培養(yǎng)基的性能測(cè)試:1.外觀控制:制備好的培養(yǎng)基應(yīng)有相應(yīng)的顏色,一般的培養(yǎng)基應(yīng)澄清、無(wú)渾濁、無(wú)沉淀。使用前應(yīng)檢查培養(yǎng)基的顏色是否發(fā)生變化,是否蒸發(fā)/脫水。2.污染控制:從每批制備好的培養(yǎng)基中選取部分進(jìn)行污染測(cè)試(無(wú)菌試驗(yàn)),確定無(wú)微生物生長(zhǎng)方可使用。3.性能測(cè)試:(1)測(cè)試菌株選擇:測(cè)試菌株是具有其表示種的穩(wěn)定特性并能有效證明實(shí)驗(yàn)室特定培養(yǎng)基較佳性能的一套菌株。(3)半定量測(cè)試方法(改進(jìn)的劃線法接種法)。(4)定性測(cè)試方法(平板接種觀察法)。用接種環(huán)取測(cè)試菌培養(yǎng)物,在測(cè)試培養(yǎng)基表面劃平行直線。培養(yǎng)基制備器是供微生物、植物、動(dòng)物組織和細(xì)菌生長(zhǎng)和維持生長(zhǎng)用的人工配置的養(yǎng)料。江蘇全自動(dòng)培養(yǎng)基制備器
培養(yǎng)基的儲(chǔ)存:干粉培養(yǎng)基應(yīng)保存在陰涼干燥處,要避免陽(yáng)光直射;未開(kāi)瓶的培養(yǎng)基在室溫下的較長(zhǎng)保存2年,開(kāi)瓶后的干粉培養(yǎng)基易吸濕,應(yīng)注意防潮并在6個(gè)月內(nèi)用完。應(yīng)定期對(duì)儲(chǔ)存中的培養(yǎng)基進(jìn)行常規(guī)檢查,如容器密閉性復(fù)查、一次開(kāi)封日期、內(nèi)容物的感官檢查,如果培養(yǎng)基發(fā)生結(jié)塊、顏色異常和其他變質(zhì)跡象就不能再使用。培養(yǎng)基的制備和使用是微生物實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作的重要環(huán)節(jié),培養(yǎng)基自身質(zhì)量的優(yōu)劣、保存是否得當(dāng)、配制使用是否正確等都直接影響到檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。吉林全自動(dòng)培養(yǎng)基制備器培養(yǎng)基制備器完全稱取完畢后,還應(yīng)進(jìn)行一次檢查。
微生物檢驗(yàn)培養(yǎng)基制備的要點(diǎn):培養(yǎng)基分裝,準(zhǔn)備好的中.海培養(yǎng)基根據(jù)用途不同分為燒瓶、試管等容器,分裝試管量大采用自動(dòng)分液器,分裝試管量小,可以用漏斗分液。分液量不超過(guò)容器體積的三分之二。三角瓶不要超過(guò)體積的二分之一;瓊脂斜面不要超過(guò)試管長(zhǎng)度的五分之一。滅菌后斜面應(yīng)為培養(yǎng)基量的三分之一,底層應(yīng)為培養(yǎng)基量的三分之二;半固態(tài)瓊脂的體積為三分之一;用于接種或保護(hù)細(xì)菌的高級(jí)瓊脂,分裝試管長(zhǎng)度的三分之一和四分之一,接種厭氧菌的量應(yīng)達(dá)到三分之二;瓊脂平板90毫米內(nèi)徑13~15毫升,內(nèi)徑70毫米8~10毫升。如果瓊脂平板表面較水,可將平板倒置,置于37℃培養(yǎng)箱中三十分鐘,晾干后使用。每批培養(yǎng)基分裝在二十毫升左右的小玻璃瓶中,與該批培養(yǎng)基同時(shí)滅菌,在以確定這批培養(yǎng)基的很終pH值。
