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珠海實時光纖成像記錄技術(shù)方案

來源: 發(fā)布時間:2022-04-10

在體光纖成像記錄直接標記法不涉及細胞的遺傳修飾,標價能夠在體外培養(yǎng)時主動與細胞結(jié)合,也可以將標記直接注射到動物體內(nèi),間接標記法,將報告基因引入細胞,并翻譯成酶、受體、熒光或生物發(fā)光蛋白如果報告基因的表達是穩(wěn)定的,標記的細胞可以在整個細胞的生命周期中被觀察到。由于報告基因通常被傳遞給后代細胞,因此細胞增殖也能夠得到體現(xiàn)。體內(nèi)標記是指將探針直接注射進入機體,常用的標記方法是靜脈注射氧化鐵納米顆粒。光學(xué)成像方法可分為基于熒光的方法和基于生物發(fā)光的方法。偏振是實現(xiàn)在體光纖成像記錄的關(guān)鍵特性之一。珠海實時光纖成像記錄技術(shù)方案

珠海實時光纖成像記錄技術(shù)方案,在體光纖成像記錄

在體光纖成像記錄和傳統(tǒng)的體外成像或細胞培養(yǎng)相比有著明顯優(yōu)點。首先,在體光纖成像記錄能夠反映細胞或基因表達的空間和時間分布,從而了解活的物體動物體內(nèi)的相關(guān)生物學(xué)過程、特異性基因功能和相互作用。由于可以對同一個研究個體進行長時間反復(fù)查看成像,既可以進步數(shù)據(jù)的可比性,避免個體差異對試驗結(jié)果的可影響,又不需要殺死模式動物,節(jié)省了大筆科研用度。第三,尤其在藥物開發(fā)方面,在體光纖成像記錄更是具有劃時代的意義。根據(jù)統(tǒng)計結(jié)果,由于進進臨床研究的藥物中大部分由于安全題目而終止,導(dǎo)致了在臨床研究中大量的資金浪費。在體實時影像光纖方案在體光纖成像記錄都需要光學(xué)技術(shù)配合生物樣本的特性發(fā)展。

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目前大部分高水平的文章還是應(yīng)用生物發(fā)光的方法來研究活的物體動物體內(nèi)成像。但是,熒光成像有其方便,直觀,標記靶點多樣和易于被大多數(shù)研究人員接受的優(yōu)點,在一些植物分子生物學(xué)研究和觀察小分子體內(nèi)代謝方面也得到應(yīng)用。對于不同的研究,可根據(jù)兩者的特點以及實驗要求,選擇合適的方法。例如利用綠色熒光蛋白和熒光素酶對細胞或動物進行雙重標記,用成熟的在體光纖成像記錄進行體外檢測,進行分子生物學(xué)和細胞生物學(xué)研究,然后利用生物發(fā)光技術(shù)進行動物體內(nèi)檢測,進行活的物體動物體內(nèi)研究。

在體光纖成像記錄,指的是利用光學(xué)的探測手段結(jié)合光學(xué)探測分子對細胞或者組織甚至生物體進行成像,來獲得其中的生物學(xué)信息的方法。傳統(tǒng)的動物實驗方法需要在不同的時間點處死實驗動物,以獲得多個時間點的實驗數(shù)據(jù)。而在體光纖成像記錄則可以對同一觀察目標進行連續(xù)的查看并記錄其變化,從而達到簡化實驗的目的。光在體內(nèi)組織中傳播時會被散射和吸收,血紅蛋白吸收可見光中藍綠光波段的大部分,但是波長大于600nm的紅光波段無法被其吸收,可以穿過組織和皮膚被檢測到。在相同的深度情況下,檢測到的發(fā)光強度和細胞數(shù)量具有線性關(guān)系。光源的發(fā)光強度隨深度增加而衰減,血液豐富的組織/系統(tǒng)衰減多,與骨骼相鄰的組織/系統(tǒng)衰減少。在體光纖成像記錄待成像物體所處環(huán)境為血管,支氣管。

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在體光纖成像記錄的目的是實時檢測細胞的活性變化。基于鈣離子濃度變化的熒光成像技術(shù)被較多用來記錄神經(jīng)元活性。在體光纖記錄方法與傳統(tǒng)的在體電生理記錄方法有著不同的特點,光纖記錄因其穩(wěn)定、方便、易上手而應(yīng)用較多。首先,將熒光蛋白表達在特定類型的神經(jīng)元中,光纖記錄可以實現(xiàn)細胞類型特異性的活性檢測,而用電生理記錄的方法記錄特定類型的神經(jīng)元的活性比較困難。其次,電生理記錄容易受到環(huán)境中的電信號以及動物的行為動作影響,而光纖記錄相對來說有著較強的抗干擾性能。然后,光纖記錄相對穩(wěn)定,可以很容易實現(xiàn)長時程的活性檢測,例如動物的整個學(xué)習(xí)過程,而利用電生理記錄實現(xiàn)起來則相對困難。較后,光纖記錄用神經(jīng)元群體的熒光強度變化來表征神經(jīng)元整體的活性變化,不能反映單個神經(jīng)元的活性,而電生理記錄則能夠檢測到單個神經(jīng)元的活性,具有更高的空間分辨率。在體光纖成像記錄整機一體化,輕巧便攜。珠海實時光纖成像記錄技術(shù)方案

在體光纖成像記錄為一項新興的分子、 基因表達的分析 檢測技術(shù)。珠海實時光纖成像記錄技術(shù)方案

小動物在體光纖成像記錄圖像處理軟件除了提供含有光子強度標尺的成像圖片外,還能計算分析發(fā)光面積、總光子數(shù)、光子強度的相關(guān)參數(shù)供實驗者參考。原則上,如預(yù)實驗時拍攝出圖片非特異性雜點多,需降低曝光時間;反之,如信號過弱可適當(dāng)延長曝光時間。但曝光時間的延長,不單增加了目的信號,對于背景噪音也存在一個放大效應(yīng)。同一批實驗應(yīng)保持一致的曝光時間,同時還應(yīng)保持標本相對位置和形態(tài)的一致,從而減少實驗誤差。進行熒光成像時,實驗者可選擇背景熒光低不容易反光的黑紙放在動物標本身下,減少金屬載物臺的反射干擾。珠海實時光纖成像記錄技術(shù)方案