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Recombinant Human SPARC(BM-40)

來源: 發(fā)布時(shí)間:2024-08-13

T4UvsX重組酶是一種來源于T4噬菌體的酶,屬于RecA/Rad51家族的同源體。這種重組酶在雙鏈DNA斷裂的修復(fù)以及復(fù)制叉重新啟動(dòng)的過程中扮演著重要角色。T4UvsX重組酶能夠與其他DNA結(jié)合蛋白或輔助因子協(xié)同作用,與單鏈DNA形成核酸蛋白復(fù)合物。該復(fù)合物通過尋找與目標(biāo)DNA互補(bǔ)的區(qū)域進(jìn)行雜交,以完成鏈置換反應(yīng),且此酶本身不具有核酸酶活性。產(chǎn)品應(yīng)用方面,T4UvsX重組酶主要用于等溫?cái)U(kuò)增技術(shù),如重組酶聚合酶擴(kuò)增(RPA)技術(shù)。它在實(shí)驗(yàn)中與T4UvsY重組酶、BsuDNA聚合酶(大片段)、T4基因32蛋白(gp32)等組分一同使用,以優(yōu)化RPA擴(kuò)增反應(yīng)。T4UvsX重組酶的保存條件為-20℃,可保存3年,或者-20℃儲(chǔ)存有效期為2年,避免反復(fù)凍融。其儲(chǔ)存液通常包含Tris-HCl、KCl、DTT、EDTA和甘油等成分,以保持酶的穩(wěn)定性和活性。熱失活處理為60℃孵育10分鐘。在使用T4UvsX重組酶時(shí),需要注意其保存液中甘油含量較高,建議單獨(dú)分裝保存,并且在操作時(shí)穿著實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套,以確保安全。此外,該產(chǎn)品供科研使用,不應(yīng)用于臨床診斷。SpCas9-NLS的應(yīng)用范圍廣泛,可用于細(xì)胞內(nèi)的CRISPR/Cas9系統(tǒng)介導(dǎo)的基因編輯。Recombinant Human SPARC(BM-40)

Recombinant Human SPARC(BM-40),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶是一種經(jīng)過改造的高活性Tn5轉(zhuǎn)座酶,與ProteinA融合,形成一種新型融合酶,應(yīng)用于CUT&Tag技術(shù)中,用于研究蛋白質(zhì)與基因組DNA的相互作用。這種融合酶具備以下特點(diǎn):1.**高活性**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶是超高活性的突變形式,體外轉(zhuǎn)座效率比野生型高1000倍。2.**ProteinA融合**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶的N端結(jié)構(gòu)域?yàn)镻roteinA的一部分,可以與免疫球蛋白的Fc區(qū)相互作用,特別是與大多數(shù)哺乳動(dòng)物的IgG結(jié)合。3.**Tn5轉(zhuǎn)座酶活性**:C端結(jié)構(gòu)域?yàn)門n5轉(zhuǎn)座酶,能夠特異性識(shí)別轉(zhuǎn)座子兩端反向重復(fù)的ME序列(MosaicEnd),并在形成轉(zhuǎn)座復(fù)合體后隨機(jī)插入靶DNA中。4.**應(yīng)用廣**:適用于CUT&Tag技術(shù)、高通量測(cè)序建庫、ATAC-seq等,特別適用于早期胚胎發(fā)育、干細(xì)胞、以及表觀遺傳學(xué)等研究領(lǐng)域。5.**操作簡(jiǎn)便**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶的使用簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)步驟,可以在一步反應(yīng)中實(shí)現(xiàn)DNA片段化和接頭連接,從細(xì)胞到二代測(cè)序文庫的轉(zhuǎn)化過程需9小時(shí)。6.**低細(xì)胞投入量**:CUT&Tag技術(shù)允許從低至60個(gè)細(xì)胞的樣本中獲得結(jié)果,甚至可以應(yīng)用于單細(xì)胞水平的研究。7.**高質(zhì)量結(jié)果**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶的使用可以保證DNA片段化,同時(shí)獲得的蛋白純度高、核酸殘留低。Recombinant Human ILDR2 Protein,hFc Tag在目標(biāo)蛋白的C末端添加His標(biāo)簽和Avi標(biāo)簽。有助于通過親和層析進(jìn)行蛋白純化,而Avi標(biāo)簽則可以用于生物素。

