加藥時(shí)間:由于基因轉(zhuǎn)染到細(xì)胞內(nèi)之后要一段時(shí)間才能表達(dá)出蛋白質(zhì)。所以篩選不能太早；但是也不能太晚，因?yàn)檗D(zhuǎn)染了外源基因的細(xì)胞代謝負(fù)荷較大，增值較慢，時(shí)間長(zhǎng)了就會(huì)被沒(méi)有外源基因轉(zhuǎn)入的細(xì)胞所淹沒(méi)，終導(dǎo)致篩選不出陽(yáng)性克隆，一般要在轉(zhuǎn)染24小時(shí)之后才開(kāi)始加G418篩選。隨著細(xì)胞的代謝G418的濃度和活性都回下降，所以每3~5天都要更換一次含有G418的篩選液。這時(shí)藥物濃度可以降至200ug/ml。培養(yǎng)液:加藥篩選約6天左右，細(xì)胞會(huì)大量死亡，孔中只剩下的細(xì)胞。這時(shí)會(huì)出現(xiàn)兩個(gè)問(wèn)題：1.死亡的細(xì)胞會(huì)裂解釋放出有害物質(zhì)，導(dǎo)致那些有neo表達(dá)的陽(yáng)性細(xì)胞死亡，即非選擇性死亡。2.孔中細(xì)胞數(shù)目很少，細(xì)胞之間的信號(hào)會(huì)變得很弱，也會(huì)導(dǎo)致陽(yáng)性細(xì)胞的狀態(tài)不佳甚至死亡。這個(gè)時(shí)候需要一種特殊的培養(yǎng)液：假如你要轉(zhuǎn)染3T3細(xì)胞，在3T3細(xì)胞匯合度達(dá)到80%的時(shí)候，換液，培養(yǎng)過(guò)夜之后收集培養(yǎng)液，通過(guò)濾器消毒，和新鮮的培養(yǎng)液按1：1混合備用。再轉(zhuǎn)染后篩選過(guò)程中就可以應(yīng)用這種培養(yǎng)基。丁胺卡那霉素給藥說(shuō)明：配制靜脈用藥時(shí)，每500mg加入氯化鈉注射液。甲基黃-亞甲藍(lán)指示劑

檢測(cè)試劑盒以免疫學(xué)反應(yīng)為根底，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的催化效果相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。因?yàn)榭乖?、抗體的反應(yīng)在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每參與一種試劑孵育后，可通過(guò)洗刷除掉剩余的游離反應(yīng)物，然后保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。使用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本水平。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次參與，再與HRP符號(hào)的抗體結(jié)合，構(gòu)成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，通過(guò)完全洗刷后加底物TMB顯色。檢測(cè)試劑盒TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的效果下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值)，通過(guò)規(guī)范曲線核算樣品的濃度。Ficoll溶液(8% m/V)液體試劑也是其他劑型（如注射劑、軟膠囊、軟膏劑、栓劑、氣霧劑等）的基礎(chǔ)劑型。

方便快捷的LSMTM淋巴細(xì)胞分離液：早期分離白細(xì)胞的方法，會(huì)用一種化合物混合血液。此化合物能夠聚集紅細(xì)胞，只輕微影響白細(xì)胞。通過(guò)離心，紅細(xì)胞由于密度增加而聚集沉淀，同時(shí)從離心管內(nèi)上層收集白細(xì)胞。后來(lái)，B?yum提出的以Ficoll?-甲泛影鈉溶液為介質(zhì)進(jìn)行離心。稀釋的血液在Ficoll?-甲泛影鈉溶液中分層，之后低速短時(shí)離心。紅細(xì)胞和多形核粒細(xì)胞沉降到管底，單個(gè)淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和血小板可以從兩個(gè)分層間的分界面處收集。而MP Biomedicals出品的淋巴細(xì)胞分離液，不同于B?yum的配方，由于LSM中含有聚蔗糖和泛影酸鹽，能夠形成特定的密度梯度1.077 g/mL（20℃）。只需要將血液樣品輕置于淋巴細(xì)胞分離液上層，經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)單的一步離心(400 xg，30分鐘)，就能夠分離獲得淋巴細(xì)胞。

