體外動物細胞培養(yǎng)時需要大量谷氨酰胺,利用量常超過其他必須氨基酸利用量的總和。維生素是維持細胞生長的生物活性物質(zhì),在細胞代謝中起調(diào)節(jié)及控制作用。維生素可分為水溶性和脂溶性兩類,水溶性維生素主要包括泛酸、維生素B12、葉酸、煙酰胺、吡哆醛、硫胺素、核黃素、維生素C、膽堿、肌醇等;脂溶性維生素主要包括維生素A、D、E、K等;有的培養(yǎng)液中還直接采用ATP和輔酶A;大部分培養(yǎng)基中還有生物素。許多維生素參與構(gòu)成各種酶的活性基團的成分,沒有它們,酶便沒有活性,代謝活動將無法進行。比如,泛酸可以在細胞內(nèi)轉(zhuǎn)變成酰基載體蛋白和輔酶(如輔酶A),參與糖類、脂類和蛋白質(zhì)代謝中的催化反應(yīng);維生素B12則在細胞內(nèi)參與葉酸的合成和脂肪酸的合成等。不同配方的細胞培養(yǎng)基中維生素的濃度有較大差異。例如,DMEM培養(yǎng)基中維生素的含量約為MEM培養(yǎng)基的兩倍,其原因是一方面不同種類維生素的作用不同,另一方面不同種類的細胞對維生素的需求也可能有較大差異,相應(yīng)細胞培養(yǎng)基的配方中維生素的含量也可能不同。無機鹽是細胞維持生命活動所不可缺少的營養(yǎng)成分,主要有Na+、K+、Ca2+、Mg2+、Cl-、PO43—、SO42—、HCO3-等,主要作用為維持細胞培養(yǎng)液滲透壓平衡。減血清培養(yǎng)基減少了血清對細胞培養(yǎng)的干擾。廣東DMEM/F12培養(yǎng)基哪個好
培養(yǎng)實例7和對比培養(yǎng)例7的誘導(dǎo)結(jié)果比較::用上述方法進行水稻成熟胚愈傷**誘導(dǎo)時,cs誘導(dǎo)培養(yǎng)基與ms誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)出的愈傷**形態(tài)大小均相近,出愈率均為100%。如圖7所示。培養(yǎng)實例8:液體培養(yǎng)基在植物水培中的應(yīng)用(1)用不同ph的超純水配制的液體培養(yǎng)基ph值穩(wěn)定性比較:a、用不同ph的超純水配制液體培養(yǎng)基:通常多種因素會導(dǎo)致相同超純水制水機產(chǎn)出的超純水ph變動較大,ph通常為。分別選取ph為、、、、、,分別配制ms液體培養(yǎng)基、cs液體培養(yǎng)基、1/2ms液體培養(yǎng)基、1/2cs液體培養(yǎng)基,制作方法為:ms液體培養(yǎng)基為取ms基本培養(yǎng)基置于不同ph的超純水中溶解并定容至1l;cs液體培養(yǎng)基為取cs基本培養(yǎng)基置于不同ph的超純水中溶解并定容至1l;1/2ms液體培養(yǎng)基為取1/2ms基本培養(yǎng)基置于不同ph的超純水中溶解并定容至1l;1/2cs液體培養(yǎng)基為取1/2cs基本培養(yǎng)基置于不同ph的超純水中溶解并定容至1l。b、結(jié)果為:用ph為,ms液體培養(yǎng)基ph為,cs液體培養(yǎng)基ph為,1/2ms液體培養(yǎng)基ph為,1/2cs液體培養(yǎng)基ph為。植物**適宜生長的ph一般為,觀察可知,ms液體培養(yǎng)基及1/2ms液體培養(yǎng)基的ph偏酸性且波動較大,其應(yīng)用于液體培養(yǎng)基時通常需要調(diào)節(jié)ph,過程繁瑣,相比之下。浙江DMEM/F12培養(yǎng)基哪家便宜無酚紅培養(yǎng)基在敏感細胞系的培養(yǎng)中表現(xiàn)優(yōu)越。
