0.25%胰酶是細(xì)胞生物學(xué)中常用的一種生物試劑,下面匯總一下胰酶使用過(guò)程中常見的一些問(wèn)題。胰酶的使用濃度是多少?胰酶濃度:常用0.25%胰酶+0.02%EDTA作為消化液。為什么收到的胰酶會(huì)有顏色差異?商品化胰酶溶液需要用干冰運(yùn)輸,在運(yùn)輸過(guò)程中,胰酶溶液中的二氧化碳與干冰揮發(fā)的二氧化碳可能會(huì)極少部分的氣體交換,導(dǎo)致溶液PH的漂移。有些胰酶溶液里含有酚紅作為PH值指示劑,因此胰酶PH的變化是肉眼可觀察到的。由干冰運(yùn)輸過(guò)程中導(dǎo)致的PH值的變化很小,PH值會(huì)從7.2-8.0變化到了6.8左右,在PH值7.2-8.0的時(shí)候,溶液呈淡紅色;PH值6.8左右時(shí)呈淡黃色。因此胰酶顏色的變化是由PH值的變化引起,歸因于使用干冰運(yùn)輸。這種顏色的變化是行業(yè)普遍現(xiàn)象,在不同供應(yīng)商的胰酶產(chǎn)品都會(huì)出現(xiàn)。在消化酶中,胰酶主要用于促進(jìn)消化。河南國(guó)產(chǎn)胰酶哪家好
胰蛋白酶:(Trypsin)為蛋白酶的一種,是從牛、羊、豬的胰臟提取的一種絲氨酸蛋白水解酶。由223個(gè)氨基酸殘基組成的單鏈多肽,主要切割賴氨酸和精氨酸羧基端。按干燥品計(jì)算,每1mg中胰蛋白酶的活力不得少于2500單位。作用是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細(xì)胞離散。不同的組織或者細(xì)胞對(duì)胰酶的作用反應(yīng)不一樣。胰酶分散細(xì)胞的活性還與其濃度、溫度和作用時(shí)間有關(guān),在pH為、溫度為37℃時(shí),胰酶溶液的作用能力**強(qiáng)。使用胰酶時(shí),應(yīng)把握好濃度、溫度和時(shí)間,以免消化過(guò)度造成細(xì)胞損傷。終止消化時(shí),可用含有血清培養(yǎng)液終止胰酶對(duì)細(xì)胞的作用。有些細(xì)胞容易消化(如雞胚原代成纖維細(xì)胞)可用胰酶進(jìn)行消化,可以不加EDTA。 河南重組胰酶供應(yīng)商胰酶細(xì)胞消化液具有方便快速的特點(diǎn)。
胰酶操作步驟:
(*供參考) :1. 吸取培養(yǎng)基,用無(wú)菌的PBS、Hanks液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以除去殘余的血清。2. 加入適量的胰蛋白酶消化液,略蓋過(guò)細(xì)胞即可。根據(jù)細(xì)胞的特性可以增加或減少胰酶用量,室溫放置30秒至2分鐘。(不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同)3. 顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化呈白茫狀;或者用***吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái)。4. 此時(shí)吸除胰酶細(xì)胞消化液。加入含血清的完全細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入胰酶細(xì)胞消化液重新消化。
胰酶消化細(xì)胞的原理首先,胰酶消化細(xì)胞的原理涉及到胰腺的分泌。當(dāng)我們進(jìn)食后,胃內(nèi)的食物會(huì)刺激胃黏膜釋放胃液,同時(shí)也會(huì)刺激胰腺分泌胰液。胰液中含有多種酶類物質(zhì),其中包括胰蛋白酶、胰脂酶和胰淀粉酶等。這些酶類物質(zhì)會(huì)通過(guò)胰管進(jìn)入到小腸內(nèi),開始對(duì)食物進(jìn)行消化作用。其次,胰酶消化細(xì)胞的原理涉及到酶與底物的結(jié)合。胰酶在小腸內(nèi)與食物中的蛋白質(zhì)、脂肪和碳水化合物等成分結(jié)合,形成酶-底物復(fù)合物。胰蛋白酶主要作用于蛋白質(zhì),能夠?qū)⒌鞍踪|(zhì)分解為氨基酸;胰脂酶主要作用于脂肪,能夠?qū)⒅痉纸鉃楦视秃椭舅?;胰淀粉酶主要作用于碳水化合物,能夠?qū)⒌矸鄯纸鉃槠咸烟恰?**,胰酶消化細(xì)胞的原理涉及到產(chǎn)物的吸收。經(jīng)過(guò)胰酶的作用,食物中的大分子成分被分解為小分子,這些小分子能夠通過(guò)腸壁被吸收到血液循環(huán)中,為人體提供能量和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。胰酶的作用直接影響著人體對(duì)食物的消化和吸收,對(duì)維持人體的正常代謝和生理功能至關(guān)重要。綜上所述,胰酶消化細(xì)胞的原理是一個(gè)復(fù)雜而精密的過(guò)程,它涉及到胰腺的分泌、酶與底物的結(jié)合以及產(chǎn)物的吸收等環(huán)節(jié)。胰酶在人體內(nèi)發(fā)揮著重要的作用,它對(duì)人體的健康和生命至關(guān)重要。因此,我們應(yīng)該注重保護(hù)胰腺的健康,合理飲食。 消化使用的胰酶是含EDTA還是不含的?
