但分子構(gòu)型有很大區(qū)別。沉降系數(shù)S20W為,pI=,熱穩(wěn)定性較牛胰蛋白酶穩(wěn)定,Ca2+對酶的保護作用不及牛羊的明顯,無螯合Ca2+的中心部位。有6對二硫鍵,斷裂1~2個鍵,均不至于破壞酶分子的完整結(jié)構(gòu)而保護了酶的活性。酶的活力分別相當(dāng)于牛的72%及羊的61%。羊胰蛋白酶與牛、豬的相似,但其活力略高于牛和豬的。胰蛋白酶專一作用有堿性氨基酸精氨酸及賴氨酸羧基所組成的肽鍵。酶本身很容易自溶,由原先的β-胰蛋白酶酶轉(zhuǎn)化為α-胰蛋白酶,再進一步降解為擬胰蛋白酶,乃至碎片,活力也逐步下降而喪失。除存在于脊椎動物外,還存在于蠶、海盤車、蝲姑、放線菌等范圍***的生物體中。另外與高等動物的血液凝固和癥等有關(guān)的凝血酶、纖溶酶、舒血管素等蛋白酶在化學(xué)結(jié)構(gòu)和特異性等方面與胰蛋白酶具有密切的關(guān)系,可以認(rèn)為這些酶是從共同的祖先酶在進化過程中分化而來的。胰糜蛋白酶與彈性蛋白酶在結(jié)構(gòu)和催化機制方面也具有密切關(guān)系,但其特異性則完全不同。胰蛋白酶系自牛、羊或豬胰中提取的一種蛋白水解酶。***品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定按干燥品計算,每1mg的效價不得少于2500單位。由牛、羊、豬胰臟提取而得的一種肽鏈內(nèi)切酶。如果消化液中含有胰酶和EDTA,好去除。中國香港重組胰酶常用知識
胰蛋白酶試劑同酶速率法測定。胰蛋白酶操作方法同酶速率法測定。胰蛋白酶正常值(1)RIA法:陰性。(2)酶速率法(37℃):十二指腸液:150~600μg/ml胰蛋白酶化驗結(jié)果臨床意義(1)升高:急性胰腺、慢性胰腺(復(fù)發(fā)期)、胰腺*、腎功能不全等。(2)降低:胰腺外分泌功能不全(慢性胰腺后期)。胰蛋白酶附注急性胰腺時血清胰蛋白酶可上升至正常人的2~400倍,一般在10~15天**正常。胰蛋白酶相關(guān)疾病急性胰腺、慢性胰腺、胰腺*[4]胰蛋白酶生物*品說明胰蛋白酶*理作用胰蛋白酶為肽鏈內(nèi)切酶,對精氨酸和賴氨酸肽鏈具有選擇性水解作用,可使天然蛋白、變性蛋白、纖維蛋白和黏蛋白等水解為多肽或氨基酸。由于血清中含有非特異性抑肽酶,故胰蛋白酶不會消化正常**,而能分解黏痰、膿性痰等黏性分泌物,能促進***、化療*物向病灶滲透。胰蛋白酶適應(yīng)證1.用于膿胸、血胸、外科癥、潰瘍、創(chuàng)傷性損傷、婁管等所產(chǎn)生的局部水腫、血腫、膿腫。2.用于呼吸道疾患溶解黏痰和膿性痰。3.用于***毒蛇咬傷,曾試用于竹葉青、銀環(huán)蛇、眼鏡蛇、蝮蛇等毒蛇咬傷的各型病人800余例,均獲***。胰蛋白酶禁忌證1.肝腎出血、出血傾向及結(jié)核性膿腫患者禁用。2.不可用于急性癥及出血空腔中。內(nèi)蒙古重組胰酶常用知識有些胰酶溶液里含有酚紅作為PH值指示劑。
只斷裂賴氨酸或精氨酸胰蛋白酶原的***過程的羧基參胰蛋白酶降解物分析與形成的肽鍵。白色或米黃色結(jié)晶性粉末。溶于水,不溶于乙醇、甘油、氯仿和**。分子量24000,pI,**適pH值~。pH>。Ca2+對酶活性有穩(wěn)定作用;重金屬離子、有機磷化合物、DFP、天然胰蛋白酶**劑對其活性有強烈**。臨床用于抗消腫,工業(yè)上用于皮革制造、生絲處理、食品加工等。胰蛋白酶*典標(biāo)準(zhǔn)胰蛋白酶來源含量本品系自豬、羊或牛胰中提取的蛋白分解酶。按干燥品計算,每1mg中胰蛋白酶的活力不得少于2500單位。胰蛋白酶制法要求本品應(yīng)從檢*合格的牛、羊或豬胰中提取,生產(chǎn)過程應(yīng)符合現(xiàn)行版《*品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》的要求。胰蛋白酶性狀本品為白色或類白色結(jié)晶性粉末。胰蛋白酶鑒別取本品約2mg,置白色點滴板上,加對甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯鹽酸鹽試液,即顯紫色。胰蛋白酶檢查酸度取本品,加水溶解并制成每1ml中含2mg的溶液,依法測定(2010年版*典二部附錄ⅥH),pH值應(yīng)為~。溶液的澄清度取本品,加,依法檢查(2010年版*典二部附錄ⅨB),溶液應(yīng)澄清。糜蛋白酶-底物溶液的制備取N-乙酰-L-酪氨酸乙酯,置100ml量瓶中,加磷酸鹽緩沖液(取,混合,pH值為)50ml,溫?zé)崾谷芙猓鋮s后再稀釋至刻度,搖勻。