K+主要分布在細胞內(nèi)液,細胞內(nèi)K+對于***某些酶是必需的,并在調(diào)節(jié)細胞內(nèi)環(huán)境的酸堿平衡上也有極重要意義。Ca2+在細胞外液中的作用是將**內(nèi)部細胞之間相互粘著,在細胞內(nèi)參與許多重要的細胞生理活動,如傳導(dǎo)、參與肌肉細胞收縮等。在懸浮培養(yǎng)時,為了減少細胞的聚集和附著,要減少Ca2+的濃度。Mg2+是構(gòu)成細胞間質(zhì)的重要成分,對于細胞間相互穩(wěn)定結(jié)合有很重要的意義。磷的化合物對細胞物質(zhì)代謝和生理功能調(diào)控有重要作用。其他成分:肽、核苷、嘌呤等??蓭椭毎目寺』囵B(yǎng)及維持某些特殊細胞系的生長。分類低血清細胞培養(yǎng)基概述營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基是維持細胞活性及高密度生長的基礎(chǔ),營養(yǎng)缺乏容易引起細胞凋亡,新生牛血清中所含大部分營養(yǎng)成分可以通過化學(xué)成分明確的營養(yǎng)物質(zhì)如氨基酸維生素等成分組合取代。低血清培養(yǎng)基營養(yǎng)成分大優(yōu)于基礎(chǔ)培養(yǎng)基,*需添加1%~5%新生牛血清,而對細胞生長、增殖、形態(tài)、活性和功能沒有影響甚至有所改善。在國外低血清培養(yǎng)基早已有之,如Gibco等。但是他們的低血清培養(yǎng)基是在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中選擇性的加入重組胰島素(recombinantinsulin)、人源轉(zhuǎn)鐵蛋白(human(holo)tran-sferrin)以及牛血清白蛋白等,有些還包含一些生長因子。
發(fā)酵培養(yǎng)基為:葡萄糖80g/l,酵母浸膏20g/l,k2hpo42g/l,mgso4·7h2o50mg/l,cecl30-40mg/l,mnso4·h2o3mg/l,feso4·7h2o3mg/l,vb110mg/l,生物素7μg/l;發(fā)酵工藝同實施例1,100l發(fā)酵罐中含有70l發(fā)酵培養(yǎng)基。設(shè)置cecl3的添加濃度為0,,如圖1-2所示,隨著cecl3添加量的增加,菌體濃度和谷氨酸含量均有所提升,當(dāng)添加量為10mg/l時,菌體濃度和谷氨酸含量達到峰值,然后出現(xiàn)下降趨勢,但是整個過程中,糖酸轉(zhuǎn)化率沒有明顯改變(附圖未顯示);說明cecl3稀土鹽能夠促進菌株增殖,提高谷氨酸相關(guān)合成酶的活力,提高谷氨酸的產(chǎn)量,但是過高的濃度會造成菌株增殖放緩和死亡,谷氨酸產(chǎn)量相應(yīng)下降。二、通過上述實驗確定cecl3添加量為10mg/l,在此基礎(chǔ)上,研究2-羥基乙胺對菌體濃度、谷氨酸含量以及糖酸轉(zhuǎn)化率的影響。設(shè)置2-羥基乙胺的濃度為,5,10,20,40,80,160mg/l,如圖3-4所示,隨著2-羥基乙胺添加量的增加,菌體濃度隨之增加,相應(yīng)地,谷氨酸含量和糖酸轉(zhuǎn)化率也有所提升,當(dāng)添加量為40mg/l時,菌體濃度和谷氨酸含量達到峰值,繼續(xù)增加2-羥基乙胺的濃度,產(chǎn)生明顯的抑菌效果,菌株密度下降明顯;原因是,低濃度的2-羥基乙胺可能促進磷脂酰乙醇胺細胞壁組分的合成。無血清培養(yǎng)基確保了細胞的純凈生長。
