Endo H糖苷內(nèi)切酶H：結(jié)構(gòu)、功能及其在糖生物學(xué)中的應(yīng)用摘要Endo H糖苷內(nèi)切酶H（Endo H）是一種專門切割N-連接糖鏈的內(nèi)切酶，用于糖生物學(xué)和蛋白質(zhì)工程領(lǐng)域。本文將探討Endo H的結(jié)構(gòu)特性、催化機制、以及其在研究和臨床應(yīng)用中的潛力。引言N-連接糖基化是一種在真核細胞中普遍存在的蛋白質(zhì)修飾方式，涉及將糖鏈添加到蛋白質(zhì)的天冬酰胺殘基上。Endo H作為一種內(nèi)切酶，能夠特異性地識別并切割N-連接糖鏈中的β-N-乙酰葡糖胺苷鍵，從而在蛋白質(zhì)工程和生物制藥中發(fā)揮重要作用。Endo H的結(jié)構(gòu)特性Endo H通常來源于流感嗜血桿菌（Hemophilus influenzae），其分子質(zhì)量約為50 kDa。該酶由兩個結(jié)構(gòu)域組成：一個負責(zé)識別糖鏈的催化結(jié)構(gòu)域和一個有助于酶穩(wěn)定性的非催化結(jié)構(gòu)域。催化機制Endo H的催化機制涉及對N-連接糖鏈的特異性識別和切割。酶的活性位點含有多個氨基酸殘基，這些殘基與糖鏈的特定結(jié)構(gòu)相互作用，導(dǎo)致酶對底物的高特異性。Endo H催化的糖苷鍵斷裂是一水解反應(yīng)，需要水分子的參與?？缒さ鞍自谒拗骷毎械谋磉_水平通常有點低，研發(fā)困難，對蛋白表達生產(chǎn)平臺技術(shù)要求極高。Recombinant Cynomolgus TSLP Protein,His Tag

糖苷內(nèi)切酶H是一種重組糖苷酶，能夠?qū)-糖蛋白中的高甘露糖和某些雜合型寡聚糖的殼二糖結(jié)構(gòu)進行切割，去除糖蛋白中的N-連接高甘露糖。糖苷內(nèi)切酶H克隆自褶皺鏈霉菌（Streptomycesplicatus）。并在酵母中重組表達。本產(chǎn)品帶his標(biāo)簽，常應(yīng)用于抗體及其相關(guān)蛋白完全去糖基化。另外，我司還提供其他類型的糖苷酶，包括糖苷內(nèi)切酶S（Cat#20413ES），酵母重組表達的N-糖苷酶F（比活性：750000U/mL），酵母重組表達的N-糖苷酶F（比活性：100000U/mL）。儲存條件-15~-25℃保存，有效期1年。使用說明變性條件下蛋白質(zhì)去糖基化1）在水中加入1μLBuffer1和目標(biāo)糖蛋白（1-20μg），至終體積10μL；2）100℃溫度下煮沸10min使其變性，冰上冷卻，離心10秒；3）加入2μL的Buffer2，8μL去離子水，總反應(yīng)體積20μL；4）加入1-2μL的EndoH，輕輕混勻。在37℃孵育1-3h。5）65℃下熱失活10分鐘。非變性條件下蛋白質(zhì)去糖基化1）在水中加入2μL的Buffer2和目標(biāo)糖蛋白（1-20μg）至終體積為20μL。2）加入2~5μL的EndoH,輕輕混勻。3）37°C孵育4-24h。注意：在變性條件下大多數(shù)底物能夠更好的去糖基化，在非變性條件下可能需要增加EndoH的量和延長孵育時間。Recombinant Cynomolgus CD3E/CD3 epsilon Protein,hFc Tag在蛋白質(zhì)工程中，PNGase F可以用于改變蛋白質(zhì)的糖基化模式，以研究糖基化對蛋白質(zhì)功能的影響。

膠原蛋白是哺乳動物體內(nèi)含量多的功能性蛋白[1]。膠原蛋白由3條α鏈的多肽鏈亞基組成，α鏈自身構(gòu)型為左手螺旋，三條α鏈又互相纏繞成右手螺旋結(jié)構(gòu)，即膠原蛋白的“膠原域”[2]。膠原蛋白的一級結(jié)構(gòu)分析結(jié)果顯示，其肽鏈由(Gly-X-Y)n組成，其中X通常是脯氨酸，Y通常是羥脯氨酸[3]。按照膠原蛋白發(fā)現(xiàn)的先后順序，可將其分為Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型等28種膠原蛋白[4]，Ⅰ型膠原蛋白分子組成為[α1(Ⅰ)]2α2(Ⅰ)，主要分布于骨骼中[5]；Ⅱ型膠原蛋白由[α1(Ⅱ)]3組成，主要由軟骨細胞產(chǎn)生，因其含有大量賴氨酸殘基，因而糖基化率較高[6]；Ⅲ型膠原蛋白分子組成為[α1(Ⅲ)]3，因含半胱氨酸所以肽鏈間形成二硫鍵，因此其本身就可形成細纖維，Ⅲ型膠原蛋白血管中含量較高，主要存在于肺泡間質(zhì)中且分布雜亂，因而形成復(fù)雜的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，正是這種結(jié)構(gòu)使得肺組織具有良好的柔韌性與彈性，并且可以為細胞提供充足養(yǎng)分，使得皮膚飽滿透亮[7]。

