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浙江病毒二代測序分析診斷

來源: 發(fā)布時(shí)間:2022-06-04

深度測序技術(shù)對科學(xué)研究范式相關(guān)影響:個性化醫(yī)學(xué)、P4醫(yī)學(xué)和準(zhǔn)確醫(yī)學(xué)等研究范式都是在近幾年深度測序技術(shù)迅猛發(fā)展的基礎(chǔ)上提出的。個人基因組測定的可行性,使得大眾有可能測定和分析自己的基因組、尋找到個人健康相關(guān)的基因風(fēng)險(xiǎn)因素,從而可以在生活習(xí)慣、飲食等方面提早進(jìn)行個性化預(yù)測和預(yù)防。由于互聯(lián)網(wǎng)的發(fā)展和即時(shí)檢驗(yàn)技術(shù)(point-of-care-testing,POCT)的應(yīng)用,人們可以通過網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行交流和參與到整個診療過程,這便是P4醫(yī)學(xué)的概念:預(yù)測性(predictive)、預(yù)防性(preventive)、個性化(personalized)及參與性(participatory)。高通量測序技術(shù)是對傳統(tǒng)測序一次性的改變。浙江病毒二代測序分析診斷

深度測序技術(shù)稱為深度測序(deepsequencing),是因?yàn)樗菍鹘y(tǒng)測序技術(shù)的一次性改變,它通過一次性對幾十萬到幾百萬條DNA分子進(jìn)行序列測定(之前只是幾十至多幾千個堿基),同時(shí),如此的高通量測序使得對一個物種的轉(zhuǎn)錄組和基因組進(jìn)行細(xì)致全方面的分析成為可能。你以為深度測序只是一種“養(yǎng)”在實(shí)驗(yàn)室“深閨”中摸不著、看不透的高精尖技術(shù)?錯!錯!錯!深度測序技術(shù)的巨大發(fā)展,與計(jì)算機(jī)的發(fā)展歷程有著類似之處,它將對人類的科學(xué)、經(jīng)濟(jì)和社會三個方面產(chǎn)生深遠(yuǎn)的影響。浙江病毒二代測序分析診斷測序的完成程度,決定著基因組的下游應(yīng)用。

全基因組測序要注意的事項(xiàng):全基因組測序是對未知基因組序列的物種進(jìn)行個體的基因組測序。技術(shù)路線:提取基因組DNA,然后隨機(jī)打斷,電泳回收所需長度的DNA的片段(0.2~5Kb),加上接頭,進(jìn)行DNA簇(Cluster)制備,后利用Paired-End(Solexa)或者M(jìn)ate-Pair(SOLiD)的方法對插入片段進(jìn)行測序。然后對測得的序列組裝成Contig,通過Paired-End的距離可進(jìn)一步組裝成Scaffold,進(jìn)而可組裝成染色體等。組裝效果與測序深度與覆蓋度、測序質(zhì)量等有關(guān)。常用的組裝有:SOAPdenovo、Trimity、Abyss等。測序深度(Sequencingdepth)是指測序得到的堿基總量(bp)與基因組大小的比值,它是評價(jià)測序量的指標(biāo)之一。測序深度與基因組覆蓋度之間是一個正相關(guān)的關(guān)系,測序帶來的錯誤率或假陽性結(jié)果會隨著測序深度的提升而下降。測序的個體,如果采用的是雙末端或Mate-Pair方案,當(dāng)測序深度在50X~100X以上時(shí),基因組覆蓋度和測序錯誤率控制均得以保證,后續(xù)序列組裝成染色體才能變得更容易與準(zhǔn)確。

深度測序和個性化醫(yī)學(xué)的范式相比,P4醫(yī)學(xué)更強(qiáng)調(diào)早期預(yù)測和預(yù)防,強(qiáng)調(diào)對患者了解的系統(tǒng)性和參與性。準(zhǔn)確醫(yī)學(xué)的概念則是在基因測序普及的基礎(chǔ)上,將整個個體的各種信息如生理信息(通過可穿戴設(shè)備可以即時(shí)監(jiān)控和收集到)和腸道菌群變化、各種組學(xué)信息(深度測序測定)整合,進(jìn)行準(zhǔn)確的疾病分型、調(diào)整和預(yù)防。隨著老年化時(shí)代的到來及臨床資源的限制,基于這三種范式的健康管理和準(zhǔn)確診療將成為生物醫(yī)學(xué)研究與應(yīng)用的基本范式,走向大眾生活,正如當(dāng)年的計(jì)算機(jī)發(fā)展歷程一樣,會從原來的大型機(jī)器演變成可移動的小型工具。醫(yī)學(xué)與健康的將來也會隨著深度測序的普及和生物信息學(xué)數(shù)據(jù)處理能力的大幅度提高,而進(jìn)入個性化的大眾管理時(shí)代。病毒株都需要獲得盡量完整的基因組序列來指導(dǎo)下一步的研究。

目前對我國首例輸入性裂谷熱病例病毒進(jìn)行全基因組測定,分析其進(jìn)化來源及潛在變異.方法提取樣本核酸,非特異性反轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增病毒基因組RNA,使用IonTorrent二代測序儀進(jìn)行病毒全基因組測定.對獲得的基因組數(shù)據(jù)進(jìn)行序列拼接、比對、進(jìn)化樹構(gòu)建和關(guān)鍵位點(diǎn)分析.結(jié)果通過測定獲得了病毒全基因組11979nt,該測定病毒屬E基因分支,序列與先前南非分離株Kakamas相似度較高(>98%).病毒Gn蛋白C端信號肽區(qū)存在1個氨基酸突變.結(jié)論本研究分析測定的裂谷熱病毒全基因組與目前非洲流行株高度相似,病毒基因特征未出現(xiàn)明顯變異。病毒全基因組測序具有的特點(diǎn):更加貼合需求。DNA病毒高通量測序進(jìn)化分析哪家好

測序覆蓋度是反映測序隨機(jī)性的指標(biāo)之一。浙江病毒二代測序分析診斷

RNA病毒基因組測序:動物、人、植物被特定病毒株侵染、分離到病毒株、連續(xù)傳代的病毒株往往都需要獲得盡量完整的基因組序列來指導(dǎo)下一步的研究,傳統(tǒng)的sanger測序需要了解序列、設(shè)計(jì)引物、做很多PCR,往往效率很低,而NGS作為一種無需特異性引物擴(kuò)增的測序方式,可以直接從RNA中獲得序列。如果,1,您的目的是:獲得一種指定RNA病毒盡量完整的序列;2,您可以提供該病毒的中英文名稱;3,您了解樣本中病毒的載量情況、培養(yǎng)狀況、ct值等任一信息。那么,RNA病毒基因組測序可以幫助你,探普為你準(zhǔn)備了完整的下單、樣本準(zhǔn)備方法。浙江病毒二代測序分析診斷