Recombinant Human SPARC(BM-40),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

脫氧腺苷三磷酸(Deoxyadenosinetriphosphate,dATP)是一種去氧核苷酸三磷酸,它是DNA合成和復(fù)制過程中必需的原料之一。dATP的結(jié)構(gòu)與腺苷三磷酸(ATP)相似,但dATP的五碳糖2號(hào)碳上缺少一個(gè)-OH基,取而代之的是一個(gè)氫原子。dATP是四種dNTPs(脫氧核糖核苷酸三磷酸)之一,四種dNTPs包括dATP、dCTP、dGTP和dTTP,它們分別對(duì)應(yīng)DNA中的腺嘌呤、胞嘧啶、鳥嘌呤和胸腺嘧啶。dATP的化學(xué)式為C10H16N5O12P3,分子量為491.182,CAS登錄號(hào)為1927-31-7。在實(shí)驗(yàn)室中,dATP通常以100mM的濃度提供,用于各種分子生物學(xué)技術(shù),如PCR、DNA測(cè)序和分子克隆技術(shù)。dATP溶液需要在低溫條件下保存,通常是-20℃,以保持其穩(wěn)定性和活性。在DNA測(cè)序中,dATP與ddATP一起使用,ddATP是dATP的衍生物,它缺少3'-OH基團(tuán),用于Sanger測(cè)序中的鏈終止反應(yīng)。在PCR中,dATP作為DNA聚合酶的底物,用于合成新的DNA鏈。dNTPs的濃度在PCR反應(yīng)中非常重要,適當(dāng)?shù)臐舛扔兄跍p少錯(cuò)配和提高擴(kuò)增效率。通常,四種dNTPs以等濃度混合使用,以減少PCR過程中的錯(cuò)配誤差。在某些情況下,根據(jù)目標(biāo)序列的長(zhǎng)度和組成,可能需要調(diào)整dNTPs的濃度,以優(yōu)化PCR反應(yīng)。

1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)是一種用于合成互補(bǔ)DNA(cDNA)的試劑盒,它通過逆轉(zhuǎn)錄過程從信使RNA(mRNA)或總RNA模板合成cDNA的鏈。這類試劑盒通常包含逆轉(zhuǎn)錄酶(ReverseTranscriptase,RT)和其他必要的組分,以確保高效和準(zhǔn)確的cDNA合成。RNaseH-表示該試劑盒使用的逆轉(zhuǎn)錄酶缺乏RNaseH活性,這意味著在合成cDNA鏈的過程中不會(huì)發(fā)生RNA的降解,從而可以產(chǎn)生更高產(chǎn)量的全長(zhǎng)cDNA,特別是從較長(zhǎng)的模板(可達(dá)13kb)。該試劑盒通常包括以下組分:-逆轉(zhuǎn)錄酶,如RevertAidHMinusM-MuLVReverseTranscriptase,它通過點(diǎn)突變完全消除了RNaseH活性。-RiboLockRNaseInhibitor,這是一種重組蛋白,可有效保護(hù)RNA在高達(dá)55°C的溫度下不受RNases的降解。-緩沖液、dNTPs(去氧核苷酸三磷酸)和其他輔助成分,以支持cDNA合成反應(yīng)。-有時(shí)還包括用于去除RNA樣品中污染的基因組DNA的DNaseI。合成的cDNA可以作為PCR或?qū)崟r(shí)PCR的模板直接使用,也適用于第二鏈cDNA合成或線性RNA放大。此外,可以在cDNA合成過程中加入放射性或非放射性標(biāo)記的核苷酸,以便在包括微陣列在內(nèi)的雜交實(shí)驗(yàn)中作為探針使用。在CRISPR-Cas9等基因編輯技術(shù)中,使用Pfu DNA Polymerase進(jìn)行修復(fù)模板的合成。

Recombinant Human SPARC(BM-40),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

