免疫動(dòng)物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠產(chǎn)生致敏B淋巴細(xì)胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠,按照預(yù)先制定的免疫方案進(jìn)行免疫注射。 抗原通過血液循環(huán)或淋巴循環(huán)進(jìn)入外周免疫部位,刺激相應(yīng)B淋巴細(xì)胞克隆,使其活化、增殖,并分化成為致敏B淋巴細(xì)胞。細(xì)胞融合采用二氧化碳?xì)怏w處死小鼠,無菌操作取出脾臟,在平皿內(nèi)擠壓研磨,制備脾細(xì)胞懸液。 將準(zhǔn)備好的同系骨髓瘤細(xì)胞與小鼠脾細(xì)胞按一定比例混合,并加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作用下,各種淋巴細(xì)胞可與骨髓瘤細(xì)胞發(fā)生融合,形成雜交瘤細(xì)胞。單克隆抗體可以高度特異性地與特定抗原結(jié)合。杭州富含脯氨酸11抗體怎么購買
抗體可變區(qū)和恒定區(qū):通過分析不同Ig重鏈和輕鏈的氨基酸序列發(fā)現(xiàn),重鏈和輕鏈靠近N端的約110個(gè)氨基酸序列變化很大,其他部分氨基酸序列相對恒定。因此,將Ig輕鏈和重鏈中靠近N端氨基酸序列變化較大的區(qū)域稱為可變區(qū)(variable region,V),分別占重鏈和輕鏈的1/4和1/2;將靠近C端的氨基酸序列相對穩(wěn)定的區(qū)域,稱為恒定區(qū)(constant region,C),分別占重鏈和輕鏈的3/4和1/2。恒定區(qū) 重鏈和輕鏈的C區(qū)分別稱為CH和CL。不同型(κ或λ)Ig的CL長度基本一致,但是不同類Ig的CH長度不同,例如IgG、IgA和IgD包括CH1、CH2和CH3,而IgM和IgE則包括CH1、CH2、CH3和CH4;杭州富含脯氨酸11抗體怎么購買多克隆抗體具有更普遍的抗原特異性,可以同時(shí)識(shí)別多個(gè)不同的抗原分子。
19世紀(jì)后期,Von Behring及其同事Kitasato研究發(fā)現(xiàn),用白喉或破傷風(fēng)免疫動(dòng)物后可產(chǎn)生具有中和有害素作用的物質(zhì),稱之為antitoxin,隨后引入“抗體”一詞來泛指抗有害素類物質(zhì)??贵w(antibody,Ab)是B細(xì)胞接受抗原刺激后增殖分化為漿細(xì)胞所產(chǎn)生的糖蛋白,主要存在于血清等體液中,是介導(dǎo)體液免疫的重要效應(yīng)分子,能與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合,發(fā)揮免疫功能。1937年,Tiselius和Kabat用電泳方法將血清蛋白分為白蛋白、α1、α2、β及γ球蛋白等組分,并發(fā)現(xiàn)抗體主要存在于γ區(qū),因此抗體又被稱為γ球蛋白。
抗體(antibody)是指機(jī)體由于抗原的刺激而產(chǎn)生的具有保護(hù)作用的蛋白質(zhì)。它(免疫球蛋白不只是抗體)是一種由漿細(xì)胞(效應(yīng)B細(xì)胞)分泌,被免疫系統(tǒng)用來鑒別與中和外來物質(zhì)如細(xì)菌、病毒等的大型Y形蛋白質(zhì),只被發(fā)現(xiàn)存在于脊椎動(dòng)物的血液等體液中,及其B細(xì)胞的細(xì)胞膜表面。抗體能識(shí)別特定外來物的一個(gè)獨(dú)特特征,該外來目標(biāo)被稱為抗原??贵w是一類能與抗原特異性結(jié)合的免疫球蛋白??贵w按其反應(yīng)形式分為凝集素、沉降素、抗有害素、溶解素、調(diào)理素、中和抗體、補(bǔ)體結(jié)合抗體等。特定的抗體可以用于制備特異性的試劑盒,用于檢測特定病原體或標(biāo)志物。
選擇性培養(yǎng)的目的是篩選融合的雜交瘤細(xì)胞,一般采用HAT選擇性培養(yǎng)基。在HAT培養(yǎng)基中,未融合的小鼠骨髓瘤細(xì)胞中DNA的從頭合成途徑會(huì)被阻止;未融合的骨髓瘤細(xì)胞又因缺乏次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(HGPRT),不能利用補(bǔ)救途徑合成DNA;這樣未融合小鼠骨髓瘤細(xì)胞的兩個(gè)DNA合成途徑都被阻止,骨髓瘤細(xì)胞DNA不能復(fù)制而死亡。 未融合的B淋巴細(xì)胞雖具有次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶,但其本身不能在體外長期存活也逐漸死亡。 只有融合的雜交瘤細(xì)胞由于從B淋巴細(xì)胞獲得了次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶,可以通過補(bǔ)救途徑合成DNA,并具有骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖的特性,因此,雜交瘤細(xì)胞能在HAT培養(yǎng)基中存活和增殖。多克隆抗體可以通過改變免疫原的免疫化策略來提高抗體的親和力和特異性。廣東PRR11多克隆抗體生產(chǎn)廠家
多克隆抗體可以用于動(dòng)物模型的研究,以探索抗原的功能和影響。杭州富含脯氨酸11抗體怎么購買
抗體特性和功能:IgA分為兩型:血清型為單體,主要存在于血清中,只占血清Ig總量的10%~15%;分泌型IgA(secretory IgA,SIgA)為二聚體,由J鏈連接,含內(nèi)皮細(xì)胞合成的分泌片,經(jīng)分泌性上皮細(xì)胞分泌至外分泌液中。SIgA合成和分泌的部位在腸道、呼吸道、乳腺、唾液腺和淚腺,因此主要存在于胃腸道和支氣管分泌液、初乳、唾液和淚液。SIgA是外分泌液中主要的抗體類別,參與黏膜局部免疫,通過與相應(yīng)病原微生物結(jié)合,阻止病原體黏附到細(xì)胞表面,在局部抗傳染中發(fā)揮重要作用。SIgA在黏膜表面也有中和有害素的作用。新生兒易患呼吸道、胃腸道傳染可能與IgA合成不足有關(guān)。嬰兒可從母親初乳中獲得SIgA,這是一種重要的自然被動(dòng)免疫過程;杭州富含脯氨酸11抗體怎么購買