎng)基粉末），先加入適量的水，充分混合（注意避免培養(yǎng)基結(jié)塊），然后加水至所需的量后適當(dāng)加熱，并重復(fù)或連續(xù)攪拌使其快速分散，必要時應(yīng)完全溶解。含瓊脂的培養(yǎng)基在加熱前應(yīng)浸泡幾分鐘。注意：培養(yǎng)基的加熱溶解或高溫滅菌盛放使用的容器不得為銅鍋或鐵鍋，以防有微量銅或鐵混入培養(yǎng)基中，使細(xì)菌不易生長。較好使用不銹鋼鍋加熱溶化，可放入大燒杯或大燒瓶中置高壓蒸汽滅菌器或流動蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在鍋中溶化時、可先用溫水加熱并隨時攪動、以防焦化、如發(fā)現(xiàn)有焦化現(xiàn)象、該培養(yǎng)基即不能使用，應(yīng)重新制備。河北自動攪拌培養(yǎng)基制備器全自動培養(yǎng)基制備儀主要特點：儀器蓋設(shè)計保護(hù)鎖，超過100度自動加鎖，使實驗環(huán)境更安全。

培養(yǎng)基配制：配制用水，培養(yǎng)基的大部分是水，所以水的質(zhì)量直接影響培養(yǎng)基的質(zhì)量。按Waymouth標(biāo)準(zhǔn)，水的電阻應(yīng)為200萬歐姆，一般實驗室里以玻璃蒸餾器制備的雙蒸水或三蒸水可以符合使用條件。培養(yǎng)基：培養(yǎng)基有天然、人工兩種。一般實驗室使用的是RPMI-1640粉末培養(yǎng)基，以雙蒸或三蒸水配制。NaHCO3（或HCl）調(diào)pH至7.2-7.4，若pH值超過7.6或遠(yuǎn)低于6.8，則大多數(shù)細(xì)胞不能生長。RPMI-1640不耐高壓滅菌，使用前需經(jīng)滅菌0.22μm孔徑濾膜濾過處理。血清：培養(yǎng)中常使用小牛血清（或胎牛血清）。血清亦不能高壓滅菌，無菌的小牛血清需在56℃水浴30分鐘滅活補(bǔ)體，置4℃冰箱存放待用。配制時含量視培養(yǎng)細(xì)胞種類、時間而定，一般用10—15%。由于血清成分復(fù)雜、條件不易控制，可選用無血清培養(yǎng)基。

培養(yǎng)基的實驗室制備：1.pH的測定和調(diào)整：用pH計測定pH,必要時在滅菌前調(diào)節(jié)pH，除特殊說明外,培養(yǎng)基滅菌后冷卻至25℃時,要求pH的變化不超過0.2pH單位.通常使用濃度約為40g/L(約1mol/L)的氫氧化鈉溶液或濃度約為36.5g/L（約1mol/L)的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH。如果滅菌后調(diào)節(jié)pH，溶液需滅菌。注:商品化培養(yǎng)基在高壓滅菌前后pH可能發(fā)生明顯變化,但使用蒸餾水或去離子水時,滅菌前無需調(diào)節(jié)pH。2.分裝：將配置好的培養(yǎng)基分裝到適當(dāng)?shù)娜萜髦?，容器的體積至少為體積的1.2倍。制備培養(yǎng)基的操作要點：固體培養(yǎng)基在液體培養(yǎng)基中加入適量的凝固劑即成固體培養(yǎng)基。

培養(yǎng)基的質(zhì)量測試：每批培養(yǎng)基制備好以后，應(yīng)仔細(xì)檢查一遍，如發(fā)現(xiàn)破裂、水分浸入、色澤異常、棉塞被培養(yǎng)基沾染等、均應(yīng)挑出棄去。并測定其好終pH。將全部培養(yǎng)基放入36±1°C恒溫箱培養(yǎng)過夜，如發(fā)現(xiàn)有菌生長，即棄去。用有關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)菌株接種1~2管或瓶培養(yǎng)基，培養(yǎng)24~48小時，如無菌生長或生長不好。應(yīng)追查原因并重復(fù)接種一次，如結(jié)果仍同前，則該批培養(yǎng)基即應(yīng)棄去，不能使用。培養(yǎng)基的保存：培養(yǎng)基應(yīng)存放于冷暗處，好好能放于普通冰箱內(nèi)。放置時間不宜超過一周，傾注的平板培養(yǎng)基不宜超過3天。每批培養(yǎng)基均必須附有該批培養(yǎng)基制備記錄副頁或明顯標(biāo)簽。全自動培養(yǎng)基制備儀主要特點：溫度探頭測量培養(yǎng)基實際溫度，控溫很準(zhǔn)。培養(yǎng)基消毒 培養(yǎng)基制備器廠家

培養(yǎng)基制備器不存在意外打開，保證了環(huán)境和操作者的安全。培養(yǎng)基消毒 培養(yǎng)基制備器廠家

天然培養(yǎng)基中血清主要作用：對培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用：有一些細(xì)胞，如內(nèi)皮細(xì)胞、骨髓樣細(xì)胞可以釋放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。這種作用是偶然發(fā)現(xiàn)的，則有目的的使用血清來終止胰蛋白酶的消化作用。因為胰蛋白酶已經(jīng)被較廣用于貼壁細(xì)胞的消化傳代。血清蛋白形成了血清的粘度，可以保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷，特別是在懸浮培養(yǎng)攪拌時，粘度起到重要作用。血清還含有一些微量元素和離子，他們在代謝中起重要作用，如SeO3、硒等。培養(yǎng)基消毒 培養(yǎng)基制備器廠家