本氏***葉片及根愈傷**誘導的對比效果圖,a:葉片愈傷**;b:葉片愈傷**誘導率;c:根愈傷**;d:根愈傷**誘導率;a和c中bar=;圖7是cs和ms兩種培養(yǎng)基上,水稻成熟胚愈傷**誘導的對比效果圖,a:水稻成熟胚愈傷**;b:水稻成熟胚愈傷**誘導率;a中bar=;圖8是用不同ph的超純水(ph為)配制的cs、ms、1/2cs和1/2ms液體培養(yǎng)基ph值穩(wěn)定性比較效果圖;圖9是在未調ph和將ph調至、ms、1/2cs和1/2ms液體培養(yǎng)基中馬鈴薯幼苗的生長狀況的比較效果圖,a:不同液體培養(yǎng)基培養(yǎng)前的無菌苗生長情況;b1、c1和d1:1/2ms未調ph液體培養(yǎng)基培養(yǎng)效果;b2、c2和d2:1/2cs未調ph液體培養(yǎng)基培養(yǎng)效果;b3、c3和d3:ms未調ph液體培養(yǎng)基培養(yǎng)效果;b4、c4和d4:cs未調ph液體培養(yǎng)基培養(yǎng)效果;b5、c5和d5:1/;b6、c6和d6:1/;b7、c7和d7:;b8、c8和d8:;a、b、c和d中bar=;圖10是對在未調ph和將ph調至、ms、1/2cs和1/2ms液體培養(yǎng)基中馬鈴薯幼苗的莖高(a)、莖中粗(b)、根長(c)、鮮重(d)進行統(tǒng)計的比較效果圖。具體實施方式下面結合附圖和實施例對本發(fā)明作進一步描述。實施例一,本實施例廣適性植物**培養(yǎng)基,其每1000ml培養(yǎng)基中含有:kno32662mg、。DMEM培養(yǎng)基適用于多種哺乳動物細胞的體外培養(yǎng)和實驗研究。內蒙古F12培養(yǎng)基包括
因為解凍時可能會有營養(yǎng)成份析出,影響培養(yǎng)效果。正常情況下于2~8℃避光保存,使用前從冰箱取出,放入室溫進行平衡。通常的液體培養(yǎng)基有效期是6個月到12個月。液體細胞培養(yǎng)基盡量避免長期貯存,其中的谷氨酰胺會隨著儲存時間的延長而慢慢分解,如果細胞生長不良,可考慮檢測培養(yǎng)基中的谷氨酰胺含量確定是否再補加谷氨酰胺。市售商業(yè)化液體細胞培養(yǎng)基有具體的有效期,對于使用干粉細胞培養(yǎng)基自行配制成液體以后,也應低溫(2~8℃)貯存。除培養(yǎng)基中如谷氨酰胺易降解之外,培養(yǎng)基中的其他成份隨著溫度的升高也可能會發(fā)生降解或是析出。5.細胞培養(yǎng)基使用過程中常見問題分析由于大多數細胞適宜的pH為,偏離此范圍可能對細胞生長產生有害的影響。但各種細胞對pH的要求也不完全相同,原代培養(yǎng)的細胞一般對pH變動耐受力差,無限細胞系耐受力強。因此,原代培養(yǎng)時,培養(yǎng)液中的緩沖系統(tǒng)就顯得較為重要。一般的細胞培養(yǎng)基采用的都是平衡鹽系統(tǒng),但不同的培養(yǎng)基或是同一系列的培養(yǎng)基所用平衡鹽系統(tǒng)不同,如199系列、MEM系列均有Hanks’系統(tǒng)的培養(yǎng)基及Earle’s系統(tǒng)的培養(yǎng)基。有些培養(yǎng)基不是上述常規(guī)的平衡鹽系統(tǒng),例如RPMI1640培養(yǎng)基、F12培養(yǎng)基。江蘇培養(yǎng)基價目表無血清培養(yǎng)基確保了實驗結果的純凈性。
發(fā)酵培養(yǎng)基為:葡萄糖80g/l,酵母浸膏20g/l,k2hpo42g/l,mgso4·7h2o50mg/l,cecl30-40mg/l,mnso4·h2o3mg/l,feso4·7h2o3mg/l,vb110mg/l,生物素7μg/l;發(fā)酵工藝同實施例1,100l發(fā)酵罐中含有70l發(fā)酵培養(yǎng)基。設置cecl3的添加濃度為0,,如圖1-2所示,隨著cecl3添加量的增加,菌體濃度和谷氨酸含量均有所提升,當添加量為10mg/l時,菌體濃度和谷氨酸含量達到峰值,然后出現下降趨勢,但是整個過程中,糖酸轉化率沒有明顯改變(附圖未顯示);說明cecl3稀土鹽能夠促進菌株增殖,提高谷氨酸相關合成酶的活力,提高谷氨酸的產量,但是過高的濃度會造成菌株增殖放緩和死亡,谷氨酸產量相應下降。二、通過上述實驗確定cecl3添加量為10mg/l,在此基礎上,研究2-羥基乙胺對菌體濃度、谷氨酸含量以及糖酸轉化率的影響。設置2-羥基乙胺的濃度為,5,10,20,40,80,160mg/l,如圖3-4所示,隨著2-羥基乙胺添加量的增加,菌體濃度隨之增加,相應地,谷氨酸含量和糖酸轉化率也有所提升,當添加量為40mg/l時,菌體濃度和谷氨酸含量達到峰值,繼續(xù)增加2-羥基乙胺的濃度,產生明顯的抑菌效果,菌株密度下降明顯;原因是,低濃度的2-羥基乙胺可能促進磷脂酰乙醇胺細胞壁組分的合成。
