全自動(dòng)膜片鉗的優(yōu)勢(shì):自動(dòng)化:抓取細(xì)胞、形成封接、破膜等整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作全部自動(dòng)化,極大的節(jié)約實(shí)驗(yàn)人員的時(shí)間精力。簡(jiǎn)約化:傳統(tǒng)膜片鉗所需要的顯微鏡、顯微操作系統(tǒng)、微電極拉制儀,防震臺(tái)、屏蔽網(wǎng)等全都不需要。效率高:是傳統(tǒng)膜片鉗實(shí)驗(yàn)效率的5-10倍。可靠性:實(shí)驗(yàn)結(jié)果輕松復(fù)制。經(jīng)濟(jì)實(shí)惠:藥物消耗低,每次實(shí)驗(yàn)記錄較低只需5μl內(nèi)外液體。零技術(shù)門(mén)檻:無(wú)需膜片鉗操作經(jīng)驗(yàn),輕松上手。高芯片封接:封接電阻可達(dá)1GΩ。確保實(shí)驗(yàn)可靠性。兼容性強(qiáng):可與市場(chǎng)上大多數(shù)放大器兼容。應(yīng)用范圍廣:除擁有傳統(tǒng)膜片鉗功能外,還可以對(duì)手動(dòng)膜片鉗無(wú)法涉及的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)進(jìn)行記錄。擴(kuò)展功能多:配套擴(kuò)展設(shè)備豐富,如內(nèi)灌流系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、脂質(zhì)體制備器等。膜片鉗的應(yīng)用:對(duì)藥物作用機(jī)制的研究。南通神經(jīng)生物學(xué)離子通道網(wǎng)站
膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù)記錄的幾種形式:全細(xì)胞記錄構(gòu)型(whole-cell recording) 高阻封接形成后,繼續(xù)以負(fù)壓抽吸使電極管內(nèi)細(xì)胞膜破裂,電極胞內(nèi)液直接相通,而與浴槽液絕緣,這種形式稱(chēng)為“全細(xì)胞”記錄。它既可記錄膜電位又可記錄膜電流。其中膜電位可在電流鉗情況下記錄,或?qū)⒉9苓B到標(biāo)準(zhǔn)高阻微電極放大器上記錄。在電壓鉗條件下記錄到的大細(xì)胞全細(xì)胞電流可達(dá)nA級(jí),全細(xì)胞鉗的串聯(lián)電阻(玻管和細(xì)胞內(nèi)部之間的電阻)應(yīng)當(dāng)補(bǔ)償。任何流經(jīng)膜的電流均流經(jīng)這一電阻,所引起的電壓降將使玻管電壓不同于細(xì)胞內(nèi)的真正電位。電流愈大,愈需對(duì)串聯(lián)電阻進(jìn)行補(bǔ)償。徐州神經(jīng)生物學(xué)膜片鉗技術(shù)網(wǎng)站膜片鉗使用操作注意:電熱加熱線(xiàn)溫度很高,在使用時(shí)注意避免燙傷。
膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理:通過(guò)滲透很快改變胞漿成分并達(dá)到平衡,該手段在全細(xì)胞記錄中普遍應(yīng)用。膜片鉗操作實(shí)驗(yàn):膜片鉗實(shí)驗(yàn)難度大、技術(shù)要求高,要掌握有關(guān)技術(shù)和方法雖不是很困難的事,但要從一大批的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)中,經(jīng)過(guò)處理和分析,得出有意義、有價(jià)值的結(jié)果和結(jié)論,就顯得不那么容易,有許多需要注意和考慮的問(wèn)題,包括減少噪音,避免電極前端的污染,提高封接成功率,具體實(shí)驗(yàn)過(guò)程中還需要考慮如何選取記錄模式,為記錄特定離子電流如何選擇電極內(nèi)、外液,如何選擇阻斷劑、激動(dòng)劑,如何進(jìn)行正確的數(shù)據(jù)采集等許多更為復(fù)雜的問(wèn)題,還需在科研實(shí)踐中不斷地探索和解決。
膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù):膜片鉗技術(shù)的建立,對(duì)生物學(xué)科學(xué)特別是神經(jīng)科學(xué)是一資有重大意義的變革。這是一種以記錄通過(guò)離子通道的離子電流來(lái)反映細(xì)胞膜單一的(或多個(gè)的離子通道分子活動(dòng)的技術(shù)。些技術(shù)的出現(xiàn)自然將細(xì)胞水平和分子水平的生理學(xué)研究聯(lián)系在一起,同時(shí)又將神經(jīng)科學(xué)的不同分野必然地融匯在一起,改變了既往各個(gè)分野互不聯(lián)系、互不滲透,阻礙人們很全認(rèn)識(shí)能力的弊端。由于電極與細(xì)胞膜的高阻封接,在電極籠罩下的那片膜事實(shí)上與膜的其他部分從電學(xué)上隔離,因此,此片膜內(nèi)開(kāi)放所產(chǎn)生的電流流進(jìn)玻璃吸管,用一個(gè)極為敏感的電流監(jiān)視器(膜片鉗放大器)測(cè)量此電流強(qiáng)度,就替代單一離子通道電流。膜片鉗技術(shù)的基本原理是通過(guò)負(fù)反饋使得膜電位與指令電壓相等,在電壓鉗制的條件下記錄膜電流。膜片鉗和電壓鉗的區(qū)別:膜電位固定的方法不同。
膜片鉗電生理技術(shù):神經(jīng)元細(xì)胞膜上有離子通道,它們控制電荷流入和流出細(xì)胞,從而調(diào)節(jié)神經(jīng)元激發(fā)。一種用于研究這些通道的生物物理學(xué)特性的極為有用的技術(shù)被稱(chēng)為膜片鉗記錄。在這種方法中,神經(jīng)科學(xué)家把拋光的玻璃微吸管置于細(xì)胞上通過(guò)吸力形成高電阻封接。這個(gè)過(guò)程分隔了一小"片"包含一種或多種離子通道的膜。通過(guò)微吸管中的電極,研究人員可以"鉗制"或控制膜的電屬性,這對(duì)分析通道活動(dòng)很重要。該電極還能記錄跨膜電壓的變化,或離子通過(guò)膜的流動(dòng)。膜片鉗技術(shù)的應(yīng)用范圍:對(duì)藥物作用機(jī)制的研究。合肥藥理學(xué)腦片膜片鉗應(yīng)用
膜片鉗使用的注意事項(xiàng):換液時(shí)應(yīng)時(shí)刻觀察浴槽,防止液面過(guò)低或液體溢出污染鏡頭。南通神經(jīng)生物學(xué)離子通道網(wǎng)站
膜片鉗實(shí)驗(yàn)中電極制備之在電極前端涂以硅酮樹(shù)脂(sylgard),其目的是為了降低電極與灌流液之間的電容,并形成一個(gè)親水界面。經(jīng)此處理后,上述電容可由6~8pF減少到1pF以下。硅酮樹(shù)脂對(duì)形成Giga?鄄seals無(wú)影響,但可減少本底噪音,對(duì)單通道記錄很重要。在進(jìn)行全細(xì)胞記錄時(shí),不用硅酮樹(shù)脂也可以得到滿(mǎn)意的效果,通常微電極在涂抹硅酮樹(shù)脂后再進(jìn)行拋光,但較好是在涂抹后一小時(shí)內(nèi)拋光,否則很難改變電極尖銳端的形狀。全自動(dòng)膜片鉗在藥物篩選中的應(yīng)用:全自動(dòng)膜片鉗技術(shù)一個(gè)重要的應(yīng)用方向是檢測(cè)早期藥物化合物對(duì)hERG的毒副作用。hERG通道產(chǎn)生的電流是心室復(fù)極中較重要的電流。通道被藥物后抑制直接導(dǎo)致LongQT綜合癥,很可能演變成尖銳端扭轉(zhuǎn)型室性心動(dòng)過(guò)速,心室纖顫,直至猝死。目前發(fā)現(xiàn)幾乎所有的臨床藥物所至的LQT或者TdP都作用于hERG,且導(dǎo)致hERG抑制的藥物在化學(xué)結(jié)構(gòu)上沒(méi)有明顯的共性,從而很難預(yù)測(cè),只有通過(guò)實(shí)驗(yàn)的方式給予解決。南通神經(jīng)生物學(xué)離子通道網(wǎng)站
上海司鼎生物科技有限公司主營(yíng)品牌有司鼎;OriCell,發(fā)展規(guī)模團(tuán)隊(duì)不斷壯大,該公司服務(wù)型的公司。司鼎生物是一家有限責(zé)任公司(自然)企業(yè),一直“以人為本,服務(wù)于社會(huì)”的經(jīng)營(yíng)理念;“誠(chéng)守信譽(yù),持續(xù)發(fā)展”的質(zhì)量方針。公司始終堅(jiān)持客戶(hù)需求優(yōu)先的原則,致力于提供高質(zhì)量的免疫印跡(WB)技術(shù)服務(wù),熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù),在體光纖成像記錄技術(shù)服務(wù)。司鼎生物順應(yīng)時(shí)代發(fā)展和市場(chǎng)需求,通過(guò)**技術(shù),力圖保證高規(guī)格高質(zhì)量的免疫印跡(WB)技術(shù)服務(wù),熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù),在體光纖成像記錄技術(shù)服務(wù)。