多克隆抗體佐劑應(yīng)用:1.佐劑的類型 實踐中常應(yīng)用的佐劑有氫氧化鋁膠、明礬、弗氏佐劑、脂質(zhì)體和石蠟油等。也有采用結(jié)合桿菌等分枝桿菌、白喉桿菌以及細(xì)小棒狀桿菌等。⑴ 弗氏不完全佐劑(incomplete Freund's adjuvant,IFA)羊毛脂 1 份;石蠟油 5 份;混合,高壓滅菌后保存。用時加熱融化,冷卻至 50℃左右,加抗原進(jìn)行乳化處理。⑵ 弗氏完全佐劑(complete Freund's adjuvant,CFA);弗氏不完全佐劑 10ml;卡介苗 10mg~200mg 卡介苗可 100℃10min 滅活處理。初次免疫時,建議用弗氏完全佐劑,以刺激機體產(chǎn)生較強的免疫反應(yīng)。再次免疫時,一般不用完全佐劑,而采用弗氏不完全佐劑。但在研究分枝桿菌及相關(guān)抗原時,一般不用弗氏完全佐劑,以免卡介苗的干擾。單克隆抗體是由單一源頭的B細(xì)胞產(chǎn)生的抗體,具有高度特異性。湖北富含脯氨酸11抗體
抗體鉸鏈區(qū):鉸鏈區(qū)(hinge region)位于CH1與CH2之間,富含脯氨酸,易伸展彎曲,從而改變抗原結(jié)合部位之間的距離,有利于抗體結(jié)合位于不同位置的抗原表位。鉸鏈區(qū)易被木瓜蛋白酶、胃蛋白酶等水解,產(chǎn)生不同的水解片段。不同類Ig的鉸鏈區(qū)不盡相同,例如人IgGl、IgG2、IgG4和IgA的鉸鏈區(qū)較短,IgG3和IgD的鉸鏈區(qū)較長,而IgM和IgE無鉸鏈區(qū)。J鏈和分泌片:Ig輕鏈和重鏈除上述基本結(jié)構(gòu)外,某些類別的Ig還含有其他輔助成分,如J鏈和分泌片 。河南Prestige Antibodies抗體研發(fā)制造抗體在免疫系統(tǒng)中起到了關(guān)鍵作用,保護(hù)我們免受各種疾病的侵害。
抗原上那部分可以引起機體產(chǎn)生抗體的分子結(jié)構(gòu),叫做抗原決定簇。一個抗原上可以有好幾個不同的抗原決定簇,因而使機體產(chǎn)生好幾種不同的抗體,然后產(chǎn)生出抗體是漿細(xì)胞。只針對一個抗原決定簇起作用的漿細(xì)胞群就是一個純系,純系的英文為Clone,音譯就是克隆。由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體。單克隆抗體能目標(biāo)明確地與單一的特異抗原決定簇結(jié)合,就象導(dǎo)彈精確地命中目標(biāo)一樣。另一方面,即使是同一種抗原決定簇,在機體內(nèi)也可以由好幾種克隆來產(chǎn)生抗體,形成好幾種單克隆抗體混雜物,稱為多克隆抗體。
隨后,經(jīng)1968年和1972年的世界衛(wèi)生組織和國際免疫學(xué)會聯(lián)合會討論決定,將具有抗體活性或化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗體相似的球蛋白統(tǒng)一命名為免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。Ig可分為分泌型Ig(secreted Ig,SIg)和膜型Ig(membrane Ig,mIg)。SIg主要存在于血液和組織液中,行使抗體的各種功能;mIg主要構(gòu)成B細(xì)胞膜表面的抗原受體。基本結(jié)構(gòu):經(jīng)x線晶體衍射結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn),Ig由四條多肽鏈組成,各肽鏈之間由數(shù)量不等的鏈間二硫鍵連接。Ig可形成“Y”字型結(jié)構(gòu),稱為Ig單體,是構(gòu)成抗體的基本單位??贵w的多樣性來自于基因重排和突變,使其能夠識別各種不同的抗原。
多克隆抗體免疫動物:免疫劑量與注射途徑有關(guān),一般而言,靜脈注射劑量大于皮下注射,而皮下注射又比掌內(nèi)和跖內(nèi)皮下注射劑量大,也可采用淋巴結(jié)內(nèi)注射法。加佐劑比不加佐劑的注射劑量要小,對家兔而言,采用弗氏完全佐劑,則需注射 0.5mg~1mg/kg./次,如采用弗氏不完全佐劑則注射劑量應(yīng)大10 倍以上。如要制備高度特異性的抗血清,可選用低劑量抗原短程免疫法。如需要獲得高效價的抗血清,宜采用大劑量長程免疫法。免疫周期長者,可少量多次。免疫周期短者,應(yīng)大量少次。 兩次注射的間隔時間應(yīng)長短適宜,太短起不到再次反應(yīng)的效果太長則失去了前一次激發(fā)的敏感作用。一般間隔時間應(yīng)為 5~7 天,加佐劑者應(yīng)為 2 周左右。 注射的 Ig 純度高,則一般不易引起過敏反應(yīng),如注射血清,即使是少量,在再次免疫時,極易引起過敏反應(yīng),所以一定要采取措施。特異性抗體可以針對不同的病原體或細(xì)胞表面分子,提供精確的免疫保護(hù)。湖北富含脯氨酸11抗體
抗體的半衰期較長,可以在體內(nèi)持續(xù)發(fā)揮作用,保持免疫防御的持久性。湖北富含脯氨酸11抗體
抗原通常是由多個抗原決定簇組成的,由一種抗原決定簇刺激機體,由一個B淋巴細(xì)胞接受該抗原刺激所產(chǎn)生的抗體稱之為單克隆抗體(MonoclonalAntibody)。由多種抗原決定簇刺激機體,相應(yīng)地就產(chǎn)生各種各樣的單克隆抗體,這些單克隆抗體混雜在一起就是多克隆抗體,機體內(nèi)所產(chǎn)生的抗體就是多克隆抗體;除了抗原決定簇的多樣性以外,同樣一種抗原決定簇,也可刺激機體產(chǎn)生IgG、IgM、IgA、IgE和IgD等五類抗體??乖碳C體,產(chǎn)生免疫學(xué)反應(yīng),由機體的漿細(xì)胞合成并分泌的與抗原有特異性結(jié)合能力的一組球蛋白,這就是免疫球蛋白,這種與抗原有特異性結(jié)合能力的免疫球蛋白就是抗體。湖北富含脯氨酸11抗體
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