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高效慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)優(yōu)化方案

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2023-01-20

慢病毒載體的研究發(fā)展得很快,研究的也非常深入,在美國(guó)已經(jīng)開(kāi)展了臨床研究,效果非常理想,因此具有廣闊的應(yīng)用前景。慢病毒也被guang fan地應(yīng)用于表達(dá)RNAi的研究中。由于有些類型細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑瞬時(shí)轉(zhuǎn)染效果差,轉(zhuǎn)移到細(xì)胞內(nèi)的siRNA半衰期短,體外合成siRNA對(duì)基因表達(dá)的抑制作用通常是短暫的,因而使其應(yīng)用受到較大的限制。近幾年LentiBOOST作為一種無(wú)毒性的化學(xué)轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑guang fan引起關(guān)注。LentiBOOST通過(guò)與細(xì)胞膜相互作用降低膜黏稠度,提高脂質(zhì)交換和跨膜轉(zhuǎn)運(yùn),提高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。研究證實(shí)LentiBOOST在不影響轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞存活、增殖及分化能力的前提下,提高小鼠T細(xì)胞、HSCs和人HSCs的慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑是什么?高效慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)優(yōu)化方案

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為了達(dá)到研究目的,在轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中加入轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑也能有效提高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。近幾年LentiBOOST作為一種無(wú)毒性的化學(xué)轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑guang fan引起關(guān)注。LentiBOOST通過(guò)與細(xì)胞膜相互作用降低膜黏稠度,提高脂質(zhì)交換和跨膜轉(zhuǎn)運(yùn),提高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。LentiBOOST是德國(guó)Sirion Biotech開(kāi)發(fā)的一種高效、無(wú)細(xì)胞毒性的慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑,用于臨床前和臨床的慢病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)。它是一種非離子型、非受體依賴性的表面活性劑,通過(guò)降低細(xì)胞膜粘稠度、提高脂質(zhì)交換和跨膜轉(zhuǎn)運(yùn),促進(jìn)慢病毒與細(xì)胞膜的融合,提高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。NK細(xì)胞慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)實(shí)驗(yàn)在轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中加入轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑。

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影響轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的另一個(gè)關(guān)鍵參數(shù)是gan ran復(fù)數(shù)(MOI),MOI指的是每個(gè)細(xì)胞gan ran的病毒粒子個(gè)數(shù),病毒粒子滴度以gan ran單位(IU)/mL 或 TU/mL表示。慢病毒的gan ran能力隨細(xì)胞類型的不同而不同,因此每種不同的細(xì)胞類型需要不同的MOI。MOI值越大,慢病毒gan ran上的可能性也越大,gan ran效率越高,但對(duì)細(xì)胞的毒性也越大。另外細(xì)胞需要的MOI值越大,也說(shuō)明細(xì)胞越難被轉(zhuǎn)導(dǎo)。SIRION Biotech 為研究機(jī)構(gòu)和醫(yī)院開(kāi)發(fā)了一種定制的許可模式,并為臨床試驗(yàn)提供良好的 GMP 材料供應(yīng)條件。LentiBOOST 目前在美國(guó)和歐洲的多個(gè)臨床試驗(yàn)中使用。LentiBOOST(Pharma grade)jin用于藥物級(jí)的臨床前研究和工藝開(kāi)發(fā),以及評(píng)估研究。LentiBOOST(GMP grade)用于臨床階段方案,目前美國(guó)和歐洲多個(gè) Phase III 和 Phase I/II 臨床試驗(yàn)正在進(jìn)行。Lentiboost可增強(qiáng)慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)效率,高達(dá)90%以上,研究證明對(duì)于細(xì)胞增殖無(wú)不良影響,且在T細(xì)胞中觀察到一定的促增殖效果??蓽p少M(fèi)OI,從而降低物料成本。均勻增加慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞的數(shù)量,但不會(huì)過(guò)度增加單個(gè)細(xì)胞病毒載體拷貝數(shù)(VCN),符合FDA/EMA對(duì)ATMP產(chǎn)品的安全標(biāo)準(zhǔn)

慢病毒載體是一種源于人類免疫缺陷病毒的基因載體,被guang fan用于真核細(xì)胞如造血干細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞的基因編輯。隨著對(duì)基因遞送工具長(zhǎng)期深入的研究,慢病毒作為基因載體已然guang fan用于基礎(chǔ)研究和臨床實(shí)踐當(dāng)中。如在白血病的臨床zhi liao中,慢病毒可以gan ranT細(xì)胞,使其可以識(shí)別并且殺滅Zhong LiuB細(xì)胞;在地中海貧血的zhi liao中,慢病毒可以將正常的β-珠蛋白基因序列送入造血干細(xì)胞中,矯正貧血癥狀;它還在很多單基因遺傳病的zhi liao中發(fā)揮很大作用。隨著后基因組時(shí)代的來(lái)臨,基因zhi liao在醫(yī)學(xué)研究中所占比重越來(lái)越大。一些難以geng zhi或者緩解的傳統(tǒng)疾病可以通過(guò)基因zhi liao緩解甚至zhi yu,慢病毒為未來(lái)基因zhi liao的發(fā)展提供了新的工具和方法。哪種試劑可以幫助增強(qiáng)慢病毒轉(zhuǎn)染?

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目前,CAR-T細(xì)胞主要通過(guò)病毒載體制備,大多數(shù)情況下由慢病毒或逆轉(zhuǎn)錄病毒做載體。慢病毒載體(LVs)由于其有效的將基因整合進(jìn)靶細(xì)胞基因組,穩(wěn)定的基因表達(dá)等特點(diǎn),被認(rèn)為是Zui有希望的基因zhi liao載體。與其他病毒載體相比,慢病毒載體的整合模式具有更低的致Ai風(fēng)險(xiǎn),以及隨機(jī)整合基因風(fēng)險(xiǎn)低,因此,用慢病毒載體生產(chǎn)CAR-T細(xì)胞更加安全有效,而且靈活。更重要的是慢病毒相較于其他病毒載體,生產(chǎn)成本相對(duì)較低。另外,慢病毒載體可以轉(zhuǎn)導(dǎo)分化細(xì)胞,也可以轉(zhuǎn)導(dǎo)分化細(xì)胞,因此,慢病毒載體可以轉(zhuǎn)導(dǎo)更為guang fan的細(xì)胞,包括那些難轉(zhuǎn)導(dǎo)的血液前體細(xì)胞,神經(jīng)細(xì)胞,淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。新合成的逆轉(zhuǎn)錄病毒DNA整合到宿主DNA中,稱為原病毒。淺談慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)體系

國(guó)內(nèi)做慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑的公司。高效慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)優(yōu)化方案

慢病毒載體可以將外源基因有效地整合到宿主染色體上,從而達(dá)到持久性表達(dá)目的序列的效果。在gan ran能力方面可有效地gan ran神經(jīng)元細(xì)胞、肝細(xì)胞、心肌細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、干細(xì)胞等多種類型的細(xì)胞,從而達(dá)到良好的的基因zhi liao效果。對(duì)于一些較難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,如原代細(xì)胞、干細(xì)胞、不分化的細(xì)胞等,使用慢病毒載體,能da da提高目的基因的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率,且目的基因整合到宿主細(xì)胞基因組的幾率da da增加,能夠比較方便快捷地實(shí)現(xiàn)目的基因的長(zhǎng)期、穩(wěn)定表達(dá)。LentiBOOST是德國(guó)Sirion Biotech開(kāi)發(fā)的一種高效、無(wú)細(xì)胞毒性的慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑,用于臨床前和臨床的慢病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)。高效慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)優(yōu)化方案

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