測(cè)定血清中的某些酶,如CK,離體(采集血液)后很容易失活。失活的原因是酶活性中心的活性基因巰基(一SH)被氧化造成的。只有通過適當(dāng)?shù)倪€原作用才能重新開始。如CK—NAC檢測(cè)試劑盒即含有CK活化劑,名為N一乙酰半胱氨酸。實(shí)驗(yàn)研究證明,NAC對(duì)血清中已失活的CK活化過程約需180 S。這就是CK測(cè)定為什么要延遲時(shí)間較長(zhǎng)的理論依據(jù)。在AST,ALT采用IFCC推薦方法測(cè)定時(shí)需要磷酸吡哆醛預(yù)活化。需要強(qiáng)調(diào):含有活化劑的生化試劑,其測(cè)定酶活性的結(jié)果要高些。外用液體試劑系指藥物與適宜的溶劑或分散介質(zhì)制成的。胰蛋白酶溶液(1%)
試劑抗干擾作用的合理性有些液體雙試劑,其實(shí)質(zhì)并不真正具備抗干擾的能力而只是解決了試劑的液體化和穩(wěn)定性問題。如,ALT檢測(cè)試劑盒中,NADH在pH7.5~7.8水溶液中極不穩(wěn)定,在pH>8.7時(shí)才能穩(wěn)定保存。因此,為了保證試劑穩(wěn)定性,液體雙試劑的R1需要維持pH>8.7,但此時(shí)LDH活性很大程度下降,就失去消除內(nèi)源性酸的功能,只有加入試劑R2后,反應(yīng)混合液的pH下降至LDH適pH,在經(jīng)過延遲時(shí)間60 S后,才能消除內(nèi)源性酸的干擾。再如,Tfinder反應(yīng)中抗Vc干擾問題:由于維生素c易氧化,樣品中Vc會(huì)競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)生成的過氧化氫,而產(chǎn)生負(fù)干擾。因此,在試劑R1中加入抗壞血酸氧化酶,這種方法是有效的,但不一定有很大的意義。STM溶液(2M,pH7.4)固體試劑一般裝在帶膠木塞的廣口瓶中,液體試劑則盛在細(xì)口瓶中。
檢測(cè)試劑盒標(biāo)本保存方法:標(biāo)本凝集不全。在沒有促凝劑和抗凝劑存在的狀況下,正常血液搜集后1/2~2h初步凝聚,18~24h完全凝聚。臨床查驗(yàn)工作中,有時(shí)為了爭(zhēng)取時(shí)刻快速檢測(cè),常在血液還未初步凝聚時(shí)即強(qiáng)行離心分別血清,此時(shí)的血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在測(cè)定過程中可以構(gòu)成肉眼可見的纖維蛋白塊,易形成假陽性作用;這類狀況于次日復(fù)查時(shí)因血凝已完全,血清中不再有纖維蛋白原存在,故復(fù)查作用變?yōu)殛幮?。為避免上述煩擾作用,處理的辦法是血液標(biāo)本搜集后有必要使其充沛凝聚后再分別血清,或標(biāo)本搜集時(shí)用帶分別膠的采集血液管或于采集血液管中加入適當(dāng)?shù)拇倌齽?/p>
弱酸-弱堿型緩沖溶液(即共軛酸堿緩沖溶液)、酸式鹽緩沖溶液、強(qiáng)酸或強(qiáng)堿溶液。在一些特殊情況下也使用混合體系的緩沖溶液(兩種pKa相近的共軛酸堿緩沖溶液混合而成)。大家比較熟悉的是共軛酸堿緩沖溶液,例如,HAc-NaAc、HF-NH4F、NH3-NH4Cl。其實(shí),酸式鹽也可作為緩沖溶液,因?yàn)樗崾禁}的pH值大多是恒定的,隨其濃度增減的變化不大,例如,NaHCO3溶液在1.0M至0.01M之間,其pH值幾乎都在8左右(理論值為8.3),同樣可以抵抗溶液中產(chǎn)生的少量強(qiáng)酸、強(qiáng)堿(或外加),保持溶液的pH值恒定或變化微小。強(qiáng)酸、強(qiáng)堿溶液也能緩沖滴定過程中產(chǎn)生的少量強(qiáng)酸或強(qiáng)堿,保持溶液的pH值變化很小,故強(qiáng)酸強(qiáng)堿也可作為廣義的pH緩沖溶液(以前的分析化學(xué)教材就是這樣分的),例如,EDTA絡(luò)合滴定鉍,需另外加入一定量的0.1mol/L硝酸溶液,就是為了增強(qiáng)溶液對(duì)滴定中產(chǎn)生的H+的緩沖作用。檢測(cè)試劑盒要確保微量加樣器的準(zhǔn)確性。
BCA蛋白檢測(cè)試劑盒是進(jìn)行蛋白質(zhì)濃度測(cè)定的常見的方法之一。BCA蛋白定量的主要原理是:蛋白質(zhì)在堿性條件下,可以將二價(jià)Cu2+離子還原成一價(jià)Cu+離子。產(chǎn)生的一價(jià)Cu+離子可以與BCA(Bicinchoninicacid)試劑結(jié)合,終生成紫色的復(fù)合物。該復(fù)合物在562nm處有很強(qiáng)的吸收峰。復(fù)合物的多少與蛋白質(zhì)的濃度呈接近的線性關(guān)系。BCA蛋白檢測(cè)試劑盒有許多優(yōu)點(diǎn):檢測(cè)的靈敏度高,檢測(cè)的蛋白質(zhì)濃度下限可達(dá)20μg/mL。線性范圍廣,在20-2000μg/mL的范圍內(nèi),呈接近的線性關(guān)系。兼容性良好,產(chǎn)品可以兼容的化學(xué)物質(zhì)非常普遍。檢測(cè)試劑盒如為有菌操作,則主張冰凍保存??焖儋|(zhì)粒抽提試劑盒
磷酸緩沖鹽溶液可以破壞生物蛋白的結(jié)構(gòu)及生物特性。胰蛋白酶溶液(1%)
用pH計(jì)測(cè)定配制好的鹽溶液的pH值,使其在6.4~7.0之間。一般鹽霧標(biāo)準(zhǔn)中要求試驗(yàn)過程中的鹽霧收集液pH值在6.5~7.2之間。當(dāng)pH值不在上述范圍時(shí),應(yīng)用氫氧化鈉(NaOH)或者冰乙酸(CH3COOH)進(jìn)行調(diào)節(jié)。氫氧化鈉可以使pH值升高,冰乙酸使pH值降低。通常只需要加入少量的即可調(diào)節(jié)pH值。在氯化鈉溶液中加入少量冰乙酸,攪拌均勻,并用pH計(jì)測(cè)量溶液的pH值,直至其為3.0-3.1之間,試驗(yàn)過程中收集液的PH值應(yīng)在3.1-3.3之間。配制好乙酸鹽霧溶液后,加入氯化銅,其濃度為0.26g/L±0.02g/L(即0.205g/L±0.015g/L無水氯化銅)。調(diào)節(jié)溶液的pH值,直至其為3.0-3.1之間,試驗(yàn)過程中收集液的PH值應(yīng)在3.0-3.1之間。胰蛋白酶溶液(1%)