平衡鹽溶液(balancedsaltsolution,BSS)簡稱鹽溶液,集緩沖液的緩沖能力、生理鹽水的等滲性以及培養(yǎng)液的營養(yǎng)供應特點于一體,兼具維持滲透壓、緩沖和調節(jié)溶液的酸堿度、同時供給細胞生存所必需的能量和無機離子成分的作用。各種BSS的緩沖系統(tǒng)有所不同,其中以Hank’s液和Earle’s液為例,它們主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在Earle’s(g/L)中比在Hank’s(g/L)中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡,以維持溶液的pH值。Eagles液在空氣水平的CO2中,溶液會變堿,Hank’s液在CO2培養(yǎng)箱中會變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存**,需要用Earle’s液,。如果**是清洗將要在細胞培養(yǎng)基中儲存的**,用Hank’s液就可以了。表3-1幾種常用的平衡鹽溶液配方(g/L)一些BSS含有的Ca2+、Mg2+是細胞膜的重要組成成分,同時參與許多重要的細胞功能活動。但它們有使細胞凝集的作用,在配制分散細胞的消化液和特殊用途的細胞洗滌時,宜采用Ca2+、Mg2+含量較低的Dulbecco液或無Ca2+、Mg2+的D-Hanks液,或者PBS液。概述基礎細胞培養(yǎng)基主要包括199、MEM、RPMI-1640、DMEM、DMEM/F12等。主要成分是氨基酸、維生素、碳水化合物、無機鹽和其它一些輔助物質。MEM培養(yǎng)基含有多種必需的營養(yǎng)成分和礦物質。
從而提高菌株增殖速率,但是濃度過大會導致抑菌現象,后期菌株增殖放緩,以產酸為主,2-羥基乙胺還能夠作為陽離子表面活性劑,使得細胞壁疏松,提高細胞通透性,促進谷氨酸釋放到發(fā)酵液,從而提高了谷氨酸產量和糖酸轉化率。三、通過上述實驗確定cecl3添加量為10mg/l、2-羥基乙胺的添加量40mg/l,在此基礎上,研究發(fā)酵培養(yǎng)基b對菌體濃度、谷氨酸含量以及糖酸轉化率的影響。對照組1采用發(fā)酵培養(yǎng)基a進行發(fā)酵,不采用發(fā)酵培養(yǎng)基b,100l發(fā)酵罐中含有70l發(fā)酵培養(yǎng)基a;發(fā)酵工藝參照實施例1。對照組2:發(fā)酵培養(yǎng)基b中不添加琥珀酸,其余同實施例1。對照組3:發(fā)酵培養(yǎng)基b中不添加殼聚糖,其余同實施例1。對照組4:發(fā)酵培養(yǎng)基a中添加5g/l的琥珀酸,其余同對照組1。實驗組為實施例1。具體結果見表1。表1組別菌濃度od600nm谷氨酸產量g/l糖酸轉化率%對照組:對照組1采用單一發(fā)酵培養(yǎng)基發(fā)酵,谷氨酸產量和糖酸轉化率明顯低于實驗組,各組別菌體濃度差異并不大;對照組4在對照組1的基礎上添加了琥珀酸,對菌體濃度并沒有影響,谷氨酸產量和糖酸轉化率也沒有明顯差異,可能原因是,發(fā)酵前期以菌體增殖為主,產酸較少,琥珀酸對菌體增殖并沒有明顯的刺激作用。MEM培養(yǎng)基是細胞生物學研究中的基礎培養(yǎng)基之一。江西MEM a培養(yǎng)基包括什么
減血清培養(yǎng)基提高了實驗的可重復性。內蒙古F12培養(yǎng)基包括
培養(yǎng)實例2:蘭茲貝格型擬南芥無菌植株培養(yǎng)培養(yǎng)實例2與培養(yǎng)實例1不同的地方在于:步驟(1)所用種子為蘭茲貝格(ler,landsbergerecta)型擬南芥種子,蘭茲貝格擬南芥較哥倫比亞擬南芥具有更早的花期,在適宜條件下培養(yǎng),可以獲得處于各發(fā)育時期的擬南芥無菌***,包括根、胚軸、葉柄、子葉、蓮座葉、莖、花、角果等,其余完全同培養(yǎng)實例1。1/2cs生長培養(yǎng)基的培養(yǎng)結果為:蘭茲貝格型擬南芥種子在1/2cs生長培養(yǎng)基上的萌發(fā)率為100%,培養(yǎng)28d的幼苗,表現為植株健壯、平均株高為,蓮座葉發(fā)達、平均**大蓮座葉長為,葉色濃綠,根系粗壯、平均主根長為,花序含有較多花朵,花粉形態(tài)和活力均正常、平均有活力的花粉為%。如圖2所示。對比培養(yǎng)例2:將1/2cs基本培養(yǎng)基替換為1/2ms基本培養(yǎng)基,其余完全同培養(yǎng)實例2,1/2ms基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。1/2ms生長培養(yǎng)基的培養(yǎng)結果為:蘭茲貝格型擬南芥種子在1/2ms生長培養(yǎng)基上的萌發(fā)率為100%,培養(yǎng)28d的幼苗,表現為植株健壯、平均株高為,蓮座葉發(fā)達、平均**大蓮座葉長為,葉色濃綠,根系粗壯、平均主根長為,花序發(fā)育良好,花粉形態(tài)和活力均正常、平均有活力的花粉為%。如圖2所示。內蒙古F12培養(yǎng)基包括