抗體基本結(jié)構(gòu):經(jīng)x線晶體衍射結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn),Ig由四條多肽鏈組成,各肽鏈之間由數(shù)量不等的鏈間二硫鍵連接。Ig可形成“Y”字型結(jié)構(gòu),稱為Ig單體,是構(gòu)成抗體的基本單位。天然Ig分子含有四條異源性多肽鏈,其中,分子量較大的兩條鏈稱為重鏈(heavy chain,H),而分子量較小的兩條鏈稱為輕鏈(Light chain,L)。同一Ig分子中的兩條H鏈和兩條L鏈的氨基酸組成完全相同。重鏈分子量為50 000~75 000,由450~550個氨基酸殘基組成。重鏈恒定區(qū)的氨基酸組成和排列順序不同,其抗原性也不同。多克隆抗體的制備過程需要嚴格的動物倫理管理,確保動物的福利。上海異嗜性抗體研發(fā)制造
IgE主要來源于呼吸道、消化道黏膜下的漿細胞,是一種親細胞性抗體,與反應(yīng)、寄生蟲病與皮膚過敏有關(guān)。另有一種能與某種過敏原特異性結(jié)合的IgE,稱特異性IgE,對過敏性喘癥的診斷,其特異性強、敏感性高,對尋找變應(yīng)原有重要意義。血清免疫球蛋白E(IgE) 正常值為0.1-0.9mg/L??侷gE強陽性,特異性IgE陰性。異常結(jié)果:血清中過敏原特異性IgE水平只能說明個體對已測過敏原的敏感性。但不能只依靠檢測血清中的過敏原特異性IgE水平,而必須結(jié)合臨床病史和其它診斷手段才能確診過敏癥?!⌒枰獧z查的人群:患者屬過敏性體質(zhì),對過敏原特異性檢測項不敏感。上海異嗜性抗體研發(fā)制造單克隆抗體可以用于調(diào)理病毒傳染。
IgE抗體是人體內(nèi)非常重要的一類免疫球蛋白,在正常情況下,其含量是所有免疫球蛋白中很低的一種。但在病理情況下,如過敏性疾病,或寄生蟲傳染時,IgE水平可明顯升高。在過敏性疾病時,IgE可與致敏原結(jié)合,進而再與肥大細胞,或嗜堿性粒細胞表面相應(yīng)的受體結(jié)合,即可引起上述細胞脫顆粒,釋放白三烯和組胺類的物質(zhì),從而引起臨床上過敏反應(yīng)。在寄生蟲傳染時,IgE可與抗原結(jié)合,進而再與嗜酸性粒細胞表面相應(yīng)的受體結(jié)合。嗜酸性粒細胞活化后,通過ADCC的作用,可對寄生蟲進行吞噬。除外,還有病理情況,如漿細胞瘤,即血液科較常見的多發(fā)性骨髓瘤,可出現(xiàn)IgE水平的升高,這時應(yīng)完善血尿、免疫固定電泳,判斷患者是否存在單克隆增生的免疫球蛋白,除外患者是否有血液系統(tǒng)的疾病。
抗體特性和功能:IgM占血清Ig總量的5%~10%,血清濃度約為1mg/ml。單體IgM以膜結(jié)合型表達于B細胞表面,構(gòu)成B細胞抗原受體,只表達mlgM是未成熟B細胞的標志。分泌型IgM為五聚體,是分子量很大的Ig,沉降系數(shù)為19S,稱為巨球蛋白(macroglobulin),一般不能通過血管壁,主要存在于血液中。五聚體IgM含有10個Fab段,具有很強的抗原結(jié)合能力;含有5個Fc段,比IgG更易啟動補體。天然血型抗體為IgM,血型不匹配的輸血,可導致嚴重的溶血反應(yīng)。IgM是個體發(fā)育過程中很早合成和分泌的抗體,在胚胎發(fā)育晚期的胎兒即能產(chǎn)生IgM,故臍帶血lgM升高提示胎兒有宮內(nèi)傳染(如風疹病毒或巨細胞病毒等傳染)。IgM也是初次體液免疫應(yīng)答中很早出現(xiàn)的抗體,是機體抗傳染免疫的“先頭”;血清中IgM升高,提示新近發(fā)生傳染,可用于傳染的早期診斷;抗體的多樣性來自于基因重排和突變,使其能夠識別各種不同的抗原。
選擇性培養(yǎng)的目的是篩選融合的雜交瘤細胞,一般采用HAT選擇性培養(yǎng)基。在HAT培養(yǎng)基中,未融合的小鼠骨髓瘤細胞中DNA的從頭合成途徑會被阻止;未融合的骨髓瘤細胞又因缺乏次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(HGPRT),不能利用補救途徑合成DNA;這樣未融合小鼠骨髓瘤細胞的兩個DNA合成途徑都被阻止,骨髓瘤細胞DNA不能復(fù)制而死亡。 未融合的B淋巴細胞雖具有次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶,但其本身不能在體外長期存活也逐漸死亡。 只有融合的雜交瘤細胞由于從B淋巴細胞獲得了次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶,可以通過補救途徑合成DNA,并具有骨髓瘤細胞能無限增殖的特性,因此,雜交瘤細胞能在HAT培養(yǎng)基中存活和增殖。單克隆抗體的研究有助于開發(fā)個體化的醫(yī)療方案。上海IgM抗體補給公司
多克隆抗體的制備過程相對復(fù)雜,需要較長時間和資源。上海異嗜性抗體研發(fā)制造
單克隆抗體:解決多克隆抗體特異性不高的理想方法是制備識別單一表位特異性的抗體。如果能獲得只針對單一表位的漿細胞克隆,并使其在體外擴增分泌抗體,就有可能獲得單一表位特異性的抗體。然而,漿細胞在體外的壽命較短,難以培養(yǎng)。為克服這一缺點,Kohler和Milstein將可產(chǎn)生特異性抗體但短壽的B細胞與不產(chǎn)生抗體但長壽的骨髓瘤細胞融合,獲得了可以產(chǎn)生單克隆抗體的雜交瘤細胞,從而建立了單克隆抗體制備技術(shù)。通過該技術(shù)融合形成的雜交瘤(hybridoma),既具有骨髓瘤細胞大量擴增和永生的特性,又具有免疫B細胞合成和分泌特異性抗體的能力。上海異嗜性抗體研發(fā)制造