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芬蘭高通量全自動(dòng)膜片鉗高阻抗封接

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2025-01-10

膜片鉗技術(shù):從一小片膜(約幾平方微米)上獲取電子信息的技術(shù),即保持跨膜電壓恒壓箝位的技術(shù),從而測(cè)量通過(guò)膜的離子電流。通過(guò)研究離子通道中的離子流動(dòng),可以了解離子輸運(yùn)、信號(hào)傳遞等信息?;驹?利用負(fù)反饋電子電路,將前排微電極吸附的細(xì)胞膜電位固定在一定水平,動(dòng)態(tài)或靜態(tài)觀察通過(guò)通道的微小離子電流,從而研究其功能。一種研究離子通道的電生理技術(shù)是施加負(fù)壓,使玻璃微電極前沿(開(kāi)口直徑約1μm)與細(xì)胞膜緊密接觸,形成高阻抗密封,可以準(zhǔn)確記錄離子通道的微小電流??芍苽涑扇N單通道記錄模式:細(xì)胞貼附、內(nèi)面向外、外面向內(nèi),以及另一種多通道全細(xì)胞記錄模式。膜片鉗技術(shù)實(shí)現(xiàn)了小膜的隔離和高阻密封的形成。由于高阻密封,背景噪聲水平降低,記錄頻帶范圍相對(duì)變寬,分辨率提高。此外,它還具有良好的機(jī)械穩(wěn)定性和化學(xué)絕緣性。小膜隔離使得研究單個(gè)離子通道成為可能。離子通道研究,從膜片鉗開(kāi)始,開(kāi)啟科學(xué)探索之旅!芬蘭高通量全自動(dòng)膜片鉗高阻抗封接

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膜片鉗放大器是整個(gè)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)中的主要,它可用來(lái)作單通道或全細(xì)胞記錄,其工作模式可以是電壓鉗,也可以是電流鉗。從原理來(lái)說(shuō),膜片鉗放大器的探頭電路即I-V變換器有兩種基本結(jié)構(gòu)形式,即電阻反饋式和電容反饋式,前者是一種典型的結(jié)構(gòu),后者因用反饋電容取代了反饋電阻,降低了噪聲,所以特別適合較低噪聲的單通道記錄。由于供膜片鉗實(shí)驗(yàn)的專(zhuān)門(mén)的計(jì)算機(jī)硬件及相應(yīng)的軟件程序的相繼出現(xiàn),使得膜片鉗實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)便、效率提高、效率提高滔博生物TOP-Bright專(zhuān)注基于多種離子通道靶點(diǎn)的化合物體外篩選,服務(wù)于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果,專(zhuān)業(yè)團(tuán)隊(duì),7*31小時(shí)隨時(shí)人工在線咨詢.進(jìn)口雙分子層膜片鉗解決方案不同的全自動(dòng)膜片鉗技術(shù)所采用的原理也不完全相同。

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全細(xì)胞膜片鉗記錄(whole-cellpatch-clamprecording)是應(yīng)用*早,也是*廣的鉗位技術(shù),它相當(dāng)于連續(xù)的單電極電壓鉗位記錄,也就是說(shuō)全細(xì)胞記錄類(lèi)似于傳統(tǒng)的細(xì)胞內(nèi)記錄,但它具有更大的優(yōu)越性,如高分辨率、低噪聲、極好的穩(wěn)定性以及能控制細(xì)胞內(nèi)的成分等。全細(xì)胞記錄技采測(cè)定的是一個(gè)細(xì)胞內(nèi)全部**通道的電流,記錄過(guò)程中電極的溶液取代了原細(xì)胞質(zhì)的成分。雖然膜片鉗記錄技術(shù)與*初的單電極電壓鉗位相比進(jìn)步了很多,尤其在單離子通道鉗位記錄方面,細(xì)胞或腦片的組織選擇及實(shí)驗(yàn)溶液的制備仍然是很重要的步驟。滔博生物TOP-Bright專(zhuān)注基于多種離子通道靶點(diǎn)的化合物體外篩選,服務(wù)于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果,專(zhuān)業(yè)團(tuán)隊(duì),7*45小時(shí)隨時(shí)人工在線咨詢.