培養(yǎng)基滅菌方法有哪五種類型:1、輻射滅菌原理方法:輻射滅菌原理:是用高能電磁輻射和細(xì)菌核酸的光化學(xué)反應(yīng)引起細(xì)菌死亡。常用的是紫外線,X射線和伽馬射線。主要用于室內(nèi)空氣和器皿的表面消毒。2、干熱滅菌原理方法:干熱滅菌原理:是采用高溫氧化微生物,使蛋白質(zhì)變性并濃縮電解質(zhì)以殺死微生物。3、化藥滅菌原理方法,化藥滅菌原理:使用化藥與微生物細(xì)胞中的成分發(fā)生反應(yīng),從而使蛋白質(zhì)變性酶失活。4、過(guò)濾滅菌原理方法:過(guò)濾滅菌原理:是使用不能滲透的微生物濾膜進(jìn)行滅菌。使用方法是使用0.01-0.45毫米的細(xì)孔濾膜對(duì)壓縮空氣,酶溶液和其他對(duì)熱不穩(wěn)定的復(fù)合溶液進(jìn)行滅菌。5、濕熱滅菌原理方法:在工業(yè)生產(chǎn)中,用于滅菌對(duì)于培養(yǎng)基,管道和設(shè)備,通常將蒸汽加熱到一定溫度并保持一段時(shí)間,這稱為濕熱滅菌。濕熱滅菌原理:是直接用蒸汽進(jìn)行滅菌。蒸汽冷凝后會(huì)釋放出大量潛熱。蒸汽具有強(qiáng)大的穿透力,破壞細(xì)菌蛋白質(zhì)和核酸的化學(xué)鍵,使酶失活并殺死由于代謝紊亂引起的微生物。全自動(dòng)培養(yǎng)基制備分裝系統(tǒng):一鍵選擇培養(yǎng)皿類型;整合數(shù)據(jù)庫(kù),預(yù)設(shè)培養(yǎng)皿尺寸選擇程序。
培養(yǎng)基配置原則:控制pH條件,培養(yǎng)基的pH必須控制在一定的范圍內(nèi),以滿足不同類型微生物的生長(zhǎng)繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物。各類微生物生長(zhǎng)繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物的很適pH條件各不相同,一般來(lái)講,細(xì)菌與放線菌適于在pH7-7.5范圍內(nèi)生長(zhǎng),酵母菌和霉菌通常在pH4.5-6范圍內(nèi)生長(zhǎng)。值得注意的是,在微生物生長(zhǎng)繁殖和代謝過(guò)程中,由于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)被分解利用和代謝產(chǎn)物的形成與積累,會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基pH發(fā)生變化,若不對(duì)培養(yǎng)基pH條件進(jìn)行控制,往往導(dǎo)致微生物生長(zhǎng)速度下降或(和)代謝產(chǎn)物產(chǎn)量下降。因此,為了維持培養(yǎng)基pH的相對(duì)恒定,通常在培養(yǎng)基中加入pH緩沖劑,常用的緩沖劑是一氫和二氫磷酸鹽(如KH2PO4和K2HPO4)組成的混合物。K2HPO4溶液呈堿性,KH2PO4溶液呈酸性,兩種物質(zhì)的等量混合溶液的pH為6.8。同一種培養(yǎng)基的配方在不同著作中常會(huì)有某些差別。江蘇全自動(dòng)培養(yǎng)基制備器
培養(yǎng)基pH值的調(diào)正:pH因培養(yǎng)基在加熱消毒過(guò)程中、pH會(huì)有所變化。江蘇全自動(dòng)培養(yǎng)基制備器
高壓滅菌造成培養(yǎng)基結(jié)焦焦化問(wèn)題:在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,檢測(cè)人員發(fā)現(xiàn)在高壓滅菌后的培養(yǎng)基有結(jié)焦焦化現(xiàn)象。微生物認(rèn)為造成這種現(xiàn)象是:控制培養(yǎng)基在容器中不要超過(guò)百分之八十,避免填充過(guò)多。注意控制高壓滅菌時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(115-116度)二十分鐘即可,溫度不超過(guò)121度,而且滅菌后的培養(yǎng)基在高溫環(huán)境中不要長(zhǎng)時(shí)間存放。以上原因都會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基結(jié)焦焦化。貯存:培養(yǎng)基在30℃下放置1天,無(wú)污染的即可使用。一般用牛皮紙包裹好存放于2-8℃冰箱中備用。江蘇全自動(dòng)培養(yǎng)基制備器