由于培養(yǎng)基的間歇**不需要專門的**設(shè)備，投資少，對(duì)設(shè)備要求簡(jiǎn)單，對(duì)蒸汽的要求也比較低，且**效果可靠，因此，間歇**是中小型生產(chǎn)工廠經(jīng)常采用的一種培養(yǎng)基**方法。（三）、培養(yǎng)基的連續(xù)**1、定義：連續(xù)**也叫連消，將配制好的并經(jīng)預(yù)熱（60～75℃）的培養(yǎng)基用泵連續(xù)輸入由直接蒸汽加熱的加熱塔，使在短時(shí)間內(nèi)達(dá)到**溫度（126～132℃）。然后進(jìn)入維持罐（或維持管），使在**溫度下維持3～7分鐘后再進(jìn)入冷卻管，使其冷卻至接種溫度并直接進(jìn)入已事先**（空罐**）過的發(fā)酵罐內(nèi)。其溫度一般以126～132℃為宜，總蒸汽壓力要求達(dá)到～MPa以上。培養(yǎng)基采用連續(xù)**時(shí)，需在培養(yǎng)基進(jìn)入發(fā)酵罐前，直接用蒸汽進(jìn)行空罐**（空消），用無(wú)菌空氣保壓，待培養(yǎng)基流入罐后，開始冷卻。**時(shí)對(duì)培養(yǎng)基的加熱可采用各種加熱器。培養(yǎng)基的冷卻方式有噴淋冷卻式、真空冷卻式、薄板換熱器式幾種方式，其過程均包括加熱、維持和冷卻階段。2、連續(xù)**的流程：（1）由熱交換器組成的**系統(tǒng)流程中采用了薄板換熱器作為培養(yǎng)液的加熱和冷卻器，蒸汽在薄板換熱器的加熱段使培養(yǎng)液的溫度升高，經(jīng)維持段保溫一定時(shí)間后，培養(yǎng)基在薄板換熱器的冷卻段進(jìn)行冷卻。無(wú)酚紅培養(yǎng)基避免了酚紅對(duì)細(xì)胞的潛在毒性作用。甘肅基礎(chǔ)培養(yǎng)基有哪些

    三)、試驗(yàn)結(jié)果：初代培養(yǎng)：使用本發(fā)明的消毒方法，消毒成功率能達(dá)到80％，誘導(dǎo)培養(yǎng)基萌芽率能達(dá)到90％，可以成功建立無(wú)菌再生體系。繼代培養(yǎng)：使用本發(fā)明的增殖培養(yǎng)基，繡球組培苗增殖倍率能夠達(dá)到8～10倍，組培苗高度一致，生長(zhǎng)健壯。生根培養(yǎng)：使用本發(fā)明的生根培養(yǎng)基，繡球組培苗生根率能夠達(dá)到95％，根系發(fā)達(dá)，健壯，可以成功用于移栽大棚。本發(fā)明所指ms培養(yǎng)基是murashige和skoog研制的培養(yǎng)基，其成分配方表見表1。1/2ms培養(yǎng)基是指大量元素含量為ms培養(yǎng)基的一半，其他成分用量相同。表1、ms培養(yǎng)基成分表本發(fā)明涉及的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑有：6-ba—6-芐氨基嘌呤；ga3—赤霉素；iba—吲哚丁酸，naa—萘乙酸。本發(fā)明中的誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基均為液體培養(yǎng)基。本具體實(shí)施方式的實(shí)施例均為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，并非依此限制本發(fā)明的保護(hù)范圍，故：凡依本發(fā)明的結(jié)構(gòu)、形狀、原理所做的等效變化，均應(yīng)涵蓋于本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。江蘇DMEM/F12培養(yǎng)基DMEM培養(yǎng)基提供了細(xì)胞生長(zhǎng)所需的基本營(yíng)養(yǎng)成分。