膜片鉗技術(shù)實(shí)現(xiàn)了小片膜的孤立和高阻封接的形成,由于高阻封接使背景噪聲水平降低,相對(duì)地增寬了記錄頻帶范圍,提高了分辨率。另外,它還具有良好的機(jī)械穩(wěn)定性和化學(xué)絕緣性。而小片膜的孤立使對(duì)單個(gè)離子通道進(jìn)行研究成為可能。單通道電流1.典型的單通道電流呈一種振幅相同而持續(xù)時(shí)間不等的脈沖樣變化。他有兩個(gè)電導(dǎo)水平,即O和1,分別對(duì)應(yīng)通道的關(guān)閉和開(kāi)效狀態(tài)。2.有的矩形脈沖簇狀發(fā)放時(shí),通道電流不在同一水平,可以明顯觀察到不同數(shù)目離子通道所形成的電流臺(tái)階,從而可推斷出被測(cè)膜片的通道數(shù)目。3.有的通道可記錄到圓滑型和方波形兩種形式。4.有些通道開(kāi)放活動(dòng)是持續(xù)開(kāi)放,中間被閃動(dòng)樣的關(guān)閉所中斷,形成burst開(kāi)放。有些通道開(kāi)放活動(dòng)是簇狀開(kāi)放與短期平靜交替出現(xiàn),形成簇狀發(fā)放串(Cluster)全自動(dòng)膜片鉗技術(shù)采用的標(biāo)本必須是懸浮細(xì)胞,像腦片這類(lèi)標(biāo)本無(wú)法采用。

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膜片鉗技術(shù)的建立。拋光并填充玻璃管微電極,并將其固定在電極支架中。2.通過(guò)與電極支架連接的導(dǎo)管向微電極施加壓力,直到電極浸入記錄槽溶液中。3.當(dāng)電極浸入溶液中時(shí),給電極一個(gè)測(cè)量脈沖(命令電壓,如5-10ms,10mV)讀取電流,根據(jù)歐姆定律計(jì)算電阻。4.通過(guò)膜片鉗放大器的控制鍵將微電極前端的連接電位調(diào)至零。這種電勢(shì)差是由電極中的填充溶液和浸浴之間的不同離子成分的遷移引起的。5.用顯微操作器將微電極前緣靠近直視下待記錄的細(xì)胞表面,觀察電流的變化,直至阻抗達(dá)到1gω以上,形成“干封”6。將靜息膜電位調(diào)整到預(yù)期的鉗制電壓水平,這樣當(dāng)細(xì)胞沒(méi)有鉗制到零時(shí),放大器可以從“搜索”變?yōu)椤半妷恒Q制”。封接是膜片鉗記錄的關(guān)鍵步驟之一。細(xì)胞膜片鉗單細(xì)胞

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ePatch的設(shè)計(jì)的一些亮點(diǎn)還包括:可以在軟件中伴隨數(shù)據(jù)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)記錄,你不用再專(zhuān)門(mén)拿一個(gè)實(shí)驗(yàn)記錄本了,也不用再擔(dān)心本本上記錄的內(nèi)容找不到對(duì)應(yīng)的數(shù)據(jù)了,系統(tǒng)會(huì)把他們一一對(duì)應(yīng)起來(lái)。電壓電流刺激模式的編輯更為傻瓜,眾多的模塊,直接拖拽就可以,還伴隨著示例圖,讓你對(duì)你編輯的程序一目了然。實(shí)時(shí)的全細(xì)胞參數(shù)估算,包括封接電阻,膜電容,膜電阻等重要參數(shù)強(qiáng)大的在線分析功能,包括電壓鉗模式下的I/Vgraph,eventdetection,F(xiàn)FT,以及電流鉗模式下的APthresholddetection,APfrequency,APslope等數(shù)據(jù)可保存成多種格式,你要是個(gè)程序達(dá)人,可以支持使用Matlab進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,如果沒(méi)有這樣的經(jīng)驗(yàn)也沒(méi)有問(wèn)題,數(shù)據(jù)可以保存成.abf用的Clampfit直接分析。滔博生物TOP-Bright專(zhuān)注基于多種離子通道靶點(diǎn)的化合物體外篩選,服務(wù)于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果,專(zhuān)業(yè)團(tuán)隊(duì),7*60小時(shí)隨時(shí)人工在線咨詢.芬蘭高通量全自動(dòng)膜片鉗高阻抗封接