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pbs緩沖液的配制配方是10X的PBS母液,然后再對其母液進(jìn)行1:10稀釋即可獲得PBS緩沖液。PBS是磷酸鹽緩沖液(PhosphateBufferSaline),是生物學(xué)實驗室**常用的緩沖液之一。其主要成分包括:氯化鈉(NaCl)、氯化鉀(KCl)、磷酸氫二鈉(Na2HPO4)和磷酸二氫鉀(KH2PO4)。配制步驟:清洗干凈所需燒杯、轉(zhuǎn)子和量筒,向一個燒杯裝少量去離子水(約100ml)并放入一個轉(zhuǎn)子后放在稱量天平旁備用;向另一個燒杯裝約800ml去離子水并在微波爐或者水浴鍋(65°以上均可)中加熱。注意:由于實驗室所購買的Na2HPO4常常帶有二水、七水或者十二水,與之對應(yīng)的重量分別為1.78g、2.68g、3.58g。向燒杯中加入預(yù)熱的去離子水,燒杯放置在磁力攪拌器上攪拌溶解。用量筒定容到1L,保存?zhèn)溆?。?00ml10X的PBS母液,加入900ml去離子水即可獲得pH=7.4的PBS緩沖液(無需用pH計校準(zhǔn)PH值)。PBS緩沖液可以用于分子克隆和細(xì)胞培養(yǎng)等實驗。甘肅緩沖液代理商
生物緩沖液pH計校正及使用方法
生物緩沖液在實驗分析中經(jīng)常被用到,它的作用是穩(wěn)定溶液的pH值。然而,很多人在實驗中會遇到無法調(diào)節(jié)緩沖液pH值的情況,這是為什么呢?如何解決這個問題呢?下面我將詳細(xì)介紹。首先,從目前使用的pH計來看,國產(chǎn)的pH計或酸度計,校正緩沖液時需要注意以下兩種情況:
1、購買市場上配置好的標(biāo)準(zhǔn)溶液,在聚乙烯瓶中密封儲存。如果在室溫條件下保存1-2個月后,若出現(xiàn)渾濁、沉淀或發(fā)霉等情況,就不能繼續(xù)使用了。已經(jīng)使用過的校正緩沖液也不能再倒回去使用。2、購買緩沖劑并自己配置。大部分廠家生產(chǎn)的緩沖劑都是干燥型的pH緩沖劑,使用時需要將其溶解在之前煮沸15-30分鐘的去離子水中,然后倒入250ml容量瓶中,稀釋至刻度,充分搖勻即可。 天津有酚紅緩沖液哪家便宜緩沖液能夠提供酶所需的適pH值,這對于酶的活性至關(guān)重要。
ph值緩沖液常用三種
pH酸堿度常用的三種標(biāo)準(zhǔn)溶液:pH分別為4.0、7.0和10.0。標(biāo)準(zhǔn)緩沖液(應(yīng)選擇與供試液pH值接近的標(biāo)準(zhǔn)緩沖液),目前標(biāo)準(zhǔn)溶液有7種,在我國一般使用以下3種溶液:(pH值在25℃時)。1.鄰苯二甲酸氫鉀(KHC8H4O4)pH4.003;0.05M。2.混合磷酸鹽(Na2HPO4):磷酸二氫鉀和磷酸氫二鈉混合鹽溶液pH6.864;0.025M3.硼砂(Na2B4O7·l0H2O)pH9.182;0.01M。三種標(biāo)準(zhǔn)緩沖液的配置方法:1.pH4,鄰苯二甲酸氫鉀標(biāo)準(zhǔn)緩沖液:精密稱取在115±5℃干燥2~3小時的鄰苯二甲酸氫鉀[KHC8H4O4]10.12g,加水使溶解并稀釋至1000ml。2.pH7,磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)緩沖液(pH7.4):精密稱取在115±5℃干燥2~3小時的無水磷酸氫二鈉4.303g與磷酸二氫鉀1.179g,加水使溶解并稀釋至1000ml。3.pH9,硼砂標(biāo)準(zhǔn)緩沖液:精密稱取硼砂[Na2B4O7·10H2O]3.80g(注意:避免風(fēng)化),加水使溶解并稀釋至1000ml,置聚乙烯塑料瓶中,密塞,避免與空氣中二氧化碳接觸。
pH標(biāo)準(zhǔn)液如何正確使用及其主要作用
