培養(yǎng)基的稱量和溶解:小心稱量所需量的脫水合成培養(yǎng)基(必要時佩戴口罩或在通風柜中操作,以防吸入含有有毒物質(zhì)的培養(yǎng)基粉末),先加入適量的水,充分混合(注意避免培養(yǎng)基結(jié)塊),然后加水至所需的量后適當加熱,并重復或連續(xù)攪拌使其快速分散,必要時應完全溶解。含瓊脂的培養(yǎng)基在加熱前應浸泡幾分鐘。注意:培養(yǎng)基的加熱溶解或高溫滅菌盛放使用的容器不得為銅鍋或鐵鍋,以防有微量銅或鐵混入培養(yǎng)基中,使細菌不易生長。較好使用不銹鋼鍋加熱溶化,可放入大燒杯或大燒瓶中置高壓蒸汽滅菌器或流動蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在鍋中溶化時、可先用溫水加熱并隨時攪動、以防焦化、如發(fā)現(xiàn)有焦化現(xiàn)象、該培養(yǎng)基即不能使用,應重新制備。培養(yǎng)自養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基應由簡單的無機物組成。中國香港觸摸屏培養(yǎng)基制備器
培養(yǎng)基的類型:1、根據(jù)對培養(yǎng)基組成物質(zhì)的化學成分是否完全了解來區(qū)分,可以將培養(yǎng)基分為天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基和半合成培養(yǎng)基。(1)天然培養(yǎng)基:天然培養(yǎng)基是指利用各種動、植物或微生物的原料,其成分難以確切知道。用作這種培養(yǎng)基的主要原料有:牛肉膏、麥芽汁、蛋白胨、酵母膏、玉米粉、麩皮、各種餅粉、馬鈴薯、牛奶、血清等。用這些物質(zhì)配成的培養(yǎng)基雖然不能確切知道它的化學成分,但一般來講,營養(yǎng)是比較豐富的,微生物生長旺盛,而且來源多方面,配制方便,所以較為常用,尤其適合于配制實驗室常用的培養(yǎng)基。這種培養(yǎng)基的穩(wěn)定性常受生產(chǎn)廠或批號等因素的影響。(2)合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基是一類化學成分和數(shù)量完全知道的培養(yǎng)基,它是用已知化學成分的化學藥品配制而成。這類培養(yǎng)基化學成分精確、重復性強,但價格昂貴,而微生物又生長緩慢,所以它只適用于做一些科學研究,例如營養(yǎng)、代謝的研究。(3)半合成培養(yǎng)基。西藏全自動培養(yǎng)基制備器培養(yǎng)基制備器解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。
制作牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基:(1)方法步驟:計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。(2)倒平板操作的步驟:①將滅過菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上,右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶,左手拔出棉塞。②右手拿錐形瓶,將瓶口迅速通過火焰。③用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙,右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基(約10~20mL)倒入培養(yǎng)皿,左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋。④等待平板冷卻凝固,大約需5~10min。然后,將平板倒過來放置,使培養(yǎng)皿蓋在下、皿底在上。倒平板操作的討論1.培養(yǎng)基滅菌后,需要冷卻到50℃左右時,才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度?提示:可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶,感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時,就可以進行倒平板了。
馬鈴薯培養(yǎng)基的制作過程:(1)稱量和熬煮:按培養(yǎng)基配方逐一稱取去皮土豆。土豆切成小塊放入鍋中,加水1000ml,在加熱器上加熱至沸騰,維持20-30min,用可用2層紗布趁熱在量杯上過濾,濾渣棄取。濾液補充水分到1000ml。(2)加熱溶解:把濾液放入鍋中,加入葡萄糖20g,瓊脂15~20g(提前搞碎),然后放在石棉網(wǎng)上,小火加熱,并用玻棒不斷攪拌,以防瓊脂糊底或溢出,待瓊脂完全溶解后,再補充水分至所需量。(3)分裝:按實訓要求,將配制的培養(yǎng)基分裝入試管或500ml三角瓶內(nèi)。分裝時可用三角漏斗以免使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上造成污染。分裝量:固體培養(yǎng)基約為試管高度的1/5,滅菌后制成斜面,分裝入三角瓶內(nèi)以不超過其容積的一半為宜;半固體培養(yǎng)基以試管高度的1/3為宜,滅菌后垂直待凝。(4)加棉塞:培養(yǎng)基分裝完畢后,在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞或試管帽等),以阻止外界微生物進入培養(yǎng)基內(nèi)造成污染,并保證有良好的通氣性能。培養(yǎng)基制備器全自動控制程序,確保內(nèi)部溫度均一。
對LST(月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯)培養(yǎng)基進行滅菌時,有時發(fā)酵管內(nèi)會有氣泡。為防止發(fā)酵管內(nèi)產(chǎn)生氣泡,可以采取以下幾項措施:(1)小倒管浸滿培養(yǎng)基(不留氣泡)后再加入到盛LST的試管中。(2)滅菌鍋關(guān)閉放氣閥前,將鍋內(nèi)氣體排干凈。(3)試管塞不要塞得太緊(使用硅膠塞的時候),勿使用橡皮塞。(4)不要過早打開滅菌鍋,要等滅菌鍋內(nèi)氣體和溫度都降到與室溫一致或相差不大時再打開滅菌鍋。如果以上情況都做到還有氣泡,可用水做培養(yǎng)基組的對照試驗,若培養(yǎng)基組有氣泡,而對照組沒有氣泡,可確定是培養(yǎng)基自身的原因。全自動培養(yǎng)基制備儀主要特點:保證細菌不被引入容器中。中國香港觸摸屏培養(yǎng)基制備器
培養(yǎng)基根據(jù)物理狀態(tài)可分為固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基。中國香港觸摸屏培養(yǎng)基制備器
培養(yǎng)基的配置應該注意的幾大步驟:常用玻璃儀器的準備制備培養(yǎng)基所用的吸管、錐形瓶、毛細吸管、平皿等玻璃儀器用前要用肥皂水洗刷后用清水沖洗干凈,晾干后備用。(1)平皿用紙或布包好,或裝在金屬盒內(nèi),于121℃高壓蒸汽菌3min后烘干,備用。(2)試管管口用棉花塞或硅氟塑料試管塞塞好,再用布或報紙包扎好,121℃高壓蒸汽滅菌20℃后烘干,備用。(3)吸管及滴管先用少許棉花塞于吸口端(防止污染物吸出,或橡皮帽內(nèi)的氣體污染),然后用紙包后或裝入金屬吸管筒內(nèi),于121℃高壓蒸汽滅菌20min后烘干,備用。其他玻璃器皿均應按上法處理,也應裝金屬筒內(nèi)160℃干熱滅菌2h后,備用。中國香港觸摸屏培養(yǎng)基制備器