c、結(jié)果為:在用未調(diào)ph液體培養(yǎng)基進行培養(yǎng)時,整體長勢從優(yōu)至弱分別為1/2cs未調(diào)ph液體培養(yǎng)基、cs未調(diào)ph液體培養(yǎng)基、1/2ms未調(diào)ph液體培養(yǎng)基、ms未調(diào)ph液體培養(yǎng)基;在用ph調(diào)至,整體長勢從優(yōu)至弱分別為1/、、1/、;不論是否調(diào)ph至,cs液體培養(yǎng)基培養(yǎng)的馬鈴薯幼苗長勢均優(yōu)于ms液體培養(yǎng)基;不論是否調(diào)ph至,1/2cs液體培養(yǎng)基培養(yǎng)的馬鈴薯幼苗長勢均優(yōu)于1/2ms液體培養(yǎng)基。如圖9和圖10所示。說明,1/2cs液體培養(yǎng)基和cs液體培養(yǎng)基應(yīng)用于植物水培時,不論是否調(diào)節(jié)ph至,均能獲得很好的培養(yǎng)效果,克服了傳統(tǒng)液體培養(yǎng)基必須調(diào)節(jié)ph后才適用于植物水培的缺點。**后說明的是,以上實施例*用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制,盡管參照較佳實施例對本發(fā)明進行了詳細說明,本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當理解,可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進行修改或者等同替換,而其不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的宗旨和范圍,則均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍當中。減血清培養(yǎng)基減少了實驗中的血清干擾。無血清培養(yǎng)基包括
第三節(jié)**的代謝與培養(yǎng)基新陳代謝(metabolism)足生物有機體基本的特征之一,是生命活動中一切生化反應(yīng)的總稱。它包括物質(zhì)的分解和物質(zhì)的合成過程。**吸收了外界的營養(yǎng),在酶的作用下將其分解,再在酶的作用下臺成**菌體的成分。分解與合成兩個過程伴同發(fā)生,緊密相關(guān),維持了**細胞的生命,進行**的生長。通過檢測**系統(tǒng)及代謝產(chǎn)物的生理,來鑒定**的試驗稱生化試驗。生化試驗可分為糖代謝試驗、蛋白質(zhì)代謝試驗、鹽利用試驗和呼吸酶類斌驗4種。l.代謝試驗①氧化發(fā)酵試驗O-F;②糖(醇)類發(fā)酵試驗;③VP和甲基紅試驗2.蛋白質(zhì)代謝試驗①蛋白水解試驗;②硫化氫試驗;③吲哚試驗;④脫羧酶試驗;③脫氨試驗;⑥尿素酶試驗。3.鹽類代謝試驗①枸櫞酸鹽試驗;②丙二酸鹽利用試驗;③硝酸鹽還原試驗4.呼吸酶類試驗①氧化酶試驗;②細胞色素氧化酶試驗表IMVIC試驗對腸桿菌屬的鑒別作用菌名吲哚(I)甲基紅(M)VP(Vi)枸櫞酸鹽。貴州DMEM/F12培養(yǎng)基技術(shù)指導(dǎo)F12培養(yǎng)基提供了豐富的營養(yǎng)支持。
本發(fā)明涉及植物**培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域,特別涉及一種植物**培養(yǎng)基。背景技術(shù):ms培養(yǎng)基于1962年由murashige和skoog設(shè)計,是目前植物**培養(yǎng)中應(yīng)用**為***的培養(yǎng)基。據(jù)《危險化學(xué)品安全管理條例》(***令第591號)、《民用物品安全管理條例》及《易制爆危險化學(xué)品名錄》(2017年版)可知,ms培養(yǎng)基的主要成分硝酸鉀、硝酸銨均為易制爆管制試劑,隨著**監(jiān)管越發(fā)嚴格,所有易制爆試劑的購買、儲存及使用變得越來越困難,尤其是兼有硝態(tài)氮和銨態(tài)氮的硝酸銨,其純品被禁止市場流通,為植物**培養(yǎng)帶來很大難度。b5培養(yǎng)基于1968年由gamborg等為培養(yǎng)大豆根細胞而設(shè)計,n6培養(yǎng)基于1974年由朱至清等為水稻等禾谷類作物花*培養(yǎng)而設(shè)計,兩者均由ms培養(yǎng)基衍生而來,在有些植物**培養(yǎng)研究中***應(yīng)用,雖然b5和n6培養(yǎng)基除了硝酸鉀外不含其他易制爆成分,但兩者中的鈣離子和鎂離子含量均大幅降低,且b5培養(yǎng)基中銨離子大幅減少、n6培養(yǎng)基中鉀離子大幅增加,這些離子濃度的大幅波動對一些植物的**培養(yǎng)是不利的。cna草莓增殖培養(yǎng)基公開了一種無硝酸銨培養(yǎng)基,但其硝酸鉀及**銨含量過高,*適用于草莓**培養(yǎng);cna一種草莓**培養(yǎng)基及其配制方法公開了一種無硝酸銨培養(yǎng)基,在草莓**培養(yǎng)中取得很好的效果。
