微生物檢驗培養(yǎng)基制備的要點:培養(yǎng)基溶化,將中海培養(yǎng)基納入燒杯容器中,加小適量的水,緩慢加水并用玻璃棒小幅度攪拌。倘若培養(yǎng)基中不含瓊脂,則不需要對培養(yǎng)基加熱;相反含有瓊脂,就需要用本生燈/電磁爐加熱煮沸。待培養(yǎng)基完全溶解后再加入適量的水攪拌均勻。如準備的北京中海培養(yǎng)基較多,在不銹鋼鍋中融化加熱,可以用溫水加熱,需不停攪拌,防止焦化。如果不小心出現(xiàn)焦化現(xiàn)象,則制備好的培養(yǎng)基將無法使用,必須重新配制中海生物培養(yǎng)基。不要使用銅或鐵容器溶解制備培養(yǎng)基,因為銅或鐵容器可能會導(dǎo)致容器內(nèi)培養(yǎng)基中銅、鐵超標,影響實驗結(jié)果,其中培養(yǎng)基中銅含量大于0.3毫克每升,細菌不適宜生長。鐵含量超過0.14毫克每升,防止細菌產(chǎn)生有毒的。容易發(fā)生反應(yīng)和沉淀的藥物應(yīng)單獨溶解,然后加入培養(yǎng)基中,如磷酸氫二鉀和硫酸鎂。天然培養(yǎng)基是指一類利用動物、植物或微生物體包括其提取物制成的培養(yǎng)基。山東自動攪拌培養(yǎng)基制備器
培養(yǎng)基的安全分裝:無菌補料:通過分裝口可以定量添加無菌添加劑。大尺寸的分裝口帶有安全鎖。通過使用一個瓶子將添加劑添加到分裝開口或通過一個septum膜,使用注射器將添加劑加入,確保了添加劑的無菌添加。無菌分裝:培養(yǎng)基制備器的分裝口可以在分裝的時候打開,用于無菌分裝培養(yǎng)基。硅膠管是使用分裝接頭連接到分裝口。為了確保培養(yǎng)基的無菌分裝,硅膠管和分裝接頭必須提前在滅菌器中滅菌。培養(yǎng)基可以通過集成的空壓機產(chǎn)生的無菌空氣壓力分裝或通過連接到常見的蠕動泵或其他集成成泵的裝置,來進行培養(yǎng)基的分裝。分裝選項:制備和滅菌過的培養(yǎng)基可以通過一個軟管進行分裝。在每次滅菌進程中,內(nèi)吸管和分裝口也通過進入的蒸汽進行了滅菌。分裝軟管和連接到該軟管的分裝接頭必須使用合適的蒸汽滅菌工藝預(yù)先滅菌,并且必須在無菌條件下連接到分裝口。海南實驗室培養(yǎng)基制備器固體培養(yǎng)基,一類配制成的固體狀態(tài)的基質(zhì)。
培養(yǎng)基制備器-培養(yǎng)基使用規(guī)程:1.目的:規(guī)范本中心微生物實驗室培養(yǎng)基的使用和管理。2.適用范圍,本規(guī)程適用于培養(yǎng)基的儲存、融化和廢棄等。3.職責(zé),3.1檢驗人員:按照本規(guī)程規(guī)范使用培養(yǎng)基、定期檢查培養(yǎng)基是否失效。3.2科室負責(zé)人:負責(zé)指導(dǎo)、監(jiān)督檢驗人員規(guī)范使用培養(yǎng)基。4.使用程序,4.1培養(yǎng)基的儲存,4.1.1除特殊說明和標準規(guī)定,通常情況下基礎(chǔ)培養(yǎng)基(如營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基)應(yīng)在4℃冰箱中保存不超過3個月,或在室溫(20℃)下保存不超過一個月。