pH標(biāo)準(zhǔn)液是一種能使pH值保持穩(wěn)定的溶液。如果向這種溶液中加入少量的酸或堿,或者在溶液中的化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生少量的酸或堿,以及將溶液適當(dāng)稀釋,這個溶液的pH值基本上穩(wěn)定不變,這種能對抗少量酸堿或大或稀釋,而使pH值不變化的溶液就稱為緩沖溶液。 pH標(biāo)準(zhǔn)液的如何正確使用: 1、復(fù)合電極不用時,可充分浸泡溶液中。切忌用洗滌液或其他吸水性試劑1/4浸洗。 2、使用前,檢查玻璃電極前端的球泡。正常情況下,電極應(yīng)該透明而無裂紋;球PH計標(biāo)準(zhǔn)液配制泡內(nèi)要充滿溶液,不能有氣泡存在。 3、測量濃度較大的溶液時,盡量縮短測量時間,用后仔細(xì)清洗,防止被測液粘附在電極上而污染電極。 4、清洗電極后,不要用濾紙擦拭玻璃膜,而應(yīng)用濾紙吸干,避免損壞玻璃薄膜、防止交叉污染,影響測量精度。 5.測量中注意電極的銀一氯化銀內(nèi)參比電極應(yīng)浸入到球泡內(nèi)氯化物緩沖溶液中,避免電計顯示部分出現(xiàn)數(shù)字亂跳現(xiàn)象。使用時,注意將電極輕輕甩幾下。 常用作緩沖溶液的酸類由弱酸及其共軛酸鹽組合成的溶液具有緩沖作用。
所有操作均應(yīng)在通風(fēng)櫥中進(jìn)行,與苯酚接觸過的皮膚部位應(yīng)用大量水清洗,并用肥皂和水洗滌,忌用乙醇。3.苯酚平衡:因為在酸性pH條件下DNA分配于有機(jī)相,因此使用苯酚前必須對苯酚進(jìn)行平衡使其pH值達(dá)到,苯酚平衡操作方法如下:①液化苯酚應(yīng)貯存于-20℃,此時的苯酚呈結(jié)晶狀態(tài)。從冰柜中取出的苯酚首先在室溫下放置使其達(dá)到室溫,然后在68℃水浴中使苯酚充分融解。②加入羥基喹啉(8-Quinolinol)至終濃度。該化合物是一種還原劑、RNA酶的不完全抑制劑及金屬離子的弱螯合劑,同時因其呈黃色,有助于方便識別有機(jī)相。③加入等體積的1MTris-HCl(),使用磁力攪拌器攪拌15分鐘,靜置使其充分分層后,除去上層水相。④重復(fù)操作步驟③。⑤加入等體積的MTris-HCl(),使用磁力攪拌器攪拌15分鐘,靜置使其充分分層后,除去上層水相。⑥重復(fù)操作步驟⑤,稍微殘留部分上層水相。⑦使用pH試紙確認(rèn)有機(jī)相的pH值大于。⑧將苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。苯酚/氯仿/異戊醇(25:24:1)配制方法:1.說明:從核酸樣品中除去蛋白質(zhì)時常常使用苯酚/氯仿/異戊醇(25:24:1)。氯仿可使蛋白質(zhì)變性并有助于液相與有機(jī)相的分離,而異戊醇則有助于消除抽提過程中出現(xiàn)的氣泡。緩沖液的濃度會影響其緩沖能力。天津有酚紅緩沖液哪家便宜
通過選擇合適的緩沖液可以確保酶在條件下進(jìn)行催化反應(yīng)。甘肅緩沖液代理商
緩沖液濃度和溫度的影響?濃度影響?:緩沖液的濃度會影響其緩沖能力。濃度過高或過低都可能影響實驗結(jié)果。因此,需要根據(jù)實驗需求精確計算緩沖液的濃度,以確保其既能有效維持pH穩(wěn)定,又不會對實驗造成干擾。?溫度影響?:溫度的變化也會影響緩沖液的pH值。例如,Tris緩沖液的溫度效應(yīng)大,溫度變化會導(dǎo)致pH值的變化,因此在配制和使用時需要考慮溫度的影響。?6綜上所述,緩沖液在酶活性實驗中扮演著至關(guān)重要的角色,它不僅為酶提供了一個**適的pH環(huán)境,還通過其抗酸抗堿能力維持實驗環(huán)境的穩(wěn)定。選擇合適的緩沖液、控制其濃度和溫度是確保酶活性實驗準(zhǔn)確性的關(guān)鍵。甘肅緩沖液代理商