DAPI是一種能夠與DNA強(qiáng)力結(jié)合的熒光染料,常用熒光顯微鏡觀測,可以透過完整的細(xì)胞膜,可用于活細(xì)胞和固定細(xì)胞的染色,其工作濃度一般為0.3mmol/L或0.1ug/ml。顯微鏡下可以看到藍(lán)色熒光的細(xì)胞,熒光顯微鏡觀察細(xì)胞標(biāo)記的效率高 ,且對活細(xì)胞無毒副作用。DAPI染色常用于細(xì)胞凋亡檢測,染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測。DAPI也常用于普通的細(xì)胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色。DAPI的大激發(fā)波長為340nm,大發(fā)射波長為488nm, DAPI和雙鏈DNA結(jié)合后,大激發(fā)波長為360nm,大發(fā)射波長為460nm?？蒲袑?shí)驗(yàn)中試劑取用應(yīng)注意事項(xiàng)：讀數(shù)時(shí)量筒必須放平穩(wěn)。胰蛋白酶溶液(1%)

試劑空白吸光度是反映試劑質(zhì)量的指標(biāo)之一。每種試劑都有一定的空白吸光度范圍，試劑空白吸光度的改變往往提示該試劑的變質(zhì);如利用Trinder反應(yīng)為原理的檢測試劑會(huì)因含酚類物質(zhì)被氧化為醌而變?yōu)榧t色。堿性磷酸酶、r一谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、淀粉酶等檢測試劑會(huì)因基質(zhì)分解出硝基酚或酚基苯胺而變黃。有些試劑久置后變渾濁。這些情況均可使空白吸光度升高。丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶等負(fù)反應(yīng)，在放置過程中其試劑空白吸光度會(huì)因NADH自行氧化為NAD+而下降。原則上，吸光度上升的反應(yīng)，其試劑空白吸光度越低越好，不能超過一個(gè)高限;相反，吸光度下降的反應(yīng)，其試劑空白吸光度不能低于一個(gè)低限。因此，試劑空白吸光度限值，常作為程序參數(shù)輸入儀器，如經(jīng)核查超限，儀器會(huì)自動(dòng)報(bào)警，提示更換試劑。胰蛋白酶溶液(1%)利福平溶液怎么配制：過濾滅菌后，小份分裝（1-2ml每管）后，置于－20℃保存。

試劑盒實(shí)驗(yàn)技巧：濃洗刷液或許會(huì)有結(jié)晶分出，檢測試劑盒稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗刷時(shí)不影響效果。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值），請先將樣本稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，核算時(shí)請后乘以稀釋倍數(shù)（×5×n）。各步加樣均應(yīng)運(yùn)用加樣器，并經(jīng)常校正其正確性，以避免實(shí)驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)目多，舉薦運(yùn)用排加樣。封板膜只限一次性運(yùn)用，以避免交叉污染。嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，檢測試劑盒實(shí)驗(yàn)效果斷定有必要以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

PBS是磷酸緩沖鹽溶液的簡稱，不只偽狂犬病毒要用它稀釋，一般的有活性的生物制劑都要用它來稀釋。原因就是它具有鹽平衡、可調(diào)整的適宜pH緩沖作用，蒸餾水不具有鹽平衡作用，可以破壞生物蛋白的結(jié)構(gòu)及生物特性;生理鹽水不具有調(diào)整pH的作用，對完整的、具有活性的物質(zhì)不能保證其在適條件下參與生物反應(yīng)，所以使用PBS是。PBS也不是的，有的生物活性物質(zhì)需要的條件比PBS還要高，就需要在平衡緩沖液中加入更多的成分，維持的條件保證生物活性物質(zhì)保持其完整的特性。已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。

檢測試劑盒說明：檢測原理：選用雙抗體夾心ABC-法。試劑盒保存：-20℃(較長時(shí)間不用時(shí))；2-8℃(頻頻運(yùn)用時(shí))。濃洗刷液低溫保存會(huì)有鹽分出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。中、英文說明書或許會(huì)有不一致之處，請以英文說明書為準(zhǔn)。剛敞開的酶聯(lián)板孔中或許會(huì)含有少量水樣物質(zhì)，此為正常現(xiàn)象，不會(huì)對實(shí)驗(yàn)效果形成任何影響。檢測試劑盒優(yōu)勢：活絡(luò)、特異的抗體；安穩(wěn)的重復(fù)性和可靠性；吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體；適用血清、血漿、安排勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型。瓶上裝有滴管的試劑瓶稱作滴瓶。Nitsch培養(yǎng)基

挑選ELISA檢測試劑盒的方法：靈敏度。反應(yīng)的是檢測試劑盒檢出被檢物質(zhì)的低量的才行。胰蛋白酶溶液(1%)

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選：1、轉(zhuǎn)染48 h后，用含適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)的殺傷效果較好。但細(xì)胞過于稠密，其效率會(huì)降低，較好將細(xì)胞稀釋至豐度低于25%。2、每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。3、篩選7天后觀察并評估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間（取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果）。4、挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。5、后續(xù)更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。胰蛋白酶溶液(1%)

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