文獻2“混合硝酸稀土對谷氨酸產(chǎn)生菌的影響,氨基酸雜志”發(fā)現(xiàn),在發(fā)酵培養(yǎng)基中添加一定量的稀土元素,能夠提高谷氨酸的產(chǎn)量。申請人之前的**技術(shù)“一種谷氨酸發(fā)酵培養(yǎng)基制備方法”,在常規(guī)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上進行了改進,通過添加菌體蛋白浸膏來替代酵母膏氮源,不但節(jié)約了成本,還能提高氨基酸發(fā)酵產(chǎn)率,一舉兩得。技術(shù)實現(xiàn)要素:在已有發(fā)酵培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上,申請人針對微生物發(fā)酵的特點,繼續(xù)進行了改進,以提高發(fā)酵效率,據(jù)此,提出了一種優(yōu)化的谷氨酸發(fā)酵培養(yǎng)基。本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案來實現(xiàn)的:一種優(yōu)化的谷氨酸發(fā)酵培養(yǎng)基,其包括發(fā)酵培養(yǎng)基a和發(fā)酵培養(yǎng)基b;所述發(fā)酵培養(yǎng)基a首先添加,然后間隔12h以上添加發(fā)酵培養(yǎng)基b。進一步地,所述發(fā)酵培養(yǎng)基a的制備方法為:取各原料:葡萄糖,酵母浸膏,k2hpo4,mgso4·7h2o,2-羥基乙胺,cecl3,mnso4·h2o,feso4·7h2o,vb1,生物素;將各原料攪拌均勻后,調(diào)節(jié)ph,**,制得發(fā)酵培養(yǎng)基a。進一步地,所述發(fā)酵培養(yǎng)基b的制備方法為:取各原料:琥珀酸,尿素,殼聚糖;將各原料攪拌均勻后,調(diào)節(jié)ph,**,制得發(fā)酵培養(yǎng)基b。推薦地,所述發(fā)酵培養(yǎng)基a的制備方法為:取各原料:葡萄糖50-100g/l,酵母浸膏10-30g/l,k2hpo41-5g/l。無血清培養(yǎng)基適用于敏感細胞系的培養(yǎng)和研究。
**早開發(fā)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基(minimalessentialmedium,MEM),其本質(zhì)為含有鹽、氨基酸、維生素和其他必需營養(yǎng)物的pH緩沖的等滲混合物。在此基礎(chǔ)上,DMEM、IMDM、HAMF12、PRMI1640等各種合成細胞培養(yǎng)基被不斷開發(fā)出來。常用合成培養(yǎng)基的配方此處不詳細介紹,其特性及應(yīng)用的范圍見表1-2。表1-2常用合成培養(yǎng)基的特性及應(yīng)用的范圍培養(yǎng)基名稱特性及應(yīng)用范圍199細胞培養(yǎng)基添加適量的血清后,可***用于多種細胞培養(yǎng),并用于**學(xué)、*苗生產(chǎn)等。MEM細胞培養(yǎng)基MEM(MinimalEssentialMedium)培養(yǎng)基有含Earle's平衡鹽的類型,也有含Hanks'平衡鹽的類型;有高壓**型的,也有過濾**型的;還有含非必需氨基酸的類型。是**基本、適用范圍**廣的細胞培養(yǎng)基。DMEM細胞培養(yǎng)基DMEM(Dulbecco’smodifiedMinimalEssentialMedium)是由Dulbecco在MEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上改良獲得的,各成分份量加倍,分低糖(1000mg/L)、高糖(4500mg/L)兩種類型。細胞生長快。附著稍差的腫*細胞、克隆培養(yǎng)用高糖效果較好,常用于雜交*的骨髓*細胞和DNA轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細胞培養(yǎng)。IMDM細胞培養(yǎng)基IMDM(Iscove’smodifiedDMEM)是由Iscove在DMEM基礎(chǔ)上改良,增加了幾種氨基酸和胱氨酸量等??捎糜陔s交*細胞培養(yǎng)。MEM培養(yǎng)基在細胞生物學(xué)研究中廣泛應(yīng)用。無血清培養(yǎng)基包括
無血清培養(yǎng)基確保了實驗結(jié)果的純凈性。無血清培養(yǎng)基包括
如何正確地使用培養(yǎng)基及**大程度地保持培養(yǎng)基的營養(yǎng)以維持細胞的生長,對每個培養(yǎng)者都很重要。培養(yǎng)基的使用依不同的培養(yǎng)基種類、培養(yǎng)方式、細胞種類的不同而存在差異。細胞培養(yǎng)液的構(gòu)成細胞培養(yǎng)液指細胞生長的液體環(huán)境,一般指完全培養(yǎng)液,添加了血清、水解乳蛋白、各種添加劑等可以直接使用的培養(yǎng)液。細胞培養(yǎng)基&血清模式血清對于在傳統(tǒng)培養(yǎng)基配方中生長和增殖的大多數(shù)細胞系來說是需要的,因為大多數(shù)單獨的培養(yǎng)基并不能提供細胞生長所需要的全部營養(yǎng),如MEM培養(yǎng)基,較為常用的量為5%~10%的比例,而特殊的低血清培養(yǎng)基血清量可降至3%左右,細胞的形態(tài)和功能不受影響。細胞培養(yǎng)基&乳歐液模式化學(xué)合成培養(yǎng)基現(xiàn)雖已大規(guī)模使用,但在某些培養(yǎng)領(lǐng)域水解乳蛋白仍在使用,以補充培養(yǎng)液中缺乏的氨基酸、小肽物質(zhì)。較為常用的方式是用漢氏(Hanks’BSS)或歐式(Earle’sBSS)平衡液溶解水解乳蛋白(一般為5‰濃度),即成乳漢(歐)液,再與化學(xué)合成培養(yǎng)基(一般為MEM)按比例混合使用(如1:1)。細胞培養(yǎng)基&各類添加劑(生長因子等)模式成分復(fù)雜的培養(yǎng)基還含有許多化合物,包括蛋白質(zhì)、多肽、核苷、檸檬酸循環(huán)的中間產(chǎn)物、**酸及脂類等。無血清培養(yǎng)基包括