mgso4·7h2o20-200mg/l,2-羥基乙胺10-50mg/l,cecl31-20mg/l,mnso4·h2o1-10mg/l,feso4·7h2o1-10mg/l,vb15-50mg/l,生物素1-10μg/l;將各原料攪拌均勻后,調節(jié)ph為6-7,121℃**,自然冷卻,制得發(fā)酵培養(yǎng)基a。更推薦地,所述發(fā)酵培養(yǎng)基a的制備方法為:取各原料:葡萄糖80g/l,酵母浸膏20g/l,k2hpo42g/l,mgso4·7h2o50mg/l,2-羥基乙胺40mg/l,cecl310mg/l,mnso4·h2o3mg/l,feso4·7h2o3mg/l,vb110mg/l,生物素7μg/l;將各原料攪拌均勻后,調節(jié)ph為,121℃**15min,自然冷卻,制得發(fā)酵培養(yǎng)基a。推薦地,所述發(fā)酵培養(yǎng)基b的制備方法為:取各原料:琥珀酸1-10g/l,尿素1-5g/l,殼聚糖20-100mg/l;將各原料攪拌均勻后,調節(jié)ph,**,制得發(fā)酵培養(yǎng)基b;更推薦地,所述發(fā)酵培養(yǎng)基b的制備方法為:取各原料:琥珀酸5g/l,尿素2g/l,殼聚糖80mg/l;將各原料攪拌均勻后,調節(jié)ph為,121℃**15min,自然冷卻,制得發(fā)酵培養(yǎng)基b。與現(xiàn)有技術相比,本發(fā)明取得的有益效果主要包括但是并不限于以下幾個方面:本發(fā)明發(fā)酵培養(yǎng)基采用兩部分組成,發(fā)酵培養(yǎng)基a側重于菌株增殖的提升,發(fā)酵培養(yǎng)基b側重于谷氨酸的合成和分泌;前期細胞增殖時。無血清培養(yǎng)基適用于敏感細胞系的培養(yǎng)和研究。廣東MEM a培養(yǎng)基供應商家
以及無血清培養(yǎng)的基礎細胞培養(yǎng)基。RPMI-1640細胞培養(yǎng)基專門針對淋巴細胞培養(yǎng)設計,含有BSS、21種氨基酸、維生素等,***適于多種正常細胞和腫*細胞的培養(yǎng),也用做懸浮細胞培養(yǎng)。HamF12細胞培養(yǎng)基含微量元素,可在血清含量低時用,適用于克隆化培養(yǎng)。F12適用于CHO細胞,也是無血清細胞培養(yǎng)基中常用的基礎細胞培養(yǎng)基。DMEM/F12細胞培養(yǎng)基將DMEM和F12按照1:1比例混合,混合后營養(yǎng)成份豐富,血清使用量也減少。常作為開發(fā)無血清細胞培養(yǎng)基時的基礎細胞培養(yǎng)基。與天然培養(yǎng)基相比,有些天然的未知成分尚無法用已知的化學成分所替代,因此,細胞培養(yǎng)中使用合成培養(yǎng)基時必須加入一定量的天然培養(yǎng)基成分,以克服合成培養(yǎng)基的不足。**普遍的做法是添加5~10%的血清,這樣才能維持細胞活力,促進細胞增殖。針對不同的動物細胞,現(xiàn)已開發(fā)了多種商業(yè)化、個性化的低血清細胞培養(yǎng)基配方,營養(yǎng)成份更加豐富,血清使用量可降低至1~3%,由此可減少了血清等動物來源成份對生物制品安全性的影響。(serumfreemedium,SFM)經(jīng)歷了天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基后,無血清培養(yǎng)基和無血清培養(yǎng)成為當今細胞培養(yǎng)領域的一大趨勢。采用無血清培養(yǎng)可降低生產(chǎn)成本,簡化分離純化步驟,避免**污染造成的危害。寧夏MEM培養(yǎng)基有哪些F12培養(yǎng)基在細胞分化和基因表達研究中有重要應用。
