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水解乳蛋白是乳白蛋白經(jīng)蛋白酶和肽酶水解的產(chǎn)物,含豐富的多肽、氨基酸和碳水化合物。一般配制成(采用平衡鹽溶液溶解)與合成培養(yǎng)基(如MEM細(xì)胞培養(yǎng)基)以1:1的比例混合使用。目前用于細(xì)胞培養(yǎng)的血清主要是牛血清,培養(yǎng)某些特殊細(xì)胞也用人血清、馬血清等。牛血清對(duì)絕大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞都是適合的,但并不排除在培養(yǎng)某種細(xì)胞時(shí)使用其他動(dòng)物血清更合適。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、***、無(wú)機(jī)物等,這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)或**生長(zhǎng)活性是達(dá)到生理平衡的。此外,血清含一些對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性的物質(zhì),如多胺氧化酶,能與來(lái)自高度繁殖細(xì)胞的多胺反應(yīng)(如精胺、亞精胺)形成有細(xì)胞毒性作用的聚精胺。補(bǔ)體、抗體、*****等都會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng),甚至造成細(xì)胞死亡。目前,血清多作為一種添加成分與合成培養(yǎng)基混合使用,使用濃度一般為5~20%,**常用是10%。由于水解乳蛋白和血清成份復(fù)雜,批間差異大及存在**等外源污染風(fēng)險(xiǎn),對(duì)下游生物制品的分離純化和安全性都存在較大的影響,在生物制*行業(yè)的使用也越來(lái)越少。因此,基于對(duì)血漿成份的分析,合成細(xì)胞培養(yǎng)基應(yīng)運(yùn)而生。合成培養(yǎng)基是根據(jù)天然培養(yǎng)基的成分,用化學(xué)物質(zhì)模擬合成、人工設(shè)計(jì)、配制的培養(yǎng)基。減血清培養(yǎng)基提高了細(xì)胞培養(yǎng)的重復(fù)性和可靠性。山西無(wú)血清培養(yǎng)基包括
所以做過(guò)強(qiáng)檢的**器還必須進(jìn)行**效果的驗(yàn)證。一些單位常常忽略了這個(gè)重要的問(wèn)題。國(guó)內(nèi)市售的手提**器,往往儀器指針達(dá)到所需的溫度,但**物品的實(shí)際溫度卻未達(dá)到要求。導(dǎo)致**物品不徹底,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。培養(yǎng)基**不徹底,影響培養(yǎng)基的使用及結(jié)果判斷。因此高壓蒸氣**器無(wú)菌效果的驗(yàn)證是一個(gè)必須引起重視的問(wèn)題。(三)**時(shí)的注意事項(xiàng)使用高壓蒸氣**器時(shí),首先應(yīng)注意在開(kāi)放蒸氣的同時(shí),排除**器內(nèi)的冷空氣。必須將器內(nèi)冷空氣全部排除后,才可關(guān)閉排氣孔。假如**器內(nèi)仍存留有部分空氣時(shí),剛壓力表上雖已達(dá)到了某一壓力值,但器內(nèi)之溫度仍未達(dá)到相應(yīng)之度數(shù)。存留的空氣越多,剛二者相差也越大。差也越大,器內(nèi)溫度不足,**則不徹底。表蒸汽壓力與溫度的關(guān)系蒸汽壓力(kPa)密度(kg/cm2)溫度(℃)1126表高壓蒸汽**器中溫度與冷空氣排出量的關(guān)系蒸汽壓力(kPa)所達(dá)溫度。山西無(wú)血清培養(yǎng)基包括F12培養(yǎng)基提供了豐富的營(yíng)養(yǎng),支持細(xì)胞增殖。
