多克隆抗體免疫動(dòng)物:免疫用的動(dòng)物建議選擇適齡的健康雄性動(dòng)物,雌性動(dòng)物特別是妊娠動(dòng)物用于制備免疫抗體則非常不合適,有時(shí)甚至不產(chǎn)生抗體。由于對免疫應(yīng)答的個(gè)別差異,免疫時(shí)應(yīng)同時(shí)選用數(shù)只動(dòng)物進(jìn)行免疫。 抗原是多種多樣的,而且千差萬別。就其化學(xué)成分而言,有蛋白質(zhì)抗原、類脂抗原、多糖類抗原和核酸抗原等。就抗原性而言,有完全抗原和不完全抗原。為了獲得較好的抗血清,建議是選用蛋白質(zhì)抗原,如要制備用于篩選細(xì)菌表達(dá)的 cDNA 文庫或免疫印跡的抗血清,建議選用可降解的蛋白質(zhì)抗原。不同的抗原,其免疫原性的強(qiáng)弱均不相同,這種免疫原性的強(qiáng)弱取決于抗原的分子量、化學(xué)活性基團(tuán)、立體結(jié)構(gòu)、物理形狀和彌散速度等??贵w按其反應(yīng)形式分為凝集素、沉降素、抗毒、溶解素、調(diào)理素、中和抗體、補(bǔ)體結(jié)合抗體等。廣東IgD抗體試劑
多克隆抗體佐劑應(yīng)用:1.佐劑的類型 實(shí)踐中常應(yīng)用的佐劑有氫氧化鋁膠、明礬、弗氏佐劑、脂質(zhì)體和石蠟油等。也有采用結(jié)合桿菌等分枝桿菌、白喉?xiàng)U菌以及細(xì)小棒狀桿菌等。⑴ 弗氏不完全佐劑(incomplete Freund's adjuvant,IFA)羊毛脂 1 份;石蠟油 5 份;混合,高壓滅菌后保存。用時(shí)加熱融化,冷卻至 50℃左右,加抗原進(jìn)行乳化處理。⑵ 弗氏完全佐劑(complete Freund's adjuvant,CFA);弗氏不完全佐劑 10ml;卡介苗 10mg~200mg 卡介苗可 100℃10min 滅活處理。初次免疫時(shí),建議用弗氏完全佐劑,以刺激機(jī)體產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫反應(yīng)。再次免疫時(shí),一般不用完全佐劑,而采用弗氏不完全佐劑。但在研究分枝桿菌及相關(guān)抗原時(shí),一般不用弗氏完全佐劑,以免卡介苗的干擾。江蘇異嗜性抗體價(jià)格抗體也可以在科學(xué)研究和醫(yī)學(xué)診斷中被用作重要的工具。
抗體(antibody)是指機(jī)體由于抗原的刺激而產(chǎn)生的具有保護(hù)作用的蛋白質(zhì)。它(免疫球蛋白不只是抗體)是一種由漿細(xì)胞(效應(yīng)B細(xì)胞)分泌,被免疫系統(tǒng)用來鑒別與中和外來物質(zhì)如細(xì)菌、病毒等的大型Y形蛋白質(zhì),只被發(fā)現(xiàn)存在于脊椎動(dòng)物的血液等體液中,及其B細(xì)胞的細(xì)胞膜表面??贵w能識別特定外來物的一個(gè)獨(dú)特特征,該外來目標(biāo)被稱為抗原??贵w是一類能與抗原特異性結(jié)合的免疫球蛋白。抗體按其反應(yīng)形式分為凝集素、沉降素、抗毒、溶解素、調(diào)理素、中和抗體、補(bǔ)體結(jié)合抗體等。
多克隆抗體免疫動(dòng)物:抗原的免疫劑量是依照給予動(dòng)物的種類、免疫周期以及所要求的抗體特性等不同而不同。劑量過低,不能引起足夠強(qiáng)的免疫刺激,免疫劑量過多,有可能引起免疫耐受。在一定的范圍內(nèi),抗體的效價(jià)是隨注射劑量的增加而增高。蛋白質(zhì)抗原的免疫劑量比多糖類抗原寬。一般而言,小鼠的初次免疫劑量為 50μg~400μg/次, 大鼠為100μg~1 000μg/次, 兔為 200μg~1 000μg/2次。加強(qiáng)劑量為初次劑量的 1/5~2/5。免疫劑量與注射途徑有關(guān),一般而言,靜脈注射劑量大于皮下注射,而皮下注射又比掌內(nèi)和跖內(nèi)皮下注射劑量大,也可采用淋巴結(jié)內(nèi)注射法。重組抗體技術(shù)使得科學(xué)家能夠定制和改良抗體,以應(yīng)對不同的疾病挑戰(zhàn)。
多克隆抗體可以采用以下各種方法之一進(jìn)行免疫。皮下多點(diǎn)注射法:①家兔兩側(cè)掌(跖內(nèi)各注射含有完全佐劑抗原 0.10ml(IgG 含量5mg/ml) ;②7~10 天后,脊柱兩側(cè)多點(diǎn)(頸、胸、腰椎各兩點(diǎn)、共 6 點(diǎn))皮下注射含不完全佐劑5的抗原,每點(diǎn) 0.50ml;③7~10 天后,脊柱兩側(cè)重復(fù)注射一次;④7~10 天后試血。不合格者重復(fù)步驟③。多途徑聯(lián)合注射法:①兩側(cè)掌(跖)內(nèi)側(cè)皮下注射含完全佐劑抗原 0.50ml(IgG 量為 5mg/ml) ;②14 天后,多點(diǎn)皮下注射含有不完全佐劑抗原;③7 天后,耳靜脈注射不含佐劑的抗原 2ml;④測定血清抗體效價(jià),不合格者重復(fù)步驟③,并適當(dāng)遞增 IgG 量。抗體的結(jié)構(gòu)包括兩個(gè)重鏈和兩個(gè)輕鏈,形成Y形分子,每一個(gè)Y形分子具有兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)。廣東異種抗體怎么購買
抗體檢測可以用于檢測病原體傳染、免疫狀態(tài)和疫苗效果等。廣東IgD抗體試劑
抗體鉸鏈區(qū):鉸鏈區(qū)(hinge region)位于CH1與CH2之間,富含脯氨酸,易伸展彎曲,從而改變抗原結(jié)合部位之間的距離,有利于抗體結(jié)合位于不同位置的抗原表位。鉸鏈區(qū)易被木瓜蛋白酶、胃蛋白酶等水解,產(chǎn)生不同的水解片段。不同類Ig的鉸鏈區(qū)不盡相同,例如人IgGl、IgG2、IgG4和IgA的鉸鏈區(qū)較短,IgG3和IgD的鉸鏈區(qū)較長,而IgM和IgE無鉸鏈區(qū)。J鏈和分泌片:Ig輕鏈和重鏈除上述基本結(jié)構(gòu)外,某些類別的Ig還含有其他輔助成分,如J鏈和分泌片 。廣東IgD抗體試劑
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