免疫動物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠產(chǎn)生致敏B淋巴細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠,按照預(yù)先制定的免疫方案進行免疫注射。 抗原通過血液循環(huán)或淋巴循環(huán)進入外周免疫部位,刺激相應(yīng)B淋巴細胞克隆,使其活化、增殖,并分化成為致敏B淋巴細胞。細胞融合采用二氧化碳氣體處死小鼠,無菌操作取出脾臟,在平皿內(nèi)擠壓研磨,制備脾細胞懸液。 將準備好的同系骨髓瘤細胞與小鼠脾細胞按一定比例混合,并加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作用下,各種淋巴細胞可與骨髓瘤細胞發(fā)生融合,形成雜交瘤細胞。單克隆抗體可以用于調(diào)理自身免疫性疾病。四川Prestige Antibodies抗體試劑
抗體主要功能:啟動補體產(chǎn)生攻膜復(fù)合物使細胞溶解破壞。人IgG1~3和IgM與相應(yīng)抗原結(jié)合后,可因構(gòu)象改變而使其CH2和CH3結(jié)構(gòu)域內(nèi)的補體結(jié)合點暴露,從而通過經(jīng)典途徑啟動補體系統(tǒng),產(chǎn)生多種效應(yīng)功能,其中IgM、IgG1和IgG3啟動補體系統(tǒng)的能力較強,IgG2較弱。IgA、IgE和IgG4本身難以啟動補體,但在形成聚合物后可通過旁路途徑啟動補體系統(tǒng)。通常情況下,lgD不能啟動補體。調(diào)理吞噬和ADCC:IgG可通過其Fc段與表面具有相應(yīng)受體的細胞結(jié)合,產(chǎn)生不同的生物學(xué)作用。江蘇正??贵w費用單克隆抗體可以高度特異性地與特定抗原結(jié)合。
單克隆抗體是由單一B細胞克隆產(chǎn)生的高度均一、只針對某一特定抗原表位的抗體。通常采用雜交瘤技術(shù)來制備,雜交瘤(hybridoma)抗體技術(shù)是在細胞融合技術(shù)的基礎(chǔ)上,將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細胞融合為B細胞雜交瘤。用具備這種特性的單個雜交瘤細胞培養(yǎng)成細胞群,可制備針對一種抗原表位的特異性抗體,即單克隆抗體。單克隆抗體是人工制備的雜交瘤細胞生產(chǎn)的,雜交瘤細胞是由一個經(jīng)抗原啟動后的B細胞與一個骨髓瘤細胞融合形成。單克隆抗體優(yōu)點:純度高,靈敏度高,特異性強,交叉反應(yīng)少,制備的成本低。缺點:對技術(shù)有一定的要求,而且通過抗原的化學(xué)處理很容易丟失表位。
抗體獨特的生物學(xué)活性使其在疾病的診斷、免疫防治及基礎(chǔ)研究中發(fā)揮作重要作用。早在19世紀后期,人們就開始使用特異性抗原免疫動物制備相應(yīng)的抗血清。1975年,Kohler和Milstein建立了單克隆抗體(monoclonai antibody,mAb)技術(shù),使規(guī)?;苽涓咛禺愋浴⒕|(zhì)性抗體成為可能。然而,鼠源性mAb在人體反復(fù)免疫后出現(xiàn)的人抗鼠抗體(human anti-mouseantibody,HAMA)很大程度上限制了mAb的臨床應(yīng)用。近年來,隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,人們已經(jīng)可以通過抗體工程技術(shù)制備人一鼠嵌合抗體、人源化抗體或人源抗體。多克隆抗體的制備過程可以在實驗室中完成,并且通常具有較高成功率。
抗體IgG可通過其Fc段與表面具有相應(yīng)受體的細胞結(jié)合,產(chǎn)生不同的生物學(xué)作用。調(diào)理作用(opsonization)指IgG抗體(特別是IgG1和IgG3)的Fc段與中性粒細胞、巨噬細胞表面相應(yīng)的Fc受體結(jié)合,從而增強吞噬細胞的吞噬作用。例如,細菌特異性的IgG抗體可通過其Fab段與相應(yīng)的細菌抗原結(jié)合后,以其Fc段與巨噬細胞或中性粒細胞表面相應(yīng)的Fc受體結(jié)合,通過IgG的Fab段和Fc段的“橋聯(lián)”作用,促進吞噬細胞對細菌的吞噬??贵w依賴的細胞介導(dǎo)的細胞毒作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)指具E有殺傷活性的細胞(如NK細胞)通過其表面的Fc受體識別包被于靶細胞表面抗原(如病毒感染細胞或腫瘤細胞)上的抗體的Fc段,直接殺傷靶細胞。NK細胞是介導(dǎo)ADCC的主要細胞。抗體與靶細胞上的抗原結(jié)合是特異性的,而表達Fc受體細胞的殺傷作用是非特異性的 。單克隆抗體可以用于研究病原微生物的識別機制。江蘇正常抗體費用
單克隆抗體可以用于篩選藥物候選物。四川Prestige Antibodies抗體試劑
抗體的分類:1、免疫球蛋白可分為兩種類型:(1)分泌性免疫球蛋白:存在于血清、體液以及分泌液中,具有抗體的各種功能。(2)膜型免疫球蛋白:位于B淋巴細胞的表面,即膜表面免疫球蛋白(mIg),是B淋巴細胞的抗原識別受體(BCR)。2、根據(jù)所對應(yīng)的抗原分:3、根據(jù)有無抗原刺激分:4、根據(jù)與抗原反應(yīng)的性質(zhì)分:5、根據(jù)抗原性分:免疫球蛋白的理化性質(zhì);免疫球蛋白是多鏈糖蛋白,具有蛋白質(zhì)的通性,對物理及化學(xué)因素敏感,不耐熱,在60~70℃時即被破壞,能被多種蛋白水解酶裂解破壞,可在乙醇、三氯醋酸或中性鹽類中沉淀。因此,通常用50%飽和硫酸銨或硫酸鈉從免疫血清中提取抗體。四川Prestige Antibodies抗體試劑