又能使培養(yǎng)基的破壞降低至比較低的工藝條件。許多實驗研究結果表明,培養(yǎng)基在高溫**的過程中,其營養(yǎng)成分的破壞在很大程度上可以用一級反應來描述其反應速度:式中—表示營養(yǎng)成分破環(huán)的速率,C:表示營養(yǎng)成分的濃度K':為反應速度常數(shù),1/s,應速度常數(shù)K'與溫度的關系,可以使用阿累尼烏斯公式表示之:K'=A'exp-△E'/RT……(1)式中——:反應速度常數(shù),1/S:反應的活化能(J/mol)R:氣體常數(shù),*J/mol*kT:反應的***溫度,k同樣,**過程中的反應速度常數(shù)也可以用下式表示出:K=A×exp[-E/RT]……(2)(1)、(2)式可以改寫成下列形式:lg(k,2/k,1)=E,/R×(1/T1–T2)……(3)lg(k2/k1)=E/R×(1/T1–T2)……(4)(3)(4)的意義是指:反應的溫度從T1升高到T2,其反應的速度常數(shù)分別從k,1增加到k,2;k1增加到k2;培養(yǎng)基的**過程實際上是營養(yǎng)成分破壞、菌體死亡的兩個平行性反應,對于平行性反應,反應溫度的提高,其兩個平行性反應的速度常數(shù)都增加,但增加的幅度(大?。﹨s不同,其比值可以表示為:lg(k2/k1)/lg(k,2/k,1)=E/E,……(5)實驗證明:營養(yǎng)成分為破壞的反應的活化能E的值為E,=—*103J/mol;而菌體死亡的活化能E芽孢:E=418*103J/mol。
1/2ms生長培養(yǎng)基的培養(yǎng)結果為:中雙11號油菜種子在1/2ms生長培養(yǎng)基上的萌發(fā)率為100%,培養(yǎng)9d的幼苗,表現(xiàn)為植株健壯、平均株高為,葉色濃綠,莖稈粗壯、平均莖中粗為,根系發(fā)達、平均根數(shù)為(>)、平均主根長為。如圖3所示。培養(yǎng)實例3和對比培養(yǎng)例3的培養(yǎng)結果比較:中雙11號油菜種子在1/2cs生長培養(yǎng)基和1/2ms生長培養(yǎng)基上的萌發(fā)率均為100%;在相同條件下培養(yǎng)9d時,與1/2ms生長培養(yǎng)基相比,1/2cs生長培養(yǎng)基中的幼苗長勢更佳,其株高、根的數(shù)目優(yōu)于1/2ms生長培養(yǎng)基,莖粗及平均主根長度與1/2ms生長培養(yǎng)基相近。如圖3所示。培養(yǎng)實例4:馬鈴薯無菌苗培養(yǎng)生長培養(yǎng)基配制:1/2cs基本培養(yǎng)基+蔗糖30g/l+植物凝膠8g/l,用超純水溶解,。1/2cs基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。培養(yǎng)方法:以克新18號馬鈴薯為例,將配制好的1/2cs生長培養(yǎng)基分裝于長、寬、高9cm的耐高溫培養(yǎng)盒中,選擇生長旺盛的馬鈴薯脫毒苗,于無菌環(huán)境下,根據(jù)實際需要,用手術剪刀剪取約1cm長的至少帶有1個葉芽的莖端或莖段,用彎頭鑷子將其1/3-1/2長度垂直插入培養(yǎng)基中;于溫度22-23℃、濕度50-70%、光照強度2000-3000lux、光照和黑暗交替(光照時間14h、黑暗時間10h)條件下培養(yǎng)。減血清培養(yǎng)基減少了血清成分的變異性。
