培養(yǎng)基防止污染應(yīng)該注意以下事項:確認(rèn)工作細(xì)胞庫是否被污染,確認(rèn)毒種工作種子批是否被污染,確認(rèn)所用培養(yǎng)基及其添加成分(如小牛血清、NaHCO3等)是否被污染,均可用細(xì)菌、病菌及支原體無菌試驗來確認(rèn)并排除。同時要對無菌試驗培養(yǎng)基的靈敏度進(jìn)行驗證。實際生產(chǎn)中,可以從配制好的培養(yǎng)液中取少量加入營養(yǎng)瓊脂于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),48小時即可觀察有無污染。其它:高壓滅菌設(shè)備、過濾除菌設(shè)備均應(yīng)進(jìn)行驗證,確保滅菌和除菌效果;前者應(yīng)在投產(chǎn)前及其后的每6個月進(jìn)行驗證,后者應(yīng)在每次除菌前、后進(jìn)行驗證工作(至少應(yīng)在除菌后進(jìn)行一次)。另外,應(yīng)將有毒區(qū)與無毒區(qū)嚴(yán)格分開,并有各自自立的空氣凈化系統(tǒng)及孵室,有毒區(qū)對無毒區(qū)應(yīng)保持相對負(fù)壓,防止病毒對培養(yǎng)細(xì)胞(尤其是細(xì)胞庫)的污染。平板培養(yǎng)基要除去冷凝水,否則將影響平板分離培養(yǎng)效果。安徽培養(yǎng)基制備器哪家好
培養(yǎng)基的物理滅菌方法:(一)加熱滅菌法:加熱可破壞微生物中酶、蛋白質(zhì)和核酸,導(dǎo)致微生物死亡。加熱滅菌又分干熱滅菌法和濕熱滅菌法。在同一溫度下,濕熱滅菌的效果比干熱滅菌好。主要是因濕熱滅菌時,有水分存在,蛋白質(zhì)容易變性。水分又易使微生物膜壁潤濕,濕熱的穿透力比干熱大。常用的有火焰滅菌法與干熱空氣滅菌法兩種。(二)紫外線滅菌法:是指用紫外線照射殺滅微生物的方法。一般用于滅菌的紫外線波長是200~300nm,滅菌力較強(qiáng)的波長是253.7nm。紫外線作用于核酸蛋白促使其變性,同時空氣受紫外線照射后產(chǎn)生微量臭氧,從而起共同殺菌作用。紫外線進(jìn)行直線傳播,可被不同的表面反射,穿透力微弱,但較易穿透清潔空氣及純凈的水。甘肅培養(yǎng)基滅菌 培養(yǎng)基制備器培養(yǎng)基,是指供給微生物、植物或動物生長繁殖的,由不同營養(yǎng)物質(zhì)組合配制而成的營養(yǎng)基質(zhì)。
殺毒滅菌方式主要有三種類型:⑴高壓蒸汽滅菌方式,此方法可用于大多數(shù)耐熱培養(yǎng)基。⑵煮沸滅菌法方式:此方法可用于含有不耐高溫物質(zhì)的培養(yǎng)基。⑶過濾除菌方式:過濾除菌,采用無菌技術(shù)定量添加培養(yǎng)基。血液和可以用無菌技術(shù)抽取并加入冷卻至約五十度的培養(yǎng)基中。當(dāng)培養(yǎng)基中含有不耐熱物質(zhì)時可以使用此方法。培養(yǎng)基倒入平板:將滅菌溶化的培養(yǎng)基冷卻至五十度后,倒入無菌干燥的培養(yǎng)皿中。微生物培養(yǎng)基制備的溫度不能太高,否則培養(yǎng)皿內(nèi)蓋容易形成過多的冷凝水。