培養(yǎng)基配置原則:選擇適宜的營養(yǎng)物質(zhì),總體而言,所有微生物生長繁殖均需要培養(yǎng)基含有碳源、氮源、無機鹽、生長因子、水及能源,但由于微生物營養(yǎng)類型復(fù)雜,不同微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的需求是不一樣的,因此首先要根據(jù)不同微生物的營養(yǎng)需求配制針對性強的培養(yǎng)基。自養(yǎng)型微生物能從簡單的無機物合成自身需要的糖類、脂類、蛋白質(zhì)、核酸、維生素等復(fù)雜的有機物,因此培養(yǎng)自養(yǎng)型微生物的培養(yǎng)基完全可以(或應(yīng)該)由簡單的無機物組成。在該培養(yǎng)基配制過程中并未專門加入其他碳源物質(zhì),而是依靠空氣中和溶于水中的CO2為氧化硫硫桿菌提供碳源。就微生物主要類型而言,有細菌、放線菌、酵母菌、霉菌、原生動物、藻類及病毒之分,培養(yǎng)它們所需的培養(yǎng)基各不相同。在實驗室中常用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基(或簡稱普通肉湯培養(yǎng)基)培養(yǎng)細菌,用高氏I號合成培養(yǎng)基培養(yǎng)放線菌,培養(yǎng)酵母菌一般用麥芽汁培養(yǎng)基,培養(yǎng)霉菌則一般用查氏合成培養(yǎng)基。配制培養(yǎng)基的原則:根據(jù)培養(yǎng)目的需要選擇適宜的營養(yǎng)物質(zhì)。
液體培養(yǎng)基,固體培養(yǎng)基的對應(yīng)詞,是微生物或動植物細胞的液狀培養(yǎng)基。它具有進行通氣培養(yǎng)、振蕩培養(yǎng)的優(yōu)點。在靜止的條件下,在菌體或培養(yǎng)細胞的周圍,形成透過養(yǎng)分的壁障,養(yǎng)分的攝入受到阻礙。由于在通氣或在振蕩的條件下,可消除這種阻礙以及增加供氧量,所以有利于細胞生長,提高生產(chǎn)量。培養(yǎng)基的配制:配料:配方換算→在容器中加入少量水→按照配方稱取各種藥品,依次加入→加足所需水量一藥一勺,取藥后立即蓋上瓶蓋。溶解:淀粉溶解:少量冷水調(diào)成糊狀,加熱溶解,特別是加有瓊脂的培養(yǎng)基,一定要煮沸,瓊脂的熔解溫度95~97℃,且需要邊加熱邊攪拌以防止燒焦。調(diào)PH:用1N的鹽酸或的1NNaOH把培養(yǎng)基調(diào)節(jié)到所要求的值。過濾:濾紙或棉花進行過濾。培養(yǎng)基的實驗室制備:正確制備培養(yǎng)基時微生物檢驗的較基礎(chǔ)步驟之一。自動攪拌培養(yǎng)基制備器品牌
培養(yǎng)基制備器注意不要過度干燥。商品化的平板瓊脂培養(yǎng)基應(yīng)按照廠商提供的說明使用。山東自動攪拌培養(yǎng)基制備器
在制備培養(yǎng)基時,通常要考慮以下因素:1.緩沖能力碳算鹽緩沖系統(tǒng)由于毒性小、成本低、對培養(yǎng)物有營養(yǎng)作用,因此比其他緩沖系統(tǒng)用得多。在pH值條件下的緩沖能力差。2.滲透壓多數(shù)培養(yǎng)細胞對滲透壓有很寬的耐受范圍,一般常用冰點降低或蒸汽壓升高測定。如果自己配培養(yǎng)基,可通過測定滲透壓防止3.粘度培養(yǎng)基的粘度主要受血清含量的影響,在多數(shù)情況下,對細胞生長沒有什么影響。在攪拌條件下,用羧甲基纖維素增加培養(yǎng)基的粘度,可減輕細胞損害。這對在低血清濃度或無血清下條件下培養(yǎng)細胞顯得尤為重要。山東自動攪拌培養(yǎng)基制備器