細(xì)胞培養(yǎng)胰蛋白酶生物制品簡(jiǎn)介中文名稱:胰蛋白酶中文同義詞:胰蛋白酶;胰蛋白酶1:250(豬胰臟);胰蛋白酶1:300(豬胰臟);胰淀粉酶;胰液酵素;胰酶-EDTA溶液;胰蛋白酶1:250;蛋白酶類英文名稱:Trypsin英文同義詞:TRYPSIN;TRYPSIN,1-250;TRYPSIN,1-300;TRYPSIN-EDTA;TRYPSIN,HUMANPANCREAS;TRYPSINPORCINE;TRYPSIN,PORCINEPANCREAS;CAS號(hào):9002-07-7分子式:C6H15O12P3分子量:≈24000EINECS號(hào):232-650-8胰蛋白酶物化性質(zhì)胰蛋白酶是從牛、豬、羊的胰臟提取,純化獲得的結(jié)晶,再制成的凍干制劑。易溶于水,不溶于三氯甲烷、乙醇、**等有機(jī)溶劑。在,短時(shí)間煮沸幾乎不失活;在堿溶液中加熱則變性沉淀,Ca2+有保護(hù)和***作用,胰蛋白酶的等電點(diǎn)為。牛胰蛋白酶原有229個(gè)氨基酸組成,含6對(duì)二硫鍵,其氨基酸排列順序和晶體結(jié)構(gòu)已被闡明。在腸激酶活自身催化下,酶原的N末端賴氨酸與異亮氨酸殘基之間的肽鍵被水解,釋放出來(lái)纈-天-天-天-天-賴6肽,生成有活性的胰蛋白酶。牛的胰蛋白酶氨基酸殘基223個(gè),分子量23800[2],活性部位的絲氨酸殘基是不可缺少的絲氨酸蛋白酶。豬胰蛋白酶的化學(xué)結(jié)構(gòu)與牛胰蛋白酶十分相似,在氨基酸殘基排列順序中,只有41個(gè)氨基酸殘基不同。消化液經(jīng)過(guò)過(guò)濾除菌,可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞的消化,或者一些組織的消化。黑龍江進(jìn)口胰酶有哪些
胰酶細(xì)胞消化液具有方便快速的特點(diǎn),通常室溫消化1分鐘左右就可以消化下大多數(shù)貼壁細(xì)胞。河南國(guó)產(chǎn)胰酶哪家好
胰蛋白酶的作用是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細(xì)胞離散。不同的組織或者細(xì)胞對(duì)胰酶的作用反應(yīng)不一樣胰酶分散細(xì)胞的活性還與其濃度、溫度和作用時(shí)間有關(guān),在pH為8.0、溫度為37°℃時(shí),胰酶溶液的作用能力**強(qiáng)。使用胰酶時(shí),應(yīng)把握好濃度、溫度和時(shí)間,以免消化過(guò)度造成細(xì)胞損傷。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白質(zhì)可降低胰酶的活性,所以配制胰酶溶液時(shí)應(yīng)選用不含Ca2+、Mg2+的BSS,如:D-Hanks液。終止消化時(shí),可用含有血清培養(yǎng)液或者胰酶抑制劑終止胰酶對(duì)細(xì)胞的作用。河南國(guó)產(chǎn)胰酶哪家好