培養(yǎng)基中血清的質(zhì)量標準:血清質(zhì)量高低取決于兩方面因素:一是取材對象,二是取材過程。用于取材的動物應(yīng)健康無病并且在指定的出生天數(shù)之內(nèi),取材過程應(yīng)嚴格按照操作規(guī)程執(zhí)行,制備出的血清要經(jīng)過嚴格的質(zhì)量鑒定?!队脛游锛毎w外培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品規(guī)程》中的要求:牛血清必須來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國家。并應(yīng)具備適當?shù)谋O(jiān)測系統(tǒng)。有些國家還要求牛血清來自未用過反芻動物蛋白飼料的牛群。證明所用牛血清中不含對所生產(chǎn)疫苗病毒的抑制物。血清要通過濾膜過濾除菌,保證無菌。無細菌、霉菌、支原體和病毒的污染,有些國家要求無細菌噬菌體污染。對細胞有良好的支持繁殖作用。培養(yǎng)基的制備記錄:每次制備培養(yǎng)基均應(yīng)有記錄,包括培養(yǎng)基名稱。江西Systec培養(yǎng)基制備器
培養(yǎng)基制備技術(shù):一、玻璃器皿的清洗:在制備培養(yǎng)基的過程中,首先要使用一些玻璃器皿,如試管、三角瓶、培養(yǎng)皿、燒杯和吸管等。這些器皿在使用前都要根據(jù)不同的情況,經(jīng)過一定的處理,洗刷干凈。有的還要進行包裝,經(jīng)過滅菌等準備就緒后,才能使用。1、新購的玻璃器皿:除去包裝沾染的污垢后,先用熱肥皂水刷洗,流水沖凈,再浸泡于1~2%的工業(yè)鹽酸中數(shù)小時,使游離的堿性物質(zhì)除去,再以流水沖凈。對容量較大的器皿,如大燒瓶、量筒等,洗凈后注入濃鹽酸少許,轉(zhuǎn)動容器使其內(nèi)部表面均沾有鹽酸,數(shù)分鐘后傾去鹽酸,再以流水沖凈,倒置于洗滌架上將水空干,即可使用。2、用過的玻璃器皿:凡確無病原菌或未被帶菌物污染的器皿,使用后可隨時沖洗,吸取過化學(xué)試劑的吸管,可先浸泡于清水中,待到一定數(shù)量后再集中進行清洗。有可能被病原菌污染的器皿,必須經(jīng)過適當消毒后,將污垢除去,用皂液洗刷,再用流水沖洗干凈。陜西進口培養(yǎng)基制備器制備培養(yǎng)基的操作要點:成分基本上溶于水,沒有明顯的固形物,。
培養(yǎng)基的配制:分裝:一般培養(yǎng)基放在三角瓶或試管中滅菌使用。三角瓶:若作靜置培養(yǎng),則100ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶,很多不能超過150ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶,否則滅菌時培養(yǎng)基沸騰容易污染棉塞,造成染菌;若作搖瓶培養(yǎng),則15~20ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶,保證通氣良好。試管分裝:液體培養(yǎng)基一般裝4~5ml,約試管的1/4高度;固體斜面培養(yǎng)基一般裝3~4ml,約試管的1/5高度。包扎:分裝好后,塞上棉塞,在用牛皮紙將棉塞包裹好,防止滅菌時水份進入把棉塞弄濕。滅菌:按配方上要求的溫度、壓力進行高壓蒸汽滅菌。如果滅菌的溫度太高,營養(yǎng)成分會被破壞,培養(yǎng)基中的糖、氨基酸會使培養(yǎng)基的顏色變深。擺斜面:滅菌后需要擺斜面的試管要趁熱斜著擺放,使其凝固成為一個斜面,約占試管長度的1/2。貯存:培養(yǎng)基在30℃下放置,無污染的即可使用。一般用牛皮紙包裹好存放于2-8℃冰箱中備用。
培養(yǎng)基的制備:復(fù)水時不得用銅鍋或鐵鍋,以防有離子混入培養(yǎng)基中,影響微生物的生長;容器的大小需大于復(fù)水后培養(yǎng)基總體積的2倍以上,避免在加熱溶解過程中,培養(yǎng)基溢出;含有瓊脂粉的培養(yǎng)基,在加熱溶解之前可以浸泡數(shù)分鐘;加熱培養(yǎng)基時一定要進行攪拌,特別是瓊脂類培養(yǎng)基。為避免燒焦和沸騰溢出,對于少量的培養(yǎng)基很好使用沸水浴進行加熱。燒糊的培養(yǎng)基營養(yǎng)物質(zhì)被破壞,并可產(chǎn)生有毒物質(zhì),如發(fā)現(xiàn)焦化,或未溶解均勻前培養(yǎng)基有溢出,該培養(yǎng)基即不能使用,應(yīng)重新制備。對于瓊脂類培養(yǎng)基進行再融化時應(yīng)使用沸水浴或流動蒸汽進行加熱,很多只能加熱兩次,第二次再融化后仍未用完的培養(yǎng)基應(yīng)棄去。全自動培養(yǎng)基制備儀主要特點:可連接電腦進行打印。
調(diào)pH:雖然培養(yǎng)基中含有緩沖物質(zhì)成分,能使培養(yǎng)基的pH盡可能的保持在要求的范圍內(nèi),但是配出的培養(yǎng)基若不符合要求,就要進行必要的調(diào)整。如果有已校準pH計,可用pH計。如果沒有,可用精密的pH試紙,再根據(jù)需要用1mol/L氫氧化鈉或1mol/L鹽酸(微調(diào)可用0.1mol/L氫氧化鈉或0.1mol/L鹽酸)調(diào)制所需的pH。培養(yǎng)基的pH一般為7.4~7.6,也有酸性或堿性的。用氫氧化鈉調(diào)整的需要高壓滅菌的培養(yǎng)基,在調(diào)整pH時要調(diào)至高出所需0.1個~0.2個單位,因用氫氧化鈉提哦啊正時,高壓滅菌后,培養(yǎng)基大的pH要降低0.1~0.2。如培養(yǎng)基中含有碳酸鈣成分,可不調(diào)pH。培養(yǎng)基制備器應(yīng)存放于冷暗處,較好能放于普通冰箱內(nèi)。江西Systec培養(yǎng)基制備器
制備培養(yǎng)基的操作要點:體培養(yǎng)基營養(yǎng)成分分布均勻。江西Systec培養(yǎng)基制備器
倒平板:滅菌溶化的培養(yǎng)基冷卻到50℃左右后,倒入無菌干燥的培養(yǎng)皿中。培養(yǎng)基的溫度不能過高,否則容易在培養(yǎng)皿的內(nèi)蓋上形成太多的冷凝水;溫度太低,培養(yǎng)基又容易凝固成塊,無法制成平板。倒平板時,應(yīng)在靠近酒精燈火焰進行,以免外界的雜菌落入平板內(nèi),左手拿培養(yǎng)皿,右手拿三角瓶的底部,用左手的小指和手掌部位把三角瓶的棉塞拔下,灼燒瓶口,用大拇指和食指把培養(yǎng)皿蓋打開一條縫,至瓶口剛好伸入,倒入培養(yǎng)基,以鋪滿底為限,不超過培養(yǎng)皿高度的三分之一,迅速蓋好蓋,放在桌面上,輕輕地轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿,使培養(yǎng)基分布均勻,冷凝后即可。江西Systec培養(yǎng)基制備器