    3)培養(yǎng)方法：將配制的1/2cs生長(zhǎng)培養(yǎng)基分裝于長(zhǎng)、寬、高9cm的耐高溫培養(yǎng)盒中，用移液槍吸取帶有無(wú)菌水的無(wú)菌種子，吹打在無(wú)菌濾紙上，用無(wú)菌尖頭鑷子將種子均勻點(diǎn)播在培養(yǎng)基上；于溫度22-24℃、濕度50-70％、光照強(qiáng)度1500-2000lux、光照和黑暗交替(光照時(shí)間16h、黑暗時(shí)間8h)條件下培養(yǎng)。(4)1/2cs生長(zhǎng)培養(yǎng)基的培養(yǎng)結(jié)果為：哥倫比亞型擬南芥種子在1/2cs生長(zhǎng)培養(yǎng)基上的萌發(fā)率為100％，培養(yǎng)16d的幼苗，表現(xiàn)為植株健壯，蓮座葉均已伸展，葉色濃綠，根系發(fā)達(dá)、平均主根長(zhǎng)為。如圖1所示。對(duì)比培養(yǎng)例1：將1/2cs基本培養(yǎng)基替換為1/2ms基本培養(yǎng)基，其余完全同培養(yǎng)實(shí)例1，1/2ms基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。1/2ms生長(zhǎng)培養(yǎng)基的培養(yǎng)結(jié)果為：哥倫比亞型擬南芥種子在1/2ms生長(zhǎng)培養(yǎng)基上的萌發(fā)率為100％，培養(yǎng)16d的幼苗，表現(xiàn)為植株健壯，蓮座葉部分伸展，葉色濃綠，根系發(fā)達(dá)、平均主根長(zhǎng)為。如圖1所示。培養(yǎng)實(shí)例1和對(duì)比培養(yǎng)例1的培養(yǎng)結(jié)果比較：哥倫比亞型擬南芥在1/2cs生長(zhǎng)培養(yǎng)基和1/2ms生長(zhǎng)培養(yǎng)基上的萌發(fā)率均為100％；在相同條件下培養(yǎng)16d時(shí)，與1/2ms生長(zhǎng)培養(yǎng)基相比，1/2cs生長(zhǎng)培養(yǎng)基中的幼苗長(zhǎng)勢(shì)更佳，主要表現(xiàn)為蓮座葉長(zhǎng)勢(shì)更好、根系更為發(fā)達(dá)。如圖1所示。

    3)擬南芥葉片愈傷**的誘導(dǎo)方法：用手術(shù)剪刀剪開長(zhǎng)勢(shì)良好的無(wú)菌葉片，用鑷子將其取出擺放在步驟(1)的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，使傷口接觸培養(yǎng)基；于溫度23-25℃、濕度50-70％、光照強(qiáng)度1500-2500lux、光照和黑暗交替(光照時(shí)間16h、黑暗時(shí)間8h)條件下培養(yǎng)。(4)擬南芥根愈傷**的誘導(dǎo)方法：用鑷子取出無(wú)菌苗的根，用手術(shù)剪刀剪開后平鋪于步驟(2)的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件同步驟(3)。(5)cs誘導(dǎo)培養(yǎng)基的誘導(dǎo)結(jié)果為：擬南芥葉片愈傷**誘導(dǎo)時(shí)，培養(yǎng)6-8d在切口處出現(xiàn)顆粒狀愈傷**，培養(yǎng)24-26d獲得嫩綠色致密的團(tuán)塊狀愈傷**，顆粒狀愈傷**誘導(dǎo)率及愈傷**總誘導(dǎo)率均為100％；擬南芥根愈傷**誘導(dǎo)時(shí)，培養(yǎng)5-7d在切口處開始出現(xiàn)少量顆粒狀愈傷**，培養(yǎng)20-22d獲得較大體積的淡黃色松脆型愈傷**，且在愈傷**周圍觀察到大量致密分布的白毛，顆粒狀愈傷**誘導(dǎo)率及愈傷**總誘導(dǎo)率均為100％。如圖5所示。對(duì)比培養(yǎng)例5：將cs基本培養(yǎng)基替換為ms基本培養(yǎng)基，其余完全同培養(yǎng)實(shí)例5，ms基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。ms誘導(dǎo)培養(yǎng)基的誘導(dǎo)結(jié)果為：擬南芥葉片愈傷**誘導(dǎo)時(shí)，培養(yǎng)7-10d在切口處出現(xiàn)顆粒狀愈傷**，培養(yǎng)24-26d獲得嫩綠色致密的團(tuán)塊狀愈傷**，顆粒狀愈傷**誘導(dǎo)率及愈傷**總誘導(dǎo)率均為100％。F12培養(yǎng)基支持多種細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖。

