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常州藥理學(xué)膜片鉗技術(shù)研究方案

來源: 發(fā)布時間:2023-06-13

膜片鉗使用的注意事項:1.為了防止塵埃、靜電傷害機器,每天做實驗前請用清水拖地。2.拉制儀使用前需預(yù)熱15-30min。3.銀絲電極及地線發(fā)白時,請先用砂紙輕微打磨,再浸入新鮮的次氯酸鈉溶液鍍氯化銀,如果銀絲電極30min未變黑,則考慮更換次氯酸鈉。4.先開放大器,后開軟件;先關(guān)軟件,后關(guān)放大器。5.非必須用到汞燈時請不要打開汞燈電源,打開后至少需1個小時才可關(guān)閉。6.在放大器打開時不能用手、金屬物品或其它導(dǎo)電的物品接觸電極絲(包括地線),在取放細胞片時請關(guān)閉放大器。膜片鉗技術(shù)用特制的玻璃微吸管吸附于細胞表面,使之形成10~100MΩ的高阻封接,被孤立的小膜片面積為微米數(shù)量級,因此封接范圍內(nèi)細胞膜光有少數(shù)離子通道。膜片鉗使用操作注意:電腦里面的軟件不得隨意刪改。常州藥理學(xué)膜片鉗技術(shù)研究方案

常州藥理學(xué)膜片鉗技術(shù)研究方案,膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù)

膜片鉗技術(shù)及其應(yīng)用:它是作者在\"膜片鉗技術(shù)及其應(yīng)用\"領(lǐng)域所進行的研究工作的總結(jié),同時也吸取了國際上的先進技術(shù)和新近的研究成果。內(nèi)容包括:細胞電生理與膜片鉗技術(shù),膜片鉗系統(tǒng)的組建及實驗技術(shù)概要,膜片鉗放大器原理與低噪聲設(shè)計,單通道和全細胞電流記錄技術(shù),數(shù)據(jù)采集和分析,細胞分泌活動的膜電容監(jiān)測技術(shù)和安培測量技術(shù),細胞內(nèi)鈣離子濃度的測量及鈣庫特性,腦切片膜片鉗技術(shù),心肌細胞的藥理特性和植物細胞的離子通道特性。廈門醫(yī)學(xué)膜片鉗全細胞記錄技術(shù)膜片鉗技術(shù)的應(yīng)用范圍:膜片鉗技術(shù)在通道中的研究。

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膜片鉗技術(shù)基本原理與特點:膜片鉗技術(shù)本質(zhì)上也屬于電壓鉗范疇,兩者的區(qū)別關(guān)鍵在于:①膜電位固定的方法不同;②電位固定的細胞膜面積不同,進而所研究的離子通道數(shù)目不同。電壓鉗技術(shù)主要是通過保持細胞跨膜電位不變,并迅速控制其數(shù)值,以觀察在不同膜電位條件下膜電流情況。因此只能用來研究整個細胞膜或一大塊細胞膜上所有離子通道活動。目前電壓鉗主要用于巨大細胞的全性能電流的研究,特別在分子克隆的卵母細胞表達電流的鑒定中發(fā)揮著其他技術(shù)不能替代的作用。膜片鉗技術(shù)是在電壓鉗技術(shù)發(fā)展起來的,電壓鉗是利用負反饋技術(shù)將膜電位在空間和時間上固定于某一測定值。

膜片鉗技術(shù)的基本原理和方法:膜片鉗技術(shù)是在電壓鉗技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的,電壓鉗是利用負反饋技術(shù)將膜電位在空間和時間上固定于某一測定值,以研究動作電位產(chǎn)生過程中膜的離子通透性與膜電位之間的依從關(guān)系。但電壓鉗只能研究一個細胞上眾多通道的綜合活動規(guī)律,而無法反映單個通道的活動特點,同時通過細胞內(nèi)微電極引導(dǎo)記錄的離子通道電流其背景噪聲太大。膜片鉗技術(shù)的優(yōu)勢是可利用負反饋電子線路,將微電極吸附的1μm2至幾個平方微米細胞膜的電位固定在一定水平上,對通過通道的微小離子電流作動態(tài)或靜態(tài)的觀察。膜片鉗技術(shù)的應(yīng)用范圍:對離子通道生理與病理作用機制的研究。

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膜片鉗又稱單通道電流記錄技術(shù),用特制的玻璃微吸管吸附于細胞表面,使之形成10~100的密封(giga-seal),又稱巨阻封接,被孤立的小膜片面積為μm量級,內(nèi)中只有少數(shù)離子通道。然后對該膜片實行電壓鉗位,可測量單個離子通道開放產(chǎn)生的pA(10的負12次方安培)量級的電流,這種通道開放是一種隨機過程。通過觀測單個通道開放和關(guān)閉的電流變化,可直接得到各種離子通道開放的電流幅值分布、開放幾率、開放壽命分布等功能參量,并分析它們與膜電位、離子濃度等之間的關(guān)系。還可把吸管吸附的膜片從細胞膜上分離出來,以膜的外側(cè)向外或膜的內(nèi)側(cè)向外等方式進行實驗研究。這種技術(shù)對小細胞的電壓鉗位、改變膜內(nèi)外溶液成分以及施加藥物都很方便。全自動膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標:藥液交換迅速。細胞內(nèi)、外液的交換是在平面芯片上進行。蕪湖細胞生物學(xué)腦定位膜片鉗

膜片鉗的應(yīng)用:在心血管藥理研究中的應(yīng)用。常州藥理學(xué)膜片鉗技術(shù)研究方案

膜片鉗電生理技術(shù)的樣本種類:從較早的肌細胞、神經(jīng)元和內(nèi)分泌細胞發(fā)展到血細胞、肝細胞、耳蝸毛細胞、胃壁細胞、上皮細胞、內(nèi)皮細胞、免疫細胞、精母細胞等多種細胞;從急性分散細胞和培養(yǎng)細胞發(fā)展到組織片乃至整體動物;從蝸牛、青蛙、蠑螈、爪蟾母細胞發(fā)展到雞細胞、大鼠細胞、人細胞等;從動物細胞發(fā)展到細菌及植物細胞。此外,膜片鉗技術(shù)還普遍地應(yīng)用到平面雙分子層(planarbilayer)、脂質(zhì)體(liposome)等人工標本上。研究對象:從對離子通道(配體門控性離子通道、電壓門控性離子通道、第二信使介導(dǎo)的離子通道、機械敏感性離子通道及縫隙連接通道等)的研究發(fā)展到對離子泵、交換體及可興奮細胞的胞吞、胞吐機制的研究等。膜片鉗電極已不單單是傳統(tǒng)意義上的電信號記錄電極,它還可作為其他研究方法的工具使用,如用于進行單細胞PCR技術(shù)時的細胞內(nèi)容物抽吸。常州藥理學(xué)膜片鉗技術(shù)研究方案

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