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嘉興全自動實用膜片鉗原理

來源: 發(fā)布時間:2023-08-02

膜片鉗法的各種模式:細(xì)胞吸附模式:將膜片微電極吸附在細(xì)胞膜上對但離子通道電流進行記錄的模式。其優(yōu)點是在細(xì)胞內(nèi)環(huán)境保持正常的條件下可以對離子通道活動進行觀察記錄。但是由于不能認(rèn)為直接地控制細(xì)胞內(nèi)環(huán)境條件也不能確切的潘明細(xì)胞內(nèi)點位,所以其缺點是不清楚膜片上的實效點位。膜內(nèi)面向外模式:從細(xì)胞吸附模式將已形成巨阻抗封接的膜片微電極向上提起時,則膜片即從細(xì)胞體上被切割分隔下來,形成膜內(nèi)面向外的模式。常規(guī)全細(xì)胞模式:在細(xì)胞吸附模式上將膜打穿成孔,記錄膜片以外部位的全細(xì)胞膜的離子電流,這時全細(xì)胞模式。全自動膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo):信號準(zhǔn)確,噪聲少,使用了先進的微型“法拉第板”替代傳統(tǒng)的“法拉第籠”。嘉興全自動實用膜片鉗原理

嘉興全自動實用膜片鉗原理,膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù)

膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù)實驗流程之標(biāo)本制備和膜片鉗實驗系統(tǒng):標(biāo)本制備:根據(jù)研究目的的不同,可采用不同的細(xì)胞組織,如心肌細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞等,現(xiàn)在幾乎可對各種細(xì)胞進行膜片鉗的研究。對所采用的細(xì)胞,必須滿足實驗要求,一般多采用酶解分離法,也可采用細(xì)胞培養(yǎng)法;另外,由于與分子生物學(xué)技術(shù)的結(jié)合,現(xiàn)在也運用分子克隆技術(shù)表達不同的離子通道,如利用非洲爪蟾卵母細(xì)胞表達外源性基因等。膜片鉗實驗系統(tǒng):根據(jù)不同的電生理實驗要求,可以組建不同的實驗系統(tǒng),但有若干共同的基本部件,包括機械部分(防震工作臺、屏蔽罩、儀器設(shè)備架)、光學(xué)部分(顯微鏡、視頻監(jiān)視器、單色光系統(tǒng))、電子部件(膜片鉗放大器、刺激器、數(shù)據(jù)采集設(shè)備、計算機系統(tǒng))和微操縱器。合肥細(xì)胞生物學(xué)膜片鉗電生理技術(shù)研究方案膜片鉗使用操作流程及注意事項:凡是在本平臺使用儀器的同學(xué)必須履行實驗室相關(guān)要求。

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膜片鉗技術(shù)的應(yīng)用范圍:①膜片鉗技術(shù)在通道中的研究;②與藥物作用有關(guān)的心肌離子通道研究;③對離子通道生理與病理作用機制的研究;④對單細(xì)胞形態(tài)與功能關(guān)系的研究;⑤對藥物作用機制的研究;⑥在心血管藥理方面的研究;⑦創(chuàng)新藥物研究與高通量篩選的研究;⑧在神經(jīng)科學(xué)中的研究。現(xiàn)如今,膜片鉗技術(shù)已經(jīng)大為普及,并普遍活躍在離子通道相關(guān)的研究當(dāng)中。也許未來有1天,膜片鉗技術(shù)會過時,但兩百年來的探索歷程,數(shù)代學(xué)者們的心血,以及它在科學(xué)研究中的功績會一直被銘記。

膜片鉗實驗中電極制備的要求:合格的膜片微電極是成功封接細(xì)胞膜的基本條件。要成功的封接細(xì)胞膜需要兩方面的因素保證,一是設(shè)法造成干凈的細(xì)胞膜表面,二是制成合格的電極。首先要選擇適當(dāng)?shù)牟A?xì)管,其材料可使用軟質(zhì)玻璃(蘇打玻璃、電石玻璃)或硬質(zhì)玻璃(硼硅玻璃、鋁硅玻璃、石英玻璃)。軟玻璃電極常用于作全細(xì)胞記錄,硬質(zhì)玻璃因?qū)щ娐实?、噪聲小而常用于離子單通道記錄。膜片微電極是將玻璃毛細(xì)管用電極拉制儀拉制而成的,制作分三步進行:一是分兩次拉制;第二步是在電極前端涂以硅酮樹脂(sylgard);第三步是拋光。膜片鉗技術(shù)的應(yīng)用范圍:對藥物作用機制的研究。

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膜片鉗技術(shù)的工作原理:膜片鉗技術(shù)是用于了解離了通道行為的通用型電生理工具,首先用微玻管電極(膜片電極或膜片吸管)接觸細(xì)胞膜,然后以千兆歐姆以上的阻抗使電極尖銳端與細(xì)胞膜封接,通過吸破或者電破的方式使與電極尖開口處相接的細(xì)胞膜的小區(qū)域與其周圍區(qū)域在電學(xué)上分隔,然后細(xì)胞膜破裂,進而對此區(qū)域上的離子通道的離子電流進行監(jiān)測記錄的方法。該方法普遍應(yīng)用于神經(jīng)細(xì)胞,肌纖維細(xì)胞,心肌細(xì)胞及高表達單一通道的卵母細(xì)胞。主要用于監(jiān)測離子通道在正?;蛘呒膊顟B(tài)下如何表現(xiàn),以及不同藥物、離子或其他分析物如何改變這些狀態(tài)。膜片鉗技術(shù)的建立,對生物科學(xué)特別是神經(jīng)科學(xué)是一項具有重大意義的變革。這是一種通過離子通道記錄的離子電流來反映細(xì)胞膜單一的(或多個)的離子通道活動的技術(shù)。該技術(shù)的出現(xiàn)將生理學(xué)的細(xì)胞水平和分子水平聯(lián)系在一起,又將神經(jīng)科學(xué)的不同亞科融匯在一起,促進了各個學(xué)科之間的聯(lián)系,加速了我們神經(jīng)科學(xué)的研究進展,深入探討神經(jīng)活動的機制研究。膜片鉗使用的注意事項:浴槽及灌流系統(tǒng)用畢請及時清洗,防止長菌影響實驗。嘉興全自動實用膜片鉗原理

膜片鉗在通道研究中的重要作用:利用膜片鉗技術(shù)還可以用于藥物在其靶受體上作用位點的分析。嘉興全自動實用膜片鉗原理

膜片鉗實驗難度大、技術(shù)要求高,要掌握有關(guān)技術(shù)和方法雖不是很困難的事,但要從一大批的實驗數(shù)據(jù)中,經(jīng)過處理和分析,得出有意義、有價值的結(jié)果和結(jié)論,就顯得不那么容易,有許多需要注意和考慮的問題,包括減少噪音,避免電極前端的污染,提高封接成功率,具體實驗過程中還需要考慮如何選取記錄模式,為記錄特定離子電流如何選擇電極內(nèi)、外液,如何選擇阻斷劑、激動劑,如何進行正確的數(shù)據(jù)采集等許多更為復(fù)雜的問題,還需在科研實踐中不斷地探索和解決。嘉興全自動實用膜片鉗原理

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