胰酶使用注意：1、在使用胰酶細(xì)胞消化液的過(guò)程中要特別注意避免消化液被細(xì)菌污染。2、胰酶細(xì)胞消化液消化細(xì)胞時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則細(xì)胞鋪板后生長(zhǎng)狀況會(huì)較差。胰酶配制方法：1、培養(yǎng)液配制，方便好用，對(duì)細(xì)胞影響小，并且培養(yǎng)液的ph值正好適合胰蛋白酶的溶解2、生理鹽水配制，要先調(diào)ph值（①胰酶（1：250）②③④⑤⑥⑦Water1000mL磁力攪拌2-3小時(shí)，調(diào)，過(guò)濾除菌。）3、pbs（：稱取胰酶粉末，先用少許滅菌過(guò)的PBS調(diào)成糊狀，然后補(bǔ)足到100ml。置室溫?cái)嚢?小時(shí)或冰箱內(nèi)過(guò)夜，過(guò)濾滅菌，分裝，4℃保存?zhèn)溆谩＃?或是hanks或是D-hanks液配制（1.稱取胰蛋白酶粉末置燒杯中，先用少許D-Hanks平衡鹽溶液（）調(diào)成糊狀，然后再補(bǔ)足D-Hanks平衡鹽溶液，攪拌混勻，置室溫4小時(shí)或冰箱過(guò)夜，并不斷攪拌振蕩；2.次日，先用濾紙粗濾，再進(jìn)行過(guò)濾除菌，分裝入瓶中，低溫冰箱保存?zhèn)溆?，常用濃度為。胰蛋白酶溶液偏酸，使用前可調(diào)用碳酸氫鈉溶液調(diào)pH至。）一般，至于作用效果，需要消化一次細(xì)胞感覺(jué)一下，因?yàn)椴煌瑥S家的酶不一樣，有的作用溫和，有的作用劇烈。4、是否需要四度放置過(guò)夜，取決于你的胰酶的純度。過(guò)去的胰酶純度不高，所以難以溶解，需要四度過(guò)夜.而現(xiàn)在的胰酶純度都很高。 培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，胰酶和雙抗該怎么用？天津重組胰酶哪個(gè)好

    (含)英文名:(含)儲(chǔ)存條件:-20℃產(chǎn)品簡(jiǎn)介:胰蛋白酶(Trypsin)是由胰臟產(chǎn)生沒(méi)有活性的胰蛋白酶原分泌到小腸后,小腸內(nèi)的腸肽酶會(huì)活化該酶原,形成胰蛋白酶。胰蛋白酶的特點(diǎn)在于已經(jīng)活化的胰蛋白酶,能夠繼續(xù)活化更多胰蛋白酶原,這種過(guò)程即自動(dòng)催化。胰蛋白酶在小腸工作,它會(huì)將蛋白質(zhì)水解為肽,進(jìn)而分解為氨基酸,其**適溫度約為37℃。胰蛋白酶-碳酸氫銨溶液()由、除菌。本試劑可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞的消化,或者一些組織的消化,通常室溫下1min左右就可以消化大多數(shù)貼壁細(xì)胞。使用說(shuō)明(*供參考):1.貼壁細(xì)胞的消化①吸除培養(yǎng)液,用無(wú)菌PBS、Hanks液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,去除殘余的血清。②加入少量胰蛋白酶-碳酸氫銨溶液(),略蓋過(guò)細(xì)胞即可,室溫放置。(不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同)③顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化;或者用***吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái),吸除胰酶細(xì)胞消化液。加入含血清的完全細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入胰蛋白酶-碳酸氫銨溶液()重新消化。⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng),未及吹打細(xì)胞,細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落。 遼寧胰酶價(jià)格信息有些胰酶溶液里含有酚紅作為PH值指示劑。

    EDTA-胰蛋白酶的配制1、胰酶是，就是說(shuō)，盡量不要用水來(lái)溶，因?yàn)橐３譂B透壓。2、EDTA的工作液溶度是－，根據(jù)細(xì)胞消化的難易程度自己調(diào)整。EDTA并不是必須的，容易消化的細(xì)胞可不加。EDTA對(duì)細(xì)胞貼壁性有影響，因此使用時(shí)要甚重。如果影響貼壁，但消化時(shí)必須要用，那么在用完全培養(yǎng)基終止消化后，可離心棄上清，再加完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，可去除EDTA。如果對(duì)貼壁沒(méi)影響，那么可不離心。3、EDTA的濃度也是質(zhì)量體積比。和胰酶一起溶于PBS。4、注意，血清可終止胰酶的作用，但不能終止EDTA的作用，對(duì)有些細(xì)胞來(lái)說(shuō)，終止消化后的離心是必要的。5、胰酶和EDTA在pH為8左右的時(shí)候**易溶解，在配制時(shí)可先滴幾滴NaOH將pH調(diào)至8，注意，胰酶可使溶液變酸，所以要邊溶邊測(cè)pH，隨時(shí)調(diào)整。注意，不可加過(guò)量NaOH，否則過(guò)堿，細(xì)胞會(huì)受不了。6、胰酶EDTA相對(duì)比較難溶，可用磁力攪拌器，或放入4度冰箱過(guò)夜，待溶解后過(guò)濾除菌。7、可配2－3乘的胰酶，這樣比較節(jié)約時(shí)間和濾器，用的時(shí)候?qū)ι蠝缇鶳BS即可。8、儲(chǔ)存液放在－20度冰箱凍存，使用液放在4度，用的時(shí)候不要放在27度水浴鍋溫浴，因?yàn)檫@樣會(huì)讓胰酶很快失效，使用前放在室溫下一會(huì)，因?yàn)榧拥牧亢苌?，所以一般不?huì)凍壞細(xì)胞。9、消化時(shí)。