簡單制作培養(yǎng)基,需要完成以下幾個主要步驟:簡單制作培養(yǎng)基,必須將其過濾并澄清液體介質(zhì)必須完全澄清,普通液體介質(zhì)可用濾紙過濾,濾紙應(yīng)折成折扇狀或漏斗狀,以免濾紙因水力不均而破裂。當(dāng)溫度較高時,培養(yǎng)基可以用干凈的白天鵝絨過濾。新制肉、肝、血、馬鈴薯等濾液,必須用絲絨布過濾,再用濾紙一次又一次地過濾。若過濾方法不能滿足澄清的要求,則應(yīng)采用蛋清過濾。需要對介質(zhì)分類處理,按培養(yǎng)基及試管內(nèi)其它燒瓶使用的容器、用途分為適當(dāng)。貨運(yùn)量超過每2個集裝箱3個容量包裝的要求。封堵也是容器外包,可用防水防潮紙塞紙封堵容器內(nèi)棉。電動式裝配機(jī)采用定量很好的重用或半自動解。預(yù)處理和預(yù)處理對滅菌容器的清洗要干燥,滅菌時要徹底,培養(yǎng)基要干燥。一只小玻璃瓶批培養(yǎng)基被檢測出,培養(yǎng)基被一批pH批作為該值基準(zhǔn)時,應(yīng)被分成20mL的培養(yǎng)基進(jìn)行消毒處理。培養(yǎng)基制備器保證了配制和滅菌的培養(yǎng)基具有更高的質(zhì)量,整個過程,在一個設(shè)定溫度內(nèi)。
馬鈴薯培養(yǎng)基的分裝:1.根據(jù)需要將培養(yǎng)基分裝于不同容量的三角燒瓶、試管中。分裝的量不宜超過容器的2/3以免滅菌時外溢。2.瓊脂斜面分裝量為試管容量的1/5,滅菌后須趁熱放置成斜面,斜面長約為試管長的2/3。3.半固體培養(yǎng)基分裝量約為試管長的1/3,滅菌后直立凝固待用。4.高層瓊脂分裝量約為試管的1/3,滅菌后趁熱直立,待冷后凝固待用。5.液體培養(yǎng)基分裝于試管中,約是試管長度的1/3。6.瓊脂平板:將滅菌(或加熱融化)后的培養(yǎng)基冷至50℃左右,以無菌手續(xù)傾人滅菌平皿內(nèi),內(nèi)徑225px的平皿傾注培養(yǎng)基約13~15ml,輕搖平皿底,使培養(yǎng)基平鋪于平皿底部,待凝固后即成,傾注培養(yǎng)基時,切勿將皿蓋全部啟開,以免空氣中塵埃及細(xì)菌落入新制成的平板培養(yǎng)基(簡稱平板),表面水分較多,不利于細(xì)菌的分離,通常應(yīng)將平皿倒扣擱置于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)約30分鐘待平板平面干燥后使用。培養(yǎng)基制備器各種工作模式預(yù)存五組分配參數(shù)。吉林培養(yǎng)基制備器
液體培養(yǎng)基,固體培養(yǎng)基的對應(yīng)詞,是微生物或動植物細(xì)胞的液狀培養(yǎng)基。安徽培養(yǎng)基制備器哪家好
平板的制備和儲存:傾注融化的培養(yǎng)基到平皿中,使之在平皿中形成厚度至少為3mm(直徑90mm的平皿,通常要加入18mL?20mL瓊脂培養(yǎng)基)。將平皿蓋好皿蓋后放到水平平面使瓊脂冷卻凝固。如果平板需儲存,或者培養(yǎng)時間超過48h或培養(yǎng)溫度高于40℃,則需要傾注更多的培養(yǎng)基。凝固后的培養(yǎng)基應(yīng)立即使用或存放于暗處和(或)5±3℃冰箱的密封袋中,以防止培養(yǎng)基成分的改變。在平板底部或側(cè)邊做好標(biāo)記,標(biāo)記的內(nèi)容包括名稱、制備日期和(或)有效期。也可使用適宜的培養(yǎng)基編碼系統(tǒng)進(jìn)行標(biāo)記。將倒好的平板放在密封的袋子中冷藏保存可延長儲存期限。為了避免冷凝水的產(chǎn)生,平板應(yīng)冷卻后再裝入袋中。儲存前不要對培養(yǎng)基表面進(jìn)行干燥處理。對于采用表面接種形式培養(yǎng)的固體培養(yǎng)基,應(yīng)先對瓊脂表面進(jìn)行干燥:揭開平皿蓋,將平板倒扣于烘箱或培養(yǎng)箱中(溫度設(shè)為25~50℃);或放在有對流的無菌凈化臺中,直到培養(yǎng)基表面的水滴消失為止。注意不要過度干燥。商品化的平板瓊脂培養(yǎng)基應(yīng)按照廠商提供的說明使用。安徽培養(yǎng)基制備器哪家好