    另外，酚紅作為pH值的指示劑被加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中。酚紅在產(chǎn)物純化過程中會(huì)造成干擾，并且具有一定的固醇類***樣作用，如雌***樣作用。當(dāng)用于哺乳類動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)，可能會(huì)發(fā)生一些固醇類反應(yīng)。現(xiàn)在商業(yè)化細(xì)胞培養(yǎng)基中的酚紅含量可根據(jù)需求調(diào)整。因生物反應(yīng)器具有pH在線檢測(cè)技術(shù)，生物反應(yīng)器培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞時(shí)，酚紅可完全去除。細(xì)胞保護(hù)劑是保護(hù)細(xì)胞免受滲透壓變化、剪切力、氧化及氣泡作用等引起的損傷的物質(zhì)。在使用生物反應(yīng)器培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞易被機(jī)械攪拌和通氣鼓泡產(chǎn)生的流體剪切力和氣泡作用所傷害甚至破損死亡。為降低這種損傷，除優(yōu)化生物反應(yīng)器結(jié)構(gòu)和生產(chǎn)工藝外，可在細(xì)胞培養(yǎng)液中添加一些保護(hù)劑。其主要是通過改變細(xì)胞培養(yǎng)基物性或是對(duì)細(xì)胞具有保護(hù)作用的物質(zhì)，常用的種類有血清、白蛋白、聚已二醇（PEG）、非離子性表面活性劑PluronicF68或是其他一些高分子聚合物等。3.細(xì)胞培養(yǎng)基的理化性質(zhì)動(dòng)物細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)基中不僅能存活，還要分裂增殖，合適的滲透壓、pH值等理化性質(zhì)是細(xì)胞培養(yǎng)基必須具備的前提條件。動(dòng)物細(xì)胞大多數(shù)需要輕微的堿性條件，適宜pH在～。細(xì)胞培養(yǎng)基的pH值通常需經(jīng)校正的pH計(jì)來(lái)測(cè)定。在細(xì)胞生長(zhǎng)過程中，隨細(xì)胞數(shù)量的增多和代謝活動(dòng)的加強(qiáng)。DMEM培養(yǎng)基提供了適宜的pH值和滲透壓。甘肅減血清培養(yǎng)基生產(chǎn)企業(yè)

F12培養(yǎng)基提供了豐富的營(yíng)養(yǎng)，支持細(xì)胞增殖。甘肅基礎(chǔ)培養(yǎng)基有哪些

    培養(yǎng)實(shí)例2：蘭茲貝格型擬南芥無(wú)菌植株培養(yǎng)培養(yǎng)實(shí)例2與培養(yǎng)實(shí)例1不同的地方在于：步驟(1)所用種子為蘭茲貝格(ler,landsbergerecta)型擬南芥種子，蘭茲貝格擬南芥較哥倫比亞擬南芥具有更早的花期，在適宜條件下培養(yǎng)，可以獲得處于各發(fā)育時(shí)期的擬南芥無(wú)菌***，包括根、胚軸、葉柄、子葉、蓮座葉、莖、花、角果等，其余完全同培養(yǎng)實(shí)例1。1/2cs生長(zhǎng)培養(yǎng)基的培養(yǎng)結(jié)果為：蘭茲貝格型擬南芥種子在1/2cs生長(zhǎng)培養(yǎng)基上的萌發(fā)率為100％，培養(yǎng)28d的幼苗，表現(xiàn)為植株健壯、平均株高為，蓮座葉發(fā)達(dá)、平均**大蓮座葉長(zhǎng)為，葉色濃綠，根系粗壯、平均主根長(zhǎng)為，花序含有較多花朵，花粉形態(tài)和活力均正常、平均有活力的花粉為％。如圖2所示。對(duì)比培養(yǎng)例2：將1/2cs基本培養(yǎng)基替換為1/2ms基本培養(yǎng)基，其余完全同培養(yǎng)實(shí)例2，1/2ms基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。1/2ms生長(zhǎng)培養(yǎng)基的培養(yǎng)結(jié)果為：蘭茲貝格型擬南芥種子在1/2ms生長(zhǎng)培養(yǎng)基上的萌發(fā)率為100％，培養(yǎng)28d的幼苗，表現(xiàn)為植株健壯、平均株高為，蓮座葉發(fā)達(dá)、平均**大蓮座葉長(zhǎng)為，葉色濃綠，根系粗壯、平均主根長(zhǎng)為，花序發(fā)育良好，花粉形態(tài)和活力均正常、平均有活力的花粉為％。如圖2所示。甘肅基礎(chǔ)培養(yǎng)基有哪些