NSD3在抑制肺腺AI糖酵解中的作用機(jī)理

來(lái)源：發(fā)布時(shí)間：2024-09-20

肺AI 仍然是全球AI癥相關(guān)死亡的主要原因。肺腺AI （LUAD）是肺AI 的一種常見(jiàn)亞型，約占肺AI 的40%。組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶NSD3在大多數(shù)腫LIU中發(fā)揮了必要的表觀遺傳調(diào)控機(jī)制，但NSD3是否參與肺腺AI 的發(fā)生與發(fā)展尚不清楚。

2024年8月，中南大學(xué)劉雙及石穎共同通訊在Adv Sci（IF=14.3）上，發(fā)表“Histones Methyltransferase NSD3 Inhibits Lung Adenocarcinoma Glycolysis Through Interacting with PPP1CB to Decrease STAT3 Signaling Pathway”的研究成果。揭示NSD3在肺腺AI 的發(fā)展中的非表觀遺傳調(diào)節(jié)作用，并提示NSD3能夠成為肺腺AI 治LIAO中的一個(gè)潛在靶點(diǎn)。

圖形摘要：

Highlights如下：

1）NSD3水平下調(diào)與肺腺AI 的臨床特征和較差的生存率有關(guān)。

2）NSD3YI制肺腺AI 的增殖、遷移和侵襲。

3）NSD3YI制糖酵解。

4）機(jī)制上，NSD3作為中間物，在與PPP1CB和p-STAT3結(jié)合，形成三聚體，PPP1CB使p-STAT3水平去磷酸化，從而YI制HK2轉(zhuǎn)錄，YI制肺腺AI 進(jìn)展。

臨床相關(guān)性：

LUAD中NSD3的低擴(kuò)增頻率和低拷貝數(shù)與較好的生存率明顯相關(guān)。

功能研究：

在體內(nèi)和體外，敲除NSD3可促進(jìn)LUAD的腫LIU生長(zhǎng)。

機(jī)制研究：

（1）NSD3通過(guò)HK2YI制糖酵解

基于TCGA、GEO肺腺AI 數(shù)據(jù)集，使用ssGSEA分析發(fā)現(xiàn)NSD3與糖酵解呈負(fù)相關(guān)（圖1a）。過(guò)表達(dá)或敲除NSD3發(fā)現(xiàn)，NSD3YI制糖酵解酶（圖1b-c）。此外，NSD3能YI制乳酸生成和葡萄糖消耗（圖1d-g）。進(jìn)一步挽救實(shí)驗(yàn)表明NSD3通過(guò)YI制HK2來(lái)YI制LUAD的糖酵解（圖1h-i）。

圖1 NSD3通過(guò)HK2YI制糖酵解（Ref. Fig 2）

（2）NSD3通過(guò)下調(diào)STAT3磷酸化YI制HK2

已有研究證明，STAT3、p53、HIF-1α、C-MYC等在HK2轉(zhuǎn)錄調(diào)控中起著至關(guān)重要的作用。檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，NSD3過(guò)表達(dá)YI制STAT3在727絲氨酸位點(diǎn)的磷酸化，而敲除NSD3則促進(jìn)STAT3的激HUO （圖2a-b）。隨后，用STAT3YI制劑Stattic處理，發(fā)現(xiàn)StatticYI制HK2的水平（圖2c-d），說(shuō)明NSD3引起的HK2表達(dá)變化依賴(lài)于STAT3的激HUO 。此外，進(jìn)一步挽救實(shí)驗(yàn)表明NSD3通過(guò)影響STAT3的激HUO 來(lái)調(diào)節(jié)HK2（圖2e-f）。

圖2 NSD3通過(guò)下調(diào)STAT3磷酸化YI制HK2（Ref. Fig 3）

（3）NSD3通過(guò)與PPP1CB結(jié)合YI制STAT3磷酸化

為了探索NSD3調(diào)控STAT3激HUO 的機(jī)制，進(jìn)行anti-NSD3 IP-MS分析。發(fā)現(xiàn)絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酶PPP1CB可與NSD3相互作用（圖3a）。內(nèi)源性和外源性Co-IP分析顯示NSD3、PPP1CB和p-STAT3之間存在相互作用（圖3b-c）。過(guò)表達(dá)NSD3的A549細(xì)胞中進(jìn)行Co-IP實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示過(guò)表達(dá)NSD3可促進(jìn)NSD3、PPP1CB和p-STAT3的結(jié)合，但過(guò)表達(dá)NSD3會(huì)降低p-STAT3的蛋白豐度（圖3d）。此外，NSD3過(guò)表達(dá)或敲除不影響PPP1CB的水平（圖3e-g）。免YI熒光也證實(shí)NSD3、PPP1CB和p-STAT3的共定位（圖3h）。

進(jìn)一步驗(yàn)證PPP1CB對(duì)STAT3 727絲氨酸位點(diǎn)的調(diào)控功能。

在NSD3敲除的細(xì)胞中過(guò)表達(dá)PPP1CB，結(jié)果顯示PPP1CB存在可以YI制NSD3缺失引起的STAT3激HUO （圖3i）。同時(shí)，NSD3YI制STAT3在727絲氨酸位點(diǎn)的激HUO ，過(guò)表達(dá)PPP1CB可進(jìn)一步YI制STAT3的激HUO （圖3j）。這些數(shù)據(jù)表明PPP1CB是與NSD3結(jié)合催化p-STAT3 (Ser 727)去磷酸化并YI制HK2轉(zhuǎn)錄的磷酸酶。

圖3 NSD3通過(guò)與PPP1CB結(jié)合YI制STAT3磷酸化（Ref. Fig 4/S5）

結(jié)論：本研究細(xì)致地闡明了NSD3在肺腺AI （一種NSD3表達(dá)較低的AI癥）中的作用。低表達(dá)的NSD3與肺腺AI 患者不良預(yù)后正相關(guān)。功能上，NSD3YI制了肺腺AI 的增殖、遷移、侵襲和Warburg效應(yīng)。機(jī)制上，NSD3與PPP1CB和p-STAT3形成蛋白三聚體，從而刺激PPP1CB對(duì)p-STAT3去磷酸化，YI制HK2的轉(zhuǎn)錄，ZUI終YI制肺腺AI 中的Warburg效應(yīng)。提示NSD3是肺腺AI 的一個(gè)有希望的治LIAO靶點(diǎn)。