配制培養(yǎng)基的原則:調(diào)節(jié)氧化還原電位(Eh)各種微生物對(duì)培養(yǎng)基的Eh要求不同。適宜好氧微生物生長(zhǎng)的Eh值一般為+0.3~+0.4V,厭氧微生物只能在+0.1V以下生長(zhǎng),因此,培養(yǎng)好氧微生物必須保證氧的供應(yīng),可在培養(yǎng)基中加入氧化劑提高Eh值。調(diào)節(jié)滲透壓多數(shù)微生物能耐受較大范圍滲透壓的變化。培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度過大,會(huì)使?jié)B透壓過高,使細(xì)胞發(fā)生質(zhì)壁分離而抑制微生物生長(zhǎng)。低滲溶液則使細(xì)胞吸水膨脹易破裂,因此,配制培養(yǎng)基時(shí)要掌握營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度。常在培養(yǎng)基中加人適量的Nacl以提高滲透壓。原料來源的選擇力求節(jié)約:配制培養(yǎng)基還應(yīng)遵循力求節(jié)約的原則,盡量選用價(jià)格便宜、來源方便的原料。特別是在工業(yè)發(fā)酵中,培養(yǎng)基用量大,更應(yīng)注意利用低成本的原料,降低產(chǎn)品成本。培養(yǎng)基制備器利用各種動(dòng)、植物或微生物的原料,其成分難以確切知道。安徽大容量 培養(yǎng)基制備器
培養(yǎng)基配制后一般都有沉渣或混濁出現(xiàn)醫(yī)學(xué),需過濾成清晰透明后方可使用,常用的過濾方法如下:1.液體培養(yǎng)基:液體培養(yǎng)基必須清晰,以便觀察細(xì)菌的生長(zhǎng)情況,常用濾紙過濾,亦可在加熱前加入用水稀釋的雞蛋白(1000ml培養(yǎng)基用1個(gè)雞蛋白)在100℃加熱后保持60~70℃,40~60分鐘,使其不溶性物質(zhì)附于凝固的蛋白上而沉淀,然后再用虹吸法吸出上清液或以濾紙過濾。2.固體培養(yǎng)基:如系瓊脂培養(yǎng)基,于加熱融化后需趁熱以絨布或兩層紗布中夾脫脂棉過濾;亦可用自然沉淀法,即將瓊脂培養(yǎng)基盛人鋁鍋或廣口搪瓷容器內(nèi),以高壓(103.43kPa)蒸汽融化15分鐘后,靜置高壓鍋內(nèi)過夜,次日將瓊脂傾出,用刀將底部沉渣切去,再融化即可收清晰的瓊脂培養(yǎng)基。吉林培養(yǎng)基消毒 培養(yǎng)基制備器制備培養(yǎng)基的操作要點(diǎn):半固體培養(yǎng)基如果把少量的凝固劑加入到液體培養(yǎng)基中,就制成了半固體培養(yǎng)基。
培養(yǎng)基的分裝,應(yīng)按使用的目的和要求,分裝于試管、燒瓶等適當(dāng)容器內(nèi)。分裝量不得超過容器裝盛量的2/3。容器口可用墊有防濕紙的棉塞封堵,其外還須用防水紙包扎(現(xiàn)試管一般多有用螺旋蓋者)。分裝時(shí)較好能使用半自動(dòng)或電動(dòng)的定量分裝器。分裝瓊脂斜面培養(yǎng)基時(shí),分裝量應(yīng)以能形成2/3底層和1/3斜面的量為洽當(dāng)。分裝容器應(yīng)預(yù)先清洗干凈并經(jīng)干烤消毒,以利于培養(yǎng)基的徹底滅菌。每批培養(yǎng)基應(yīng)另外分裝20ml培養(yǎng)基于一小玻璃瓶中,隨該批培養(yǎng)基同時(shí)滅菌,以為測(cè)定該批培養(yǎng)基較終pH之用。
