非正規(guī)胎牛血清的產品會存在很多的問題:疫區(qū)來源,無合格質檢使胎牛血清存在生物學污染:支原體、噬菌體、病毒、原蟲等,會直接影響實驗的結果和穩(wěn)定。工藝不規(guī)范,導致采集的原血放置時間過長或操作不當導致溶血,血液中血細胞裂解,血清顏色呈紅色或暗紅色,這樣的血清含有許多胞內產物,里面很多物質都會對細胞有刺激作用,影響實驗的穩(wěn)定性和數(shù)據的真實性。血清批次不穩(wěn)定,添加來補?很多不法商販拿到低廉的疫區(qū)原料血清進行加工生產,為了保障血清的培養(yǎng)效果會對血清進行處理,較為常見的是添加、轉鐵蛋白、BSA、生長因子等,還有的會和新生牛血清、培養(yǎng)基等勾兌,更有甚者用的根本就不是牛血清,此類操作對所有生物學實驗都有巨大的影響。胎牛血清提供結合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他等,能結合或調變它們所結合的物質活力。舟山標準級胎牛血清報價
血清的主要作用:對培養(yǎng)中的細胞起到某些保護作用:有一些細胞,如內皮細胞、骨髓樣細胞可以釋放蛋白酶,血清中含有抗蛋白酶成分,起到中和作用。這種作用是偶然發(fā)現(xiàn)的,則有目的的使用血清來終止胰蛋白酶的消化作用。因為胰蛋白酶已經被較廣用于貼壁細胞的消化傳代。血清蛋白形成了血清的粘度,可以保護細胞免受機械損傷,特別是在懸浮培養(yǎng)攪拌時,粘度起到重要作用。血清還含有一些微量元素和離子,他們在代謝醫(yī)治中起重要作用,如SeO3,硒等。深圳特級胎牛血清哪里有血清還含有一些微量元素和離子,他們在代謝醫(yī)治中起重要作用。
血清的保存應該注意:血清中的沉淀物、絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會影響血清本身的質量,可用離心3000rpm,5分鐘去除,也可不用處理,顯微鏡下"小黑點"。經過熱處理過的血清,沉淀物的形成會明顯增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點",常誤認為血清受污染,一般情況下,此小黑點不會影響細胞生長,但如果懷疑血清質量,則應立即停止使用,更換另一批號的血清。切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中的有效成分會破壞而影響血清質量。
血清的保存應該注意:需要長期保存的血清必須儲存于-20℃-70℃低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月,由于血清結冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃至-70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天。然后移入室溫,待全部溶解后再分裝。在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生。切勿直接將血清從-20℃進入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝集而出現(xiàn)沉淀。血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物。
血清的安全風險因素主要有以下方面:地理因素,地理因素包括血清產地的流行病學趨勢、基礎設施情況以及血源供應量。措施得當可以預防能避免的動物疾病,同時產地國穩(wěn)定可靠的基礎設施,對保證供應鏈的安全也十分必要。血源是否充足則決定了血清是否可源源不斷地持續(xù)供應。生產,生產遵循cGMP指南,則可保證血清質量,降低有關無菌過濾、摻加和標簽錯誤的風險。cGMP為現(xiàn)場審核的開展提供了框架。生產過程中對血清進行有效的無菌過濾也是十分重要的。產品質控,有效的無菌過濾使得細菌污染的風險很低。對于支原體和病毒篩查,一些相關規(guī)范內部存在一定的方法靈活性,這使得采取不同方法進行支原體和病毒篩查成為可能,并且有時使得要篩查的病毒種類無需太多。有效輻照,要進一步降低外源因子風險,可對血清進行輻照(25–40 kGy)。但輻照并不能保證病毒污染的完全去除。輻照過量會導致FBS效能下降。胎牛血清支持細胞增殖(Sp2/0-Ag14) 生長曲線(接種濃度)大增殖濃度≥2.5×106 個/ml。舟山標準級胎牛血清報價
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血清為何要熱滅活,有必要對所有血清都滅活嗎?如何正確的進行滅活?加熱可以滅活補體系統(tǒng)。啟動的補體系統(tǒng)參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,啟動淋巴細胞和巨噬細胞活化。在免疫學研究中,培養(yǎng)ES細胞、昆蟲細胞和平滑肌細胞時,推薦使用熱滅清。實驗顯示,熱滅清對大多數(shù)的細胞而言是不需要的,對于非必須的細胞來說血清滅活對于細胞生長只有微小甚至無任何作用,還可能造成生長速率降低,沉淀物還會明顯增多,不利于細胞觀察。因此,若非必須,不需要對血清進行滅活處理。將需要進行處理的血清置于56℃水浴30min,建議加放空白對照(同體積水)使用溫度計測溫,以測得溫度為56℃時為計時起始點,加熱中可不時輕度旋轉混勻血清。舟山標準級胎牛血清報價