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廈門全自動膜片鉗技術(shù)服務(wù)

來源: 發(fā)布時間:2023-06-04

膜片鉗使用的注意事項:1.向玻璃微電極灌注內(nèi)液時切勿灌太多(1cm左右為適),以防液體進入銀絲底部增加噪聲。2.安裝玻璃微電極時,電極應(yīng)與銀絲平行,防止刮蹭銀絲電極。3.玻璃微電極需先用甲醇浸泡,再用酒精燈微燒兩端,使其平滑。4.換液時應(yīng)時刻觀察浴槽,防止液面過低或液體溢出污染鏡頭,很適液面為微高于出液口。5.浴槽及灌流系統(tǒng)用畢請及時清洗,防止長菌影響實驗。6.打雷天氣必須禁止膜片鉗實驗。7.干燥季節(jié)請先用手觸摸金屬框架釋放身體的靜電。8.每位實驗者請在E盤建立自己的文件夾儲存數(shù)據(jù)。膜片鉗實驗要從一大批的實驗數(shù)據(jù)中,經(jīng)過處理和分析,得出有意義、有價值的結(jié)果和結(jié)論。廈門全自動膜片鉗技術(shù)服務(wù)

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膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù)實驗流程之電機制備和實驗的記錄和分析數(shù)據(jù):電極制備:膜片微電極是將玻璃毛細(xì)管用電極拉制儀拉制而成的,主要分為以下步驟:拉制:膜片微電極是將玻璃毛細(xì)管用拉管儀拉制而成。涂硅酮樹酯:將硅酮樹酯涂于微電極的較尖銳端以外的部分,然后將其通過加熱鎳鉻電阻線圈而烘干變固。熱刨光:在顯微鏡下,將微電極尖銳端接近熱源進行熱刨光處理可提高巨阻抗封接的成功率。充灌微電極液:用于灌充微電極的液體需經(jīng)為空濾膜過濾,除去妨礙巨阻抗封接形成的灰塵。進行實驗,記錄和分析數(shù)據(jù):準(zhǔn)備工作就緒后即可進行實驗操作,數(shù)據(jù)記錄和分析。蘇州細(xì)胞生物學(xué)離子通道技術(shù)膜片鉗使用操作注意:用儀器的同學(xué)必須履行實驗室相關(guān)要求,完成值日等相關(guān)工作。

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膜片鉗在通道研究中的重要作用:對離子通道生理與病理情況下作用機制的研究:通過對各種生理或病理情況下細(xì)胞膜某種離子通道特性的研究,了解該離子的生理意義及其在疾病過程中的作用機制。如對鈣離子在腦缺血神經(jīng)細(xì)胞損害中作用機制的研究表明,缺血性腦損害過程中,Ca2+ 介導(dǎo)現(xiàn)象起非常重要的作用,缺血缺氧使Ca2+通道開放,過多的Ca2+進入細(xì)胞內(nèi)就出現(xiàn)Ca2+超載,導(dǎo)致神經(jīng)元及細(xì)胞膜損害,膜轉(zhuǎn)運功能障礙,嚴(yán)重的可使神經(jīng)元壞死。

膜片鉗的應(yīng)用:對單細(xì)胞形態(tài)與功能關(guān)系的研究:將膜片鉗技術(shù)與單細(xì)胞逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈?zhǔn)欠磻?yīng)技術(shù)結(jié)合,在全細(xì)胞膜片鉗記錄下,將單細(xì)胞內(nèi)容物或整個細(xì)胞(包括細(xì)胞膜)吸入電極中,將細(xì)胞內(nèi)存在的各種mRNA全部快速逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,再經(jīng)常規(guī)PCR擴增及待檢的特異mRNA的檢測,借此可對形態(tài)相似而電活動不同的結(jié)果做出分子水平的解釋或為單細(xì)胞逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)提供標(biāo)本,為同一結(jié)構(gòu)中形態(tài)非常相似但功能不同的事實提供分子水平的解釋。膜片鉗技術(shù)本質(zhì)上也屬于電壓鉗范疇。

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膜片鉗技術(shù)之全細(xì)胞記錄的實驗流程:(1)仔細(xì)檢查實驗系統(tǒng)各儀器間的線路連接。(2)依次打開各儀器的電源開關(guān)和實驗軟件,檢查各參數(shù)的初始設(shè)置。(3)將樣品置于倒置顯微鏡的載物臺上。(4)電極安裝。(5)偏移電位的補償和電極電阻的測定:在微操縱器控制下使微電極進入浴液,電流基線通常會立刻漂離零位,若此時處于VC模式,在維持電壓為零時,通過調(diào)節(jié)偏移電位補償,使電流基線等于零,此時可見基線上疊加有響應(yīng)電流方波。(6)細(xì)胞封接。(7)電極電容補償:若無特殊要求,一般將保持電位設(shè)為受試細(xì)胞靜息電位平均值。膜片鉗使用操作注意:拉制儀提前預(yù)熱(至少30min)。且用完及時關(guān)閉。廈門全自動膜片鉗技術(shù)服務(wù)

膜片鉗和電壓鉗的區(qū)別:電壓鉗技術(shù)只能用來研究整個細(xì)胞膜或一大塊細(xì)胞膜上所有離子通道活動。廈門全自動膜片鉗技術(shù)服務(wù)

膜片鉗實驗中電極制備之在電極前端涂以硅酮樹脂(sylgard),其目的是為了降低電極與灌流液之間的電容,并形成一個親水界面。經(jīng)此處理后,上述電容可由6~8pF減少到1pF以下。硅酮樹脂對形成Giga?鄄seals無影響,但可減少本底噪音,對單通道記錄很重要。在進行全細(xì)胞記錄時,不用硅酮樹脂也可以得到滿意的效果,通常微電極在涂抹硅酮樹脂后再進行拋光,但較好是在涂抹后一小時內(nèi)拋光,否則很難改變電極尖銳端的形狀。全自動膜片鉗在藥物篩選中的應(yīng)用:全自動膜片鉗技術(shù)一個重要的應(yīng)用方向是檢測早期藥物化合物對hERG的毒副作用。hERG通道產(chǎn)生的電流是心室復(fù)極中較重要的電流。通道被藥物后抑制直接導(dǎo)致LongQT綜合癥,很可能演變成尖銳端扭轉(zhuǎn)型室性心動過速,心室纖顫,直至猝死。目前發(fā)現(xiàn)幾乎所有的臨床藥物所至的LQT或者TdP都作用于hERG,且導(dǎo)致hERG抑制的藥物在化學(xué)結(jié)構(gòu)上沒有明顯的共性,從而很難預(yù)測,只有通過實驗的方式給予解決。廈門全自動膜片鉗技術(shù)服務(wù)

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