試劑抗干擾作用的合理性有些液體雙試劑，其實(shí)質(zhì)并不真正具備抗干擾的能力而只是解決了試劑的液體化和穩(wěn)定性問(wèn)題。如，ALT檢測(cè)試劑盒中，NADH在pH7.5~7.8水溶液中極不穩(wěn)定，在pH>8.7時(shí)才能穩(wěn)定保存。因此，為了保證試劑穩(wěn)定性，液體雙試劑的R1需要維持pH>8.7，但此時(shí)LDH活性很大程度下降，就失去消除內(nèi)源性酸的功能，只有加入試劑R2后，反應(yīng)混合液的pH下降至LDH適pH，在經(jīng)過(guò)延遲時(shí)間60 S后，才能消除內(nèi)源性酸的干擾。再如，Tfinder反應(yīng)中抗Vc干擾問(wèn)題：由于維生素c易氧化，樣品中Vc會(huì)競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)生成的過(guò)氧化氫，而產(chǎn)生負(fù)干擾。因此，在試劑R1中加入抗壞血酸氧化酶，這種方法是有效的，但不一定有很大的意義。如果試劑符合基準(zhǔn)物質(zhì)的要求 (組成與化學(xué)式相符、純度高、穩(wěn)定)，可以直接配制標(biāo)準(zhǔn)溶液。

試劑盒在生產(chǎn)過(guò)程中的辦法：質(zhì)量確保是一個(gè)雜亂的過(guò)程，許多重要的環(huán)節(jié)都會(huì)影響檢測(cè)質(zhì)量。在生產(chǎn)過(guò)程中，不同批次的試劑的質(zhì)量是確保完全一致非常困難，檢測(cè)試劑盒甚至經(jīng)過(guò)批檢驗(yàn)項(xiàng)目和成果也不同，因此有必要挑選和訂貨試劑長(zhǎng)批次，并小鼠檢測(cè)試劑盒確保保存條件。嚴(yán)格執(zhí)行本規(guī)范能夠防止因試劑批號(hào)變化與質(zhì)量控制系統(tǒng)和雜亂的過(guò)程，從頭評(píng)價(jià)試劑從頭建立，并能確保成果的穩(wěn)定性；有效期短，運(yùn)用率低的試劑，應(yīng)小包裝，包裝，可每次都是采納，以防止重復(fù)凍融損壞試劑引起的。檢測(cè)試劑盒掃除各種影響因素的干擾和正確操作是保證檢測(cè)成果準(zhǔn)確牢靠的必要條件。Tris-甘氨酸電泳粉劑(5×)

試劑成份、純度、用量及穩(wěn)定性，才是保證試劑質(zhì)量的關(guān)鍵所在。甲基黃-亞甲藍(lán)指示劑

使用方法：1， 固定細(xì)胞或組織樣品，經(jīng)過(guò)固定后，適當(dāng)洗滌除去固定劑。如果需要進(jìn)行免疫熒光染色，可先進(jìn)行免疫熒光染色，染完畢后再進(jìn)行染色。如果不需要進(jìn)行其它染色，則直接進(jìn)行染色。 2， 對(duì)于貼壁細(xì)胞或組織切片，加入少量染色液，覆蓋住樣品即可。對(duì)于懸浮細(xì)胞，至少加入待染色樣品體積 3 倍的染色液，混勻。 3， 室溫染色 5-10 分鐘。 4， 吸除染色液，生理鹽水洗滌 2-3 次，每次 3-5 分鐘。 5， 置于熒光顯微鏡下觀察，激發(fā)波長(zhǎng) 360-400nm。 溶液注意事項(xiàng)： dapi 被普遍認(rèn)為具有致性，操作時(shí)應(yīng)戴手套，并避免交叉污染。 本產(chǎn)品需避光，并盡量避免反復(fù)凍融。熒光染料都存在淬滅問(wèn)題，建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測(cè)。 為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光衰減封片劑。甲基黃-亞甲藍(lán)指示劑