抗體(antibody,Ab):是由抗原進(jìn)入機(jī)體刺激B細(xì)胞分化增殖為漿細(xì)胞而合成并分泌的一類(lèi)能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合并產(chǎn)生免疫效應(yīng)的含有糖基的球蛋白。抗體分布于體液(血液、組織液及粘膜的外分泌液)中,主要存在于血清內(nèi)。1964年世界衛(wèi)生組織召開(kāi)會(huì)議,將具有抗體活性及化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗體相似的球蛋白統(tǒng)稱(chēng)為免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。免疫球蛋白除分布于體液中之外,還可存在于B細(xì)胞膜上。現(xiàn)代免疫學(xué)認(rèn)為,抗體與免疫球蛋白是等同的概念;只是抗體側(cè)重于其生物學(xué)活性的描述,而免疫球蛋白側(cè)重強(qiáng)調(diào)其化學(xué)結(jié)構(gòu)。單克隆抗體可以用于篩選藥物候選物。北京自身抗體補(bǔ)給公司
選擇性培養(yǎng)的目的是篩選融合的雜交瘤細(xì)胞,一般采用HAT選擇性培養(yǎng)基。在HAT培養(yǎng)基中,未融合的小鼠骨髓瘤細(xì)胞中DNA的從頭合成途徑會(huì)被阻止;未融合的骨髓瘤細(xì)胞又因缺乏次黃嘌呤-鳥(niǎo)嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(HGPRT),不能利用補(bǔ)救途徑合成DNA;這樣未融合小鼠骨髓瘤細(xì)胞的兩個(gè)DNA合成途徑都被阻止,骨髓瘤細(xì)胞DNA不能復(fù)制而死亡。 未融合的B淋巴細(xì)胞雖具有次黃嘌呤-鳥(niǎo)嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶,但其本身不能在體外長(zhǎng)期存活也逐漸死亡。 只有融合的雜交瘤細(xì)胞由于從B淋巴細(xì)胞獲得了次黃嘌呤-鳥(niǎo)嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶,可以通過(guò)補(bǔ)救途徑合成DNA,并具有骨髓瘤細(xì)胞能無(wú)限增殖的特性,因此,雜交瘤細(xì)胞能在HAT培養(yǎng)基中存活和增殖。武漢新基因PRR11抗體試劑多克隆抗體通常由多個(gè)不同的B細(xì)胞克隆產(chǎn)生,這些細(xì)胞分別產(chǎn)生針對(duì)不同抗原的抗體。
單克隆抗體的大量制備主要采用動(dòng)物體內(nèi)誘生法和體外培養(yǎng)法。(1)體內(nèi)誘生法取BALB/c小鼠,首先腹腔注射0.5ml液體石蠟或降植烷進(jìn)行預(yù)處理。1-2周后,腹腔內(nèi)接種雜交瘤細(xì)胞。雜交瘤細(xì)胞在小鼠腹腔內(nèi)增殖,并產(chǎn)生和分泌單克隆抗體。約1-2周,可見(jiàn)小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水,即可獲得大量單克隆抗體。(2)體外培養(yǎng)法將雜交瘤細(xì)胞置于培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng)。在培養(yǎng)過(guò)程中,雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生并分泌單克隆抗體,收集培養(yǎng)上清液,離心去除細(xì)胞及其碎片,即可獲得所需要的單克隆抗體。但這種方法產(chǎn)生的抗體量有限。各種新型培養(yǎng)技術(shù)和裝置不斷出現(xiàn),極大提高了抗體的生產(chǎn)量。
抗體基本結(jié)構(gòu):經(jīng)x線晶體衍射結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn),Ig由四條多肽鏈組成,各肽鏈之間由數(shù)量不等的鏈間二硫鍵連接。Ig可形成“Y”字型結(jié)構(gòu),稱(chēng)為Ig單體,是構(gòu)成抗體的基本單位。天然Ig分子含有四條異源性多肽鏈,其中,分子量較大的兩條鏈稱(chēng)為重鏈(heavy chain,H),而分子量較小的兩條鏈稱(chēng)為輕鏈(Light chain,L)。同一Ig分子中的兩條H鏈和兩條L鏈的氨基酸組成完全相同。重鏈分子量為50 000~75 000,由450~550個(gè)氨基酸殘基組成。重鏈恒定區(qū)的氨基酸組成和排列順序不同,其抗原性也不同。多克隆抗體具有更普遍的抗原特異性,可以同時(shí)識(shí)別多個(gè)不同的抗原分子。
IgE是什么?與過(guò)敏有什么關(guān)系?說(shuō)IgE之前,我們先來(lái)了解一下抗體,它的本質(zhì)是蛋白質(zhì),確切地說(shuō),它是一種具有免疫功能的球蛋白,存在于血清、體液、外分泌液和一些細(xì)胞膜上,因此也叫做免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)。人體至少有5種免疫球蛋白,各自具有不同的免疫學(xué)功能,包括IgM,IgG,IgA,IgD和IgE。其中與過(guò)敏關(guān)系密切的是IgE抗體。IgE是Ⅰ型超敏反應(yīng)機(jī)制中重要的免疫分子,自1967年IgE純化以來(lái),血清學(xué)檢測(cè)已成為診斷超敏反應(yīng)疾病常用的檢測(cè)方法。多克隆抗體可以用于檢測(cè)特定蛋白質(zhì)在不同組織和細(xì)胞中的表達(dá)情況。兔抗富含脯氨酸蛋白11多克隆抗體基因
多克隆抗體的制備過(guò)程可以在實(shí)驗(yàn)室中完成,并且通常具有較高成功率。北京自身抗體補(bǔ)給公司
人血清中的抗體多種多樣,B淋巴細(xì)胞可產(chǎn)生的抗體種類(lèi)在108以上,可與眾多不同抗原發(fā)生特異性結(jié)合??贵w多樣性的原因主要有兩方面:1.外源性因素環(huán)境中抗原種類(lèi)甚多,每種大分子抗原又有多種抗原表位,每種抗原表位均可選擇啟動(dòng)體內(nèi)一個(gè)B細(xì)胞克隆,產(chǎn)生一種特異性抗體。2.內(nèi)源性因素抗體多樣性的另一個(gè)原因是由基因的結(jié)構(gòu)及功能特征所決定的。編碼人Ig重鏈及κ、λ型輕鏈的基因分別位于第14、2、22號(hào)染色體上。其中編碼Ig重鏈的基因包括編碼可變區(qū)的V、D、J及編碼恒定區(qū)的C基因;編碼Ig輕鏈的基因包括編碼可變區(qū)的V、J及編碼恒定區(qū)的C基因。北京自身抗體補(bǔ)給公司