常用的消化酶有:胰酶：用得**多的是胰酶。一般濃度在0.25-0.5%。作用時(shí)間根據(jù)干細(xì)胞種類、作用溫度等因素而變化很大，從幾分鐘到幾十分鐘不等。0.25%的胰酶作用于單層貼壁的干細(xì)胞，在37度條件下，一般消化1-5分鐘就足夠了。終止是用血清。主要作用于干細(xì)胞間。配制時(shí)不能用含鈣、鎂的平衡液，否則影響活性。保存于-20度。膠原酶：膠原酶是比較少用的，一般是用原代培養(yǎng)時(shí)，從組織消化下干細(xì)胞。這種方法作用溫和，對(duì)干細(xì)胞損傷較小，但是，價(jià)格也較貴。中止同樣是用血清。胰酶的質(zhì)量是影響干細(xì)胞的消化的關(guān)鍵因素之一，如果配的比較標(biāo)準(zhǔn)，消化的時(shí)候就容易消化，反之就不易消化。還要在你看到消化過(guò)頭的情況下，如果干細(xì)胞下來(lái)的比較多了，這時(shí)可以連同cmf或pbs加上營(yíng)養(yǎng)液一起傳。營(yíng)養(yǎng)液中有血清，胰酶遇到血清就會(huì)自動(dòng)終止消化，但這樣操作對(duì)干細(xì)胞是有一定的影響的。對(duì)于容易消化的干細(xì)胞，加入pbs緩沖液洗去血清或加入胰酶，先中和血清的作用（30s），棄之，再加入適量胰酶作用10s-40s（根據(jù)細(xì)胞消化的難易程度），棄之，這樣依賴殘余的胰酶就可將干細(xì)胞消化單細(xì)胞。胰蛋白酶可以用于原代細(xì)胞的傳代過(guò)程中分散組織。

胰酶分裝凍存時(shí)要注意什么？胰酶分裝時(shí)盡量分裝成多瓶，并遵守3次左右用完和只裝2/3體積的原則。因?yàn)槔鋬霰４鏁r(shí)體積會(huì)膨脹，多次使用同一瓶胰酶反復(fù)凍融會(huì)降低消化效果并增大污染的可能性。5、怎么才能判斷胰酶消化完全？注意：不是細(xì)胞全部成間隔分布很離散的單個(gè)圓形才表示消化好了。一般肉眼觀察貼壁細(xì)胞層，只要能移動(dòng)了，多半呈沙狀移動(dòng)就可以了，就應(yīng)該停止消化。6、胰酶適用于哪些細(xì)胞消化？它的消化效果與哪些有關(guān)呢？胰酶適用于消化細(xì)胞間質(zhì)較少的軟組織和傳代細(xì)胞，如胚胎、上皮、肝、腎等組織，但對(duì)纖維性組織和較硬的*組織效果較差。胰酶的消化效果主要與pH值、溫度、胰酶濃度、組織塊大小和硬度有關(guān)。胰蛋白酶是一種異源蛋白酶，與培養(yǎng)皿結(jié)合可以降解細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)。海南重組胰酶代理商

EDTA是一種化學(xué)螯合劑，主要作用在于能螯合Ca、Mg離子，使細(xì)胞分離。天津重組胰酶哪個(gè)好

細(xì)胞消化胰酶的配制對(duì)一般細(xì)胞0.25%胰酶(胰蛋白酶，Trypsin)配方：100mlPBS,0.25g胰酶步驟：1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2·12H2O/2.9gPO4HNa2,0.2gKCl,0.2gPO4H2K溶于1000ml蒸餾水)2稱胰酶0.25g3加入PBS中，低速攪拌〈4h冰浴中,或者4℃過(guò)夜低速攪拌0.5h冰浴中4調(diào)PH7.45仍在冰浴中6過(guò)濾，分裝，-20℃保存，4℃短期內(nèi)用完tip:低速很重要，機(jī)械攪拌對(duì)酶是一種沖擊，如果起沫，酶就變性了。低溫，防止酶失活對(duì)難消化的細(xì)胞：在上述配方中，加入0.02g的EDTA(0.02%)tip:因?yàn)镋DTA可以絡(luò)合Ca2+，增加消化效力天津重組胰酶哪個(gè)好