多克隆抗體佐劑應(yīng)用:1.佐劑的類型 實(shí)踐中常應(yīng)用的佐劑有氫氧化鋁膠、明礬、弗氏佐劑、脂質(zhì)體和石蠟油等。也有采用結(jié)合桿菌等分枝桿菌、白喉?xiàng)U菌以及細(xì)小棒狀桿菌等。⑴ 弗氏不完全佐劑(incomplete Freund's adjuvant,IFA)羊毛脂 1 份;石蠟油 5 份;混合,高壓滅菌后保存。用時(shí)加熱融化,冷卻至 50℃左右,加抗原進(jìn)行乳化處理。⑵ 弗氏完全佐劑(complete Freund's adjuvant,CFA);弗氏不完全佐劑 10ml;卡介苗 10mg~200mg 卡介苗可 100℃10min 滅活處理。初次免疫時(shí),建議用弗氏完全佐劑,以刺激機(jī)體產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫反應(yīng)。再次免疫時(shí),一般不用完全佐劑,而采用弗氏不完全佐劑。但在研究分枝桿菌及相關(guān)抗原時(shí),一般不用弗氏完全佐劑,以免卡介苗的干擾。當(dāng)人體受到傳染時(shí),抗體是免疫系統(tǒng)的重要組成部分,可以識(shí)別和中和入侵的病原體。武漢PRR11抗體基因
抗體基本結(jié)構(gòu):輕鏈分子量約為25 000,由214個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成。輕鏈可分為兩種,分別為kappa(κ)鏈和lambda(λ)鏈。據(jù)此,可將Ig分為兩型(type),即κ型和λ型。一個(gè)Ig分子上兩條輕鏈的型別總是相同的。不同類Ig既存在κ型,也存在λ型。同一個(gè)體內(nèi)可同時(shí)存在κ型和λ型的Ig分子,不同種屬生物體內(nèi)兩型輕鏈的比例不同。正常人血清Ig的κ:λ約為2:1,而在小鼠則為20:1。Ig的κ與λ的比例異??梢苑从趁庖呦到y(tǒng)的異常。根據(jù)λ鏈恒定區(qū)個(gè)別氨基酸的差異,又可將λ鏈分為λ1、λ2、λ3和λ4四個(gè)亞型(subtype) 。湖北自身抗體基因抗體療法是一種利用人工合成的抗體來調(diào)理疾病的新興療法。
抗體特性和功能:IgD正常人血清lgD濃度很低,儀占血清Ig總量的0.2%。IgD可在個(gè)體發(fā)育的任何時(shí)間產(chǎn)生。5類lg中,IgD的鉸鏈區(qū)很長(zhǎng),易被蛋白酶水解,故其半衰期很短(只3天)。lgD分為兩型:血清型IgD的生物學(xué)功能尚不清楚;膜結(jié)合型IgD(mlgD)構(gòu)成BCR,是B細(xì)胞分化發(fā)育成熟的標(biāo)志,未成熟B細(xì)胞只表達(dá)mlgM,成熟B細(xì)胞可同時(shí)表達(dá)mlgM和mIgD,稱為初始B細(xì)胞(naive B cell)?;罨腂細(xì)胞或記憶性B細(xì)胞表面的mlgD會(huì)逐漸消失。IgE是正常人血清中含量很少的Ig,血清濃度極低,約為5×10-5mg/ml。
抗體木瓜蛋白酶水解片段:木瓜蛋白酶水解Ig的部位是在鉸鏈區(qū)二硫鍵連接的兩條重鏈的近N端,可將Ig裂解為兩個(gè)完全相同的Fab段和一個(gè)Fc段。Fab段即抗原結(jié)合片段(fragment antigenbinding,F(xiàn)ab),由一條完整的輕鏈與重鏈的VH和CHl結(jié)構(gòu)域組成。一個(gè)Fab片段為單價(jià),可與抗原結(jié)合但不產(chǎn)生凝集反應(yīng)或沉淀反應(yīng);Fc段即可結(jié)晶片段(fragment crystallizable,F(xiàn)c),由Ig的CH2和CH3結(jié)構(gòu)域組成。Fc段無抗原結(jié)合活性,是Ig與效應(yīng)分子或細(xì)胞相互作用的部位。人體可以通過傳染疾病或接種疫苗來產(chǎn)生特定的抗體。
抗體主要功能:調(diào)理吞噬和ADCC。1.調(diào)理作用(opsonization)指IgG抗體(特別是IgG1和IgG3)的Fc段與中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞表面相應(yīng)的Fc受體結(jié)合,從而增強(qiáng)吞噬細(xì)胞的吞噬作用。例如,細(xì)菌特異性的IgG抗體可通過其Fab段與相應(yīng)的細(xì)菌抗原結(jié)合后,以其Fc段與巨噬細(xì)胞或中性粒細(xì)胞表面相應(yīng)的Fc受體結(jié)合,通過IgG的Fab段和Fc段的“橋聯(lián)”作用,促進(jìn)吞噬細(xì)胞對(duì)細(xì)菌的吞噬。2.抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)指具E有殺傷活性的細(xì)胞(如NK細(xì)胞)通過其表面的Fc受體識(shí)別包被于靶細(xì)胞表面抗原(如病毒感染細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞)上的抗體的Fc段,直接殺傷靶細(xì)胞。NK細(xì)胞是介導(dǎo)ADCC的主要細(xì)胞。抗體與靶細(xì)胞上的抗原結(jié)合是特異性的,而表達(dá)Fc受體細(xì)胞的殺傷作用是非特異性的 [4] 。抗體的保護(hù)作用并非完全,某些病原體可能會(huì)發(fā)展出逃逸機(jī)制,繞過抗體的防御。四川同種抗體供應(yīng)商
抗體工程可以通過改變抗體的結(jié)構(gòu)和特性來提高其療效和穩(wěn)定性。武漢PRR11抗體基因
由雜交瘤單細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的單克隆抗體只能特異性地與抗原分子上的一個(gè)抗原決定簇結(jié)合,抗體成分均一,抗體的結(jié)構(gòu)、氨基酸順序、特異性等都是一致的,且在培養(yǎng)過程中只要不發(fā)生變異,不同時(shí)間內(nèi)分泌的抗體都能保持同樣的結(jié)構(gòu)和功能。用這種技術(shù)可按需要生產(chǎn)大量很純的單一抗體,這些是用普通血清學(xué)方法所不能達(dá)到的。單克隆抗體的發(fā)展經(jīng)歷了鼠源性單克隆抗體、嵌合性單克隆抗體、人源化單克隆抗體和全人源單克隆抗體四個(gè)階段。特別是全人源單克隆抗體,其可變區(qū)和恒定區(qū)都是人源的,這類抗體藥物具有高親和力、高特異性、幾乎沒有毒副作用等優(yōu)點(diǎn),克服了動(dòng)物源抗體及嵌合抗體的各種缺點(diǎn),成為調(diào)理性抗體藥物發(fā)展的必然趨勢(shì)。武漢PRR11抗體基因
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