參與細(xì)胞的代謝活動(dòng)。此外,通過(guò)提供鈉,K+和Ca2+,幫助細(xì)胞調(diào)節(jié)細(xì)胞膜功能。Na+是細(xì)胞外液中**主要的陽(yáng)離子,對(duì)維持滲透壓的恒定有決定性的作用,還與Cl-共同參與生物電活動(dòng)、維持水平衡和酸堿平衡等。K+主要分布在細(xì)胞內(nèi)液,對(duì)于***某些酶是必需的,并在調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的酸堿平衡上也有極重要意義。Ca2+和Mg2+主要參與信號(hào)傳導(dǎo)、能量代謝、脂肪酸合成、核糖體穩(wěn)定和蛋白質(zhì)合成等多種生理作用。PO43-、SO42-、HCO3-是基質(zhì)所需陰離子,同時(shí)是細(xì)胞內(nèi)電荷的調(diào)節(jié)者。磷對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)、代謝和調(diào)控都有重要的作用,含磷的化合物如核酸、磷脂、蛋白質(zhì)是構(gòu)成細(xì)胞的主要成分,ATP、ADP是能量生成、存儲(chǔ)和利用的不可或缺的化合物。上述離子對(duì)于細(xì)胞的作用各有不同,它們共同構(gòu)成了細(xì)胞賴(lài)以生存的滲透壓、pH和電化學(xué)平衡的微環(huán)境,細(xì)胞對(duì)于某種元素的吸收利用會(huì)受到其它元素的干擾,例如培養(yǎng)基中過(guò)高的鈣離子濃度會(huì)使鎂和鋅的吸收利用受到干擾。因此,在保證培養(yǎng)基中上述離子濃度滿(mǎn)足要求以外,還需保證上述離子之間種類(lèi)和比例的平衡。此外,微量元素如鐵、鈷、鎳、硒、碘、銅、鋅、錳、鉻、鉬、氟等對(duì)于細(xì)胞生長(zhǎng)代謝和產(chǎn)物合成都有促進(jìn)作用。
二氧化碳不斷被釋放,培養(yǎng)液變酸,pH值發(fā)生變化。酚紅是細(xì)胞培養(yǎng)基中**常用的pH指示劑,但依靠細(xì)胞培養(yǎng)基中的酚紅等pH指示劑進(jìn)行判斷,需要實(shí)驗(yàn)員的經(jīng)驗(yàn)積累,存在較大的主觀(guān)性。實(shí)際上,個(gè)性化細(xì)胞培養(yǎng)基或是無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基中酚紅含量較少或是不含酚紅,只能通過(guò)pH計(jì)或者pH電極進(jìn)行pH值的檢測(cè),結(jié)果更為準(zhǔn)確可靠。緩沖能力細(xì)胞培養(yǎng)基應(yīng)具有一定的緩沖能力。細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中造成細(xì)胞培養(yǎng)液pH波動(dòng)的主要物質(zhì)是細(xì)胞代謝產(chǎn)生的CO2。在封閉式培養(yǎng)過(guò)程中CO2與水結(jié)合產(chǎn)生碳酸,細(xì)胞培養(yǎng)液pH很快下降;打開(kāi)培養(yǎng)器具時(shí)CO2逸出則會(huì)引起pH升高。細(xì)胞培養(yǎng)基通常采用NaHCO3-CO2緩沖系統(tǒng),按下列化學(xué)反應(yīng)方程式調(diào)節(jié)細(xì)胞培養(yǎng)基的pH值:H2O+CO2→H2CO3?H++HCO3-NaHCO3?Na++HCO3-此外,還有緩沖能力較高的磷酸鹽緩沖系統(tǒng)。但碳酸鹽緩沖系統(tǒng)的細(xì)胞毒性小、成本低,在細(xì)胞培養(yǎng)中應(yīng)用得更為***。另一種較為常用的緩沖液是HEPES(羥乙基哌嗪乙硫磺酸)液,它是一種非離子兩性緩沖液,在pH~。高濃度的HEPES可能對(duì)細(xì)胞**性作用,細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)HEPES的添加濃度一般為10~25mmol/L。滲透壓細(xì)胞必須生活在等滲的環(huán)境中,大多數(shù)體外培養(yǎng)的細(xì)胞對(duì)滲透壓有一定耐受性。研究顯示。F12培養(yǎng)基提供了豐富的營(yíng)養(yǎng)成分,支持細(xì)胞的快速增殖。