實(shí)驗(yàn)室在制作培養(yǎng)基時(shí)候的經(jīng)驗(yàn)總結(jié):1、培養(yǎng)基pH值的調(diào)正:pH因培養(yǎng)基在加熱消毒過程中、pH會(huì)有所變化,培養(yǎng)基各成分完全溶解后,應(yīng)進(jìn)行pH的初步調(diào)正。例如,牛肉浸液約可降低pH0.2,而腸浸液pH卻會(huì)有明顯的升高。因此,對(duì)這個(gè)步驟,操作者應(yīng)隨時(shí)注意探索經(jīng)驗(yàn)、以期能掌握培養(yǎng)基的較終pH,保證培養(yǎng)基的質(zhì)量。pH調(diào)整后,還應(yīng)將培養(yǎng)基煮沸數(shù)分鐘,以利培養(yǎng)基沉淀物的析出。2、培養(yǎng)基過濾澄清:液體培養(yǎng)基必須澄清,瓊脂培養(yǎng)基也應(yīng)透明無明顯沉淀,因此,須要采用過濾或其它澄清方法以達(dá)到此項(xiàng)要求。一般液體培養(yǎng)基可用濾紙過濾法,濾紙應(yīng)折疊成折扇或漏斗形,以避免因液壓不均勻而引起濾紙破裂。全自動(dòng)培養(yǎng)基制備分裝系統(tǒng):運(yùn)行過程順滑無聲;大程度的削減了噪音。
配制培養(yǎng)基的原則:滅菌處理:為了避免雜菌污染,獲得微生物純培養(yǎng)物,培養(yǎng)基必須及時(shí)嚴(yán)格滅菌。通常采用高壓蒸汽滅菌。一般培養(yǎng)基用0.IMPa(121℃)維持15~30min即可徹底滅菌。長(zhǎng)時(shí)間的高溫滅菌會(huì)使某些不耐熱的物質(zhì)破壞,如使糖類物質(zhì)形成氨基糖、焦糖。因此,含糖培養(yǎng)基常用0.05MPa(110℃)滅菌20~30min某些對(duì)糖類要求更高的培養(yǎng)基,可先將糖過濾除菌或間歇滅菌,再與其他已滅菌的成分混合。長(zhǎng)時(shí)間高溫滅菌也會(huì)使磷酸鹽、碳酸鹽與鈣、鎂鐵等陽(yáng)離子形成難溶性化合物而產(chǎn)生沉淀。為了防止這類沉淀發(fā)生,可將這些物質(zhì)分別滅菌,冷卻后再混合;也可在培養(yǎng)基中加入少量整合劑(0.01%乙二胺四乙酸,即EDTA)使金屬離子形成可溶性絡(luò)合物,防止沉淀的產(chǎn)生。高壓蒸汽滅菌一般使培養(yǎng)基pH降低,應(yīng)在配制培養(yǎng)基時(shí)加以調(diào)節(jié)。培養(yǎng)基各成份的混合和溶化:培養(yǎng)基所用化學(xué)藥品均應(yīng)是化學(xué)純的。吉林培養(yǎng)基消毒 培養(yǎng)基制備器
培養(yǎng)基,是指供給微生物、植物或動(dòng)物(或組織)生長(zhǎng)繁殖的,由不同營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)組合配制而成的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。安徽大容量 培養(yǎng)基制備器
制作斜面培養(yǎng)基和平板培養(yǎng)基:培養(yǎng)基滅菌后,如制作斜面培養(yǎng)基和平板培養(yǎng)基,須趁培養(yǎng)基未凝固時(shí)進(jìn)行。(1)制作斜面培養(yǎng)基。在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上放1支長(zhǎng)0.5-1米左右的木條,厚度為1厘米左右,將試管頭部枕在木條上,使管內(nèi)培養(yǎng)基自然傾斜,凝固后即成斜面培養(yǎng)基。(2)制作平板培養(yǎng)基。將剛剛滅過菌的盛有培養(yǎng)基的錐形瓶和培養(yǎng)皿放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上,點(diǎn)燃酒精燈,右手托起錐形瓶瓶底,左手拔下棉塞,將瓶口在酒精燈上稍加灼燒,左手打開培養(yǎng)皿蓋,右手迅速將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中,每皿約倒入10毫升,以鋪滿皿底為度。鋪放培養(yǎng)基后放置15分鐘左右,待培養(yǎng)基凝固后,再5個(gè)培養(yǎng)皿一疊,倒置過來,平放在恒溫箱里,24小時(shí)后檢查,如培養(yǎng)基末長(zhǎng)雜菌,即可用來培養(yǎng)微生物。安徽大容量 培養(yǎng)基制備器