使**或細(xì)胞片分散成單個細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液用于進一步的實驗。影響消化速度的因素較多,主要有胰酶溶液的活性(配制條件、凍存或4℃保存時間長短、是否反復(fù)凍融、化凍后存放時間及溫度等)、消化時的溫度(氣溫、細(xì)胞培養(yǎng)瓶及胰酶溶液的溫度)以及所加胰酶溶液的多少等。加入胰蛋白酶-EDTA溶液,視細(xì)胞瓶的大小加入體積為2ml或更多(依培養(yǎng)器皿的大小而定),以使充分浸潤;一般消化時間約為1至3分鐘,肉眼觀察瓶底由半透明(細(xì)胞單層連接成片)轉(zhuǎn)為透明、點狀(出現(xiàn)細(xì)小空隙)時,棄去細(xì)胞消化液,或看見培養(yǎng)瓶壁呈白茫狀即可。并加入適量的完全培養(yǎng)液終止消化,吹打分散;如見大量細(xì)胞片狀脫落,已消化過頭,則不能頃倒消化液而直接進行下一步操作。(消化過頭,可造成大量細(xì)胞從瓶壁上脫下,甚至造成細(xì)胞破碎。由于血清含有非特異性胰蛋白酶抑制劑,所以加入完全培養(yǎng)基可以終止反應(yīng)。胰酶配置方法:1、培養(yǎng)液配制,方便好用,對細(xì)胞影響小,并且培養(yǎng)液的ph值正好適合胰蛋白酶的溶解2、生理鹽水配制,要先調(diào)ph值(①胰酶(1:250)克②EDTA-Na③NaCl④KCl⑤Glucose⑥PhenolRed⑦Water1000mL磁力攪拌2-3小時,調(diào)pH,過濾**。)3、pbs(:稱取胰酶粉末。胰酶用0.05%還是0.25%的?需不需要含酚紅的?
細(xì)胞培養(yǎng)胰蛋白酶生物制品簡介中文名稱:胰蛋白酶中文同義詞:胰蛋白酶;胰蛋白酶1:250(豬胰臟);胰蛋白酶1:300(豬胰臟);胰淀粉酶;胰液酵素;胰酶-EDTA溶液;胰蛋白酶1:250;蛋白酶類英文名稱:Trypsin英文同義詞:TRYPSIN;TRYPSIN,1-250;TRYPSIN,1-300;TRYPSIN-EDTA;TRYPSIN,HUMANPANCREAS;TRYPSINPORCINE;TRYPSIN,PORCINEPANCREAS;CAS號:9002-07-7分子式:C6H15O12P3分子量:≈24000EINECS號:232-650-8胰蛋白酶物化性質(zhì)胰蛋白酶是從牛、豬、羊的胰臟提取,純化獲得的結(jié)晶,再制成的凍干制劑。易溶于水,不溶于三氯甲烷、乙醇、**等有機溶劑。在,短時間煮沸幾乎不失活;在堿溶液中加熱則變性沉淀,Ca2+有保護和***作用,胰蛋白酶的等電點為。牛胰蛋白酶原有229個氨基酸組成,含6對二硫鍵,其氨基酸排列順序和晶體結(jié)構(gòu)已被闡明。在腸激酶活自身催化下,酶原的N末端賴氨酸與異亮氨酸殘基之間的肽鍵被水解,釋放出來纈-天-天-天-天-賴6肽,生成有活性的胰蛋白酶。牛的胰蛋白酶氨基酸殘基223個,分子量23800[2],活性部位的絲氨酸殘基是不可缺少的絲氨酸蛋白酶。豬胰蛋白酶的化學(xué)結(jié)構(gòu)與牛胰蛋白酶十分相似,在氨基酸殘基排列順序中,只有41個氨基酸殘基不同。胰酶的使用濃度是多少?中國香港重組胰酶常用知識
消化液經(jīng)過過濾除菌,可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞的消化,或者一些組織的消化。中國香港重組胰酶常用知識
品名:0.25%胰蛋白酶溶液,1X分類:細(xì)胞消化試劑規(guī)格:100ML用途:消化試劑,如胰蛋白酶,被用于將粘附細(xì)胞從其附著的表面或底物上分離和降解,以及將組織進行游離,以開展原代細(xì)胞培養(yǎng)。產(chǎn)品包括2種常用濃度的γ照射豬胰蛋白酶(1:250)以及一種新型非哺乳動物豬胰蛋白酶替代品,稱為ThermoScientificHyQTaseTM.HyQTase是一種蛋白水解酶和膠原水解酶的混合超濾溶液,可以快速消化,同時不損傷細(xì)胞。其非哺乳動物配方使它適用于無血清應(yīng)用,不需要失效或?qū)γ敢种苿?。此試劑可使?xì)胞被快速分離,形成單細(xì)胞懸浮物,保持高細(xì)胞活力,并使傳代時的變異減至**小。中國香港重組胰酶常用知識