三)、試驗(yàn)結(jié)果:初代培養(yǎng):使用本發(fā)明的消毒方法,消毒成功率能達(dá)到80%,誘導(dǎo)培養(yǎng)基萌芽率能達(dá)到90%,可以成功建立無(wú)菌再生體系。繼代培養(yǎng):使用本發(fā)明的增殖培養(yǎng)基,繡球組培苗增殖倍率能夠達(dá)到8~10倍,組培苗高度一致,生長(zhǎng)健壯。生根培養(yǎng):使用本發(fā)明的生根培養(yǎng)基,繡球組培苗生根率能夠達(dá)到95%,根系發(fā)達(dá),健壯,可以成功用于移栽大棚。本發(fā)明所指ms培養(yǎng)基是murashige和skoog研制的培養(yǎng)基,其成分配方表見(jiàn)表1。1/2ms培養(yǎng)基是指大量元素含量為ms培養(yǎng)基的一半,其他成分用量相同。表1、ms培養(yǎng)基成分表本發(fā)明涉及的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑有:6-ba—6-芐氨基嘌呤;ga3—赤霉素;iba—吲哚丁酸,naa—萘乙酸。本發(fā)明中的誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基均為液體培養(yǎng)基。本具體實(shí)施方式的實(shí)施例均為本發(fā)明的較佳實(shí)施例,并非依此限制本發(fā)明的保護(hù)范圍,故:凡依本發(fā)明的結(jié)構(gòu)、形狀、原理所做的等效變化,均應(yīng)涵蓋于本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。使用減血清培養(yǎng)基能減少實(shí)驗(yàn)的誤差和干擾。江蘇培養(yǎng)基供應(yīng)商
RPMI1640培養(yǎng)基在抗體生產(chǎn)和免疫研究中有重要作用。山西無(wú)血清培養(yǎng)基包括
第三節(jié)培養(yǎng)基的高壓**及效果驗(yàn)證消毒**在醫(yī)學(xué)實(shí)踐上有著重要意義。它可切斷傳播途徑、控制***擴(kuò)散造成的危害;也可殺滅物品或器皿上的**,防止醫(yī)院***;在醫(yī)學(xué)微生物檢驗(yàn)的領(lǐng)域中,消毒**是保正***的病原學(xué)檢驗(yàn)不受外來(lái)微生物污染的前提。(一)術(shù)語(yǔ)消毒(disinfection)、火菌(sterilization)、抑菌(bacteriostasis)、防腐(antisepsis)和無(wú)菌(asepsis)是常用術(shù)語(yǔ)。下面就術(shù)語(yǔ)概念加以敘述。(1)**。是用適當(dāng)?shù)奈锢砘蚧瘜W(xué)手段將物品中活的微生物殺滅或除去的方法。本法適用于制劑、原料、輔料及醫(yī)療器械等物品的**。(如外科器械、注射器、基礎(chǔ)培養(yǎng)基**等。)(2)消毒。是破壞物體上活的病原微生物的方法,但不包括**芽胞和非病原微生物。如用酒精溶液浸泡體溫計(jì)、新潔爾滅液擦拭檢查臺(tái)等。用于消毒的化學(xué)物品稱(chēng)消毒劑(dis-infectant)。一般而言,消毒對(duì)象是指物體而不是機(jī)體。(3)防腐。直接使用防腐劑(antiseptics)破壞或**活的病原微牛物的方法。如外科手術(shù)前碘液擦洗皮膚、雙氧水清創(chuàng)傷口或**肥皂清冼雙手等。(4)無(wú)菌。防止***病原體進(jìn)入****或物品的操作技術(shù)稱(chēng)無(wú)菌操作。無(wú)菌即為不存在活的微生物。用于消毒**的物理方法有熱力、電離輻射、超聲波、過(guò)濾等。山西無(wú)血清培養(yǎng)基包括