胰蛋白酶是一種絲氨酸蛋白酶，可特異切割賴氨酸及精氨酸C末端形成的肽鍵。重組胰蛋白酶多用大腸桿菌或酵母系統(tǒng)重組表達并經(jīng)過多步層析純化獲得，無糜蛋白酶等雜酶污染。重組胰蛋白酶與天然提取的胰蛋白酶相比具有相同的特性，其氨基酸序列與豬源胰蛋白酶序列同源。因其無動物源污染性和純度高，在醫(yī)藥開發(fā)、生化研究、蛋白組學(xué)等領(lǐng)域中有著廣泛的應(yīng)用。翌圣目前可提供2款重組胰蛋白酶，分別為藥典級（Cat#40512ES）、質(zhì)譜級（Cat#20416ES）藥典級：大腸桿菌表達的重組胰蛋白酶，氨基酸序列與豬胰腺來源的胰蛋白酶完全一致，生產(chǎn)過程不使用任何動物源原料，無外源性的病毒污染，可替代豬胰腺來源胰蛋白酶應(yīng)用于各種生物技術(shù)過程中，如：細胞培養(yǎng)、細胞發(fā)酵、蛋白質(zhì)的酶解或各種組織的細胞分離等。本產(chǎn)品純度高、不含雜酶、宿主蛋白和DNA殘留量符合藥典標(biāo)準(zhǔn)，避免了雜質(zhì)對細胞生長的影響，pH為7.0-9.0，穩(wěn)定pH為2±0.5。質(zhì)譜級：畢赤酵母表達的重組豬胰蛋白酶，在GMP法規(guī)下生產(chǎn)，不含任何動物源成分，無動物源性的病毒污染，天然缺乏糜蛋白酶活性，并已過濾除菌。在蛋白質(zhì)的晶體學(xué)研究中，去除糖鏈可以幫助獲得去糖基化的蛋白質(zhì)，這有助于更清晰地解析蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)。

RecombinantBiotinylatedHumanHLA-A*02:01&B2M&MAGE-A4orMAGE-A8(KVLEHVVRV)MonomerProtein,His-AviTag性能參數(shù)分子別名（Synonyms）MAGE-A4orMAGE-A8;MAGE-A4;MAGE-A8;表達區(qū)間及表達系統(tǒng)（Source）BiotinylatedHumanHLA-A*02:01&B2M&MAGE-A4orMAGE-A8(KVLEHVVRV)MonomerProteinisexpressedfromHEK293withHistagandAvitagattheC-Terminus.ItcontainsGly25-Thr305(HLA-A*02:01),Ile21-Met119(B2M)andKVLEHVVRVpeptide.[Accession|A0A140T913(HLA-A*02:01)&P61769(B2M)&KVLEHVVRV]分子量大小（MolecularWeight）TheproteinhasapredictedMWof50.50kDa.Duetoglycosylation,theproteinmigratesto52-62kDabasedonSDS-PAGEresult.（Endotoxin）Lessthan1EUperμgbytheLALmethod.純度（Purity）>95%asdeterminedbySDS-PAGEandHPLC.制劑（Formulation）Suppliedas0.22μmfilteredsolutioninPBS(pH7.4).儲存條件Theproductshouldbestoredat-85~-65℃for1yearfromdateofreceipt.分子膠降解劑通過誘導(dǎo)不同的Ub連接酶與目標(biāo)蛋白之間的相互作用來促進目標(biāo)蛋白的降解。Arg-Gly-Asp-Ser

透明質(zhì)酸的生物相容性使其在生物材料領(lǐng)域具有潛在應(yīng)用，如作為藥物遞送載體。Recombinant Cynomolgus TSLP Protein,His Tag

大腸桿菌系統(tǒng)通常是小分子細胞質(zhì)蛋白或結(jié)構(gòu)域表達的宿主。用大腸桿菌生產(chǎn)蛋白質(zhì)，由于只需要簡單的培養(yǎng)基和條件，因此費用低且方便。此外，除了無細胞表達，它是速度的系統(tǒng)，大腸桿菌倍增時間（約20min）比酵母（2h）、昆蟲細胞和哺乳動物細胞都快。一般來說，在大腸桿菌中表達重組蛋白包括：1.將一個編碼目標(biāo)蛋白的質(zhì)粒導(dǎo)入宿主菌；2.培養(yǎng)細胞至對數(shù)生長期；3.誘導(dǎo)蛋白表達。選擇合適的表達載體合適的宿主選定后，相應(yīng)的有許多工程化克隆位點和用于驅(qū)動蛋白表達的非編碼序列的載體可用。啟動子通常是可誘導(dǎo)的，以在細胞生長到合適的密度前阻止目標(biāo)蛋白表達。大部分載體還提供目標(biāo)蛋白與一系列蛋白標(biāo)簽構(gòu)建融合蛋白的選擇。常用的大腸桿菌表達載體分為以下兩大類：E．coliRNA聚合酶轉(zhuǎn)錄的載體Recombinant Cynomolgus TSLP Protein,His Tag