擬南芥根愈傷**誘導時,培養(yǎng)6-9d在切口處開始出現(xiàn)少量顆粒狀愈傷**,培養(yǎng)20-22d獲得淡黃色松脆型愈傷**,在愈傷**周圍觀察到大量致密分布的白毛,顆粒狀愈傷**誘導率及愈傷**總誘導率均為100%。如圖5所示。培養(yǎng)實例5和對比培養(yǎng)例5的誘導結果比較:用上述方法進行哥倫比亞擬南芥葉片和根愈傷**誘導時,cs誘導培養(yǎng)基與ms誘導培養(yǎng)基的顆粒狀愈傷**誘導率及愈傷**總誘導率均為100%,但cs誘導培養(yǎng)基的愈傷**出愈時間比ms誘導培養(yǎng)基提前至少1d;在相同培養(yǎng)條件下,與ms誘導培養(yǎng)基相比,經(jīng)cs誘導培養(yǎng)基誘導的葉片團塊狀愈傷**更大、誘導的根愈傷**更多。如圖5所示。培養(yǎng)實例6:本氏***葉片及根愈傷**誘導培養(yǎng)實例6與培養(yǎng)實例5不同的地方在于,步驟(1)將;步驟(2)將2,;步驟(3)所取葉片為本氏***無菌苗葉片,用手術剪刀將無菌葉片剪成,用鑷子將其平鋪于誘導培養(yǎng)基;步驟(4)所取根為本氏***無菌苗的根,cs誘導培養(yǎng)基的誘導結果為:本氏***葉片愈傷**誘導時,培養(yǎng)15-18d的葉片明顯增大增厚,葉片四周產(chǎn)生大量的淡綠色致密的愈傷**,愈傷**誘導率為100%,且在愈傷**團塊上已開始產(chǎn)生多個嫩綠色的不定芽;本氏***根愈傷**誘導時,培養(yǎng)9-11d在切口處產(chǎn)生大量淡黃色致密的愈傷**。MEM培養(yǎng)基含有多種必需的營養(yǎng)成分。陜西MEM a培養(yǎng)基包括什么
RPMI1640培養(yǎng)基能夠維持細胞的代謝活性。廣東MEM a培養(yǎng)基供應商家
留點溫度計標化合格后方可用于驗證試驗。檢測前,需將溫度計的**柱甩至40℃以下。每次監(jiān)測后留點溫度計的溫差應存l℃之間,則說明**器內(nèi)的溫度分布是均勻的。**后的菌片應在嚴格無菌操作條件下放入**后的溴甲酚紫胨水培養(yǎng)基內(nèi)56-60℃培養(yǎng)24-48小時,觀察顏色變化。如培養(yǎng)基變?yōu)辄S色,說明菌片中的嗜熱脂肪芽胞桿菌尚未完全滅活,**仍可在培養(yǎng)基中生長,分解葡萄糖產(chǎn)酸變?yōu)辄S色。如培養(yǎng)基顏色不變化仍為紫色,則說明芽胞已滅活。同時要用未經(jīng)**的紙片放入培養(yǎng)基內(nèi)作為陽性對照,不加紙片的空白培養(yǎng)基作為陰性對照?;瘜W指示卡上的指示色塊,在高壓蒸氣**時,由淡黃色變?yōu)楹谏?。隨著顏色變化的深淺,并與對照色相比,可判斷**效果是否達到要求?;瘜W指示卡應在干燥處保存。遇潮會變色,影響**效果的觀測。高壓蒸氣**必須使蒸氣順利進入**器內(nèi),與**物品接觸,并將原有的冷空氣排出方可達到**的效果。要進行空載熱分布和滿載熱穿透力驗證(滿載時不超過總體積的2/3)。二種驗證各重復三次,共做六次。5個點六次試驗表明溫度均在121℃,化學指示卡變黑;程度與對照色一致;培養(yǎng)基均未改變顏色,說明高壓蒸氣**效果合格。高壓**器屬于強檢儀器,但強檢只是對儀器物理參數(shù)的考核。廣東MEM a培養(yǎng)基供應商家