5'DNA腺苷?;噭┖械膯尾椒磻?yīng)是一種高效的酶促反應(yīng),用于在DNA分子的5'端添加一個(gè)腺苷酸(AMP)基團(tuán)。這個(gè)過程通常涉及以下步驟:1.**準(zhǔn)備反應(yīng)混合物**:-根據(jù)試劑盒說明書,將所需的5'磷酸化的單鏈DNA(ssDNA或pDNA)、MthRNA連接酶(或其他腺苷?;福TP和相應(yīng)的緩沖液按比例混合。2.**孵育反應(yīng)**:-將混合好的反應(yīng)體系在指定的溫度(通常是65℃)下孵育一定的時(shí)間,以允許酶將ATP中的AMP部分轉(zhuǎn)移到DNA的5'端。3.**酶失活**:-反應(yīng)完成后,通常在85℃孵育5分鐘以失活腺苷酰化酶,這一步是為了防止后續(xù)的去腺苷?;F(xiàn)象,確保反應(yīng)的穩(wěn)定性。4.**產(chǎn)物收集**:-由于轉(zhuǎn)化效率高,通常不需要進(jìn)行凝膠純化步驟??梢酝ㄟ^乙醇沉淀等方法收集腺苷?;蟮腄NA產(chǎn)物。5.**產(chǎn)物應(yīng)用**:-收集的腺苷?;疍NA可以直接用于后續(xù)的克隆、測(cè)序、連接或其他分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。6.**注意事項(xiàng)**:-確保所有操作在無RNA酶和無DNA酶的環(huán)境中進(jìn)行,以避免污染。-使用時(shí)需注意反應(yīng)體系的準(zhǔn)確性,確保底物、酶和ATP的比例適當(dāng)。單步反應(yīng)的優(yōu)勢(shì)在于簡(jiǎn)化了操作流程,減少了樣品處理的復(fù)雜性,并且由于高轉(zhuǎn)化效率,避免了耗時(shí)的純化步驟,從而節(jié)省了時(shí)間和成本。Phusion DNA Polymerase 應(yīng)在后面加入反應(yīng)體系中,以避免其3'-5'外切酶活性降解引物。Recombinant Human CLEC-1 Protein,hFc Tag

Pfu DNA Polymerase的熱穩(wěn)定性和保真性使其在優(yōu)化PCR條件時(shí)更為靈活,比如在GC含量較高的模板中。Recombinant Human SPARC(BM-40)

PCR抑制劑是指那些在PCR反應(yīng)中能夠干擾或阻礙DNA擴(kuò)增的物質(zhì)。這些物質(zhì)通常來源于生物樣本本身或者樣本的收集和處理過程。以下是一些PCR抑制劑的特點(diǎn):1.**多樣性**:PCR抑制劑可以是多種不同的化合物,包括膽酸鹽、尿素、血紅素、酚類化合物、蛋白質(zhì)、多糖、植物或血液成分等。2.**來源**:它們可能來自血液(如血紅素)、尿液(如尿素)、糞便(如膽酸鹽)、植物(如多酚和多糖)、土壤(如腐殖酸)或化學(xué)物質(zhì)(如酚類化合物)。3.**影響**:抑制劑可以影響DNA聚合酶的活性,干擾引物的退火,或與DNA模板發(fā)生非特異性結(jié)合,導(dǎo)致PCR擴(kuò)增效率降低或特異性下降。4.**復(fù)雜性**:由于樣本來源的復(fù)雜性,不同的抑制劑可能需要不同的策略來克服。某些抑制劑可能通過物理方法(如離心、過濾)去除,而其他抑制劑可能需要化學(xué)處理或使用特定的PCR增強(qiáng)劑。5.**濃度依賴性**:抑制效果通常與抑制劑的濃度有關(guān)。在較低濃度下,某些抑制劑可能不會(huì)影響PCR,但隨著濃度增加,抑制效果會(huì)變得更加明顯。6.**特異性**:某些抑制劑可能對(duì)特定的DNA聚合酶或PCR體系有特定的影響。例如,一些抑制劑可能特別影響高GC含量的模板擴(kuò)增。Recombinant Human SPARC(BM-40)