培養(yǎng)實例2:蘭茲貝格型擬南芥無菌植株培養(yǎng)培養(yǎng)實例2與培養(yǎng)實例1不同的地方在于:步驟(1)所用種子為蘭茲貝格(ler,landsbergerecta)型擬南芥種子,蘭茲貝格擬南芥較哥倫比亞擬南芥具有更早的花期,在適宜條件下培養(yǎng),可以獲得處于各發(fā)育時期的擬南芥無菌***,包括根、胚軸、葉柄、子葉、蓮座葉、莖、花、角果等,其余完全同培養(yǎng)實例1。1/2cs生長培養(yǎng)基的培養(yǎng)結(jié)果為:蘭茲貝格型擬南芥種子在1/2cs生長培養(yǎng)基上的萌發(fā)率為100%,培養(yǎng)28d的幼苗,表現(xiàn)為植株健壯、平均株高為,蓮座葉發(fā)達、平均**大蓮座葉長為,葉色濃綠,根系粗壯、平均主根長為,花序含有較多花朵,花粉形態(tài)和活力均正常、平均有活力的花粉為%。如圖2所示。對比培養(yǎng)例2:將1/2cs基本培養(yǎng)基替換為1/2ms基本培養(yǎng)基,其余完全同培養(yǎng)實例2,1/2ms基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。1/2ms生長培養(yǎng)基的培養(yǎng)結(jié)果為:蘭茲貝格型擬南芥種子在1/2ms生長培養(yǎng)基上的萌發(fā)率為100%,培養(yǎng)28d的幼苗,表現(xiàn)為植株健壯、平均株高為,蓮座葉發(fā)達、平均**大蓮座葉長為,葉色濃綠,根系粗壯、平均主根長為,花序發(fā)育良好,花粉形態(tài)和活力均正常、平均有活力的花粉為%。如圖2所示。F12培養(yǎng)基提供了豐富的營養(yǎng)成分,支持細胞的快速增殖。河南F12培養(yǎng)基有哪些
MEM培養(yǎng)基含有多種必需的營養(yǎng)成分。廣東DMEM/F12培養(yǎng)基哪個好
這些重組蛋白和動物來源成分對生物制品的安全性有很大影響。成本低。主要用途應(yīng)用案例采用199(SLM)、MEM(SLM)和DMEM(SLM)低血清培養(yǎng)基分別培養(yǎng)Vero細胞、BHK21細胞和CHO細胞,新生牛血清用量可以從10%降至3%,減少新生牛血清使用批次和批間差的影響,減少生物制品純化損失,減少由于不確定蛋白或者其它血清組分帶來干擾和差異的風(fēng)險,提高制品安全性。低血清培養(yǎng)基可以在方瓶、3L轉(zhuǎn)瓶、15L轉(zhuǎn)瓶及生物反應(yīng)器中培養(yǎng)細胞,在*苗生產(chǎn)中可以達到低血清高密度的培養(yǎng)效果。低血清培養(yǎng)基營養(yǎng)成分優(yōu)于基礎(chǔ)培養(yǎng)基,易使細胞增殖迅速,代謝旺盛,代謝產(chǎn)物對細胞有不良影響,易產(chǎn)生細胞老化脫落現(xiàn)象。因此需要適當(dāng)增加換液次數(shù),增加傳代頻率。獲取同樣的細胞量,用低血清培養(yǎng)基將比用傳統(tǒng)培養(yǎng)基縮短近1/3的時間,可提高生產(chǎn)效率。采用199(SLM)低血清培養(yǎng)基培養(yǎng)Vero細胞分泌狂犬*苗病毒,滴度明顯高于采用199培養(yǎng)基傳統(tǒng)培養(yǎng)獲得的滴度。采MEM(SLM)低血清培養(yǎng)基BHK21細胞,在本實驗情況下12代內(nèi)細胞形態(tài)和致密度均優(yōu)于MEM培養(yǎng)基傳統(tǒng)培養(yǎng)情況,因而可以預(yù)期其產(chǎn)生的口蹄*、甲肝等*苗生產(chǎn)的病毒產(chǎn)量將提高。低血清培養(yǎng)基用于反應(yīng)器Vero細胞狂犬*苗的生產(chǎn),實踐證明效果良好。采DMEM。廣東DMEM/F12培養(yǎng)基哪個好