檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)分析:洗板時(shí),每次洗液加入后,應(yīng)靜置1分鐘,使清洗更加徹底。沒(méi)有洗板機(jī)時(shí),倒去液體后,要將酶標(biāo)板在報(bào)紙或毛紙上用力拍干(報(bào)紙就免了吧?。?。洗液不夠時(shí),可用蒸餾水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸緩沖液,加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長(zhǎng)期保存(洗液先用現(xiàn)配不費(fèi)多少事的)。底物是光敏感的,要在臨用前現(xiàn)配(同前,避光?。?。檢測(cè)前,要打開(kāi)酶標(biāo)儀,使之穩(wěn)定10分鐘以上。底物有一定的毒性,終止液對(duì)皮膚有腐蝕性,應(yīng)盡量避免接觸(終止液為硫酸,小心毀容)。待檢樣品要澄清,否則會(huì)影響結(jié)果。溫浴時(shí)間應(yīng)遵守檢測(cè)試劑盒規(guī)定。應(yīng)盡量做雙孔實(shí)驗(yàn),這樣才能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。檢測(cè)試劑盒操作注意事項(xiàng):實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。Glyceel封片劑
液體固體試劑正確取用試劑的方法過(guò)程:取用試劑后應(yīng)立即蓋上原來(lái)的瓶塞,把試劑瓶放回原處,并使試劑標(biāo)簽朝外,應(yīng)根據(jù)所需用量取用試劑,不必多取,如不慎取出了過(guò)多的試劑,只能棄去,不得倒回或放回原瓶。以免沾污試劑。 從滴瓶中取用少量試劑。瓶上裝有滴管的試劑瓶稱(chēng)作滴瓶。滴管上部裝有橡皮頭,下部為細(xì)長(zhǎng)的管子。使用時(shí),提起滴管,使管口離開(kāi)液面,用手指緊捏滴管上部的橡皮頭醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)搜集整理,以趕出滴管中的空氣,然后把滴管,伸入試劑瓶中,放開(kāi)手指,吸入試劑。再提起滴管將試劑滴入試管或燒杯中。EB溶液(10mg/ml)固體試劑一般裝在帶膠木塞的廣口瓶中,液體試劑則盛在細(xì)口瓶中。
LISA檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析的三個(gè)小建議:實(shí)驗(yàn)中樣品都要做復(fù)孔或三孔,然后計(jì)算每個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)品的平均OD值,復(fù)孔的變異系數(shù)應(yīng)該小于20%。平均OD值減去空白孔的OD值。制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。 以減去本底后的OD值為X軸,標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為Y軸,利用作圖軟件得出一個(gè)合適的計(jì)算方法。建議使用合適的軟件來(lái)作圖,比如CurveExpert 1.4。這款軟件能夠給出很多種方法(比如直線、半對(duì)數(shù)、對(duì)數(shù)、四參數(shù)方程等)并從中選擇一條合適的方程。要想檢驗(yàn)?zāi)硹l曲線是否與表中數(shù)據(jù)吻合,可以將標(biāo)準(zhǔn)品的濃度作為未知數(shù),將對(duì)應(yīng)的OD值帶入該方程,計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)品的濃度,得到的結(jié)果應(yīng)該與實(shí)際濃度很接近(+/-10%)。選擇擬合度高的那條曲線。
PBS是磷酸緩沖鹽溶液的簡(jiǎn)稱(chēng),不只偽狂犬病毒要用它稀釋?zhuān)话愕挠谢钚缘纳镏苿┒家盟鼇?lái)稀釋。原因就是它具有鹽平衡、可調(diào)整的適宜pH緩沖作用,蒸餾水不具有鹽平衡作用,可以破壞生物蛋白的結(jié)構(gòu)及生物特性;生理鹽水不具有調(diào)整pH的作用,對(duì)完整的、具有活性的物質(zhì)不能保證其在適條件下參與生物反應(yīng),所以使用PBS是。PBS也不是的,有的生物活性物質(zhì)需要的條件比PBS還要高,就需要在平衡緩沖液中加入更多的成分,維持的條件保證生物活性物質(zhì)保持其完整的特性。固體試劑的取用:倒完液體后,要立即蓋緊瓶塞,并把瓶子放回原處。
檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)有哪些?正式試驗(yàn)時(shí),應(yīng)分別以陽(yáng)性對(duì)照與陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高,說(shuō)明有非特異性反應(yīng),可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。在實(shí)驗(yàn)中,進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的,其中包括:固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí),要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,在其它試驗(yàn)條件相同時(shí),觀察陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。選擇OD值大而蛋白量少的濃度。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)通常為1~10μg/ml。已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。甘油溶液
液體試劑給藥途徑多,可以?xún)?nèi)服,外用。Glyceel封片劑
BCA蛋白檢測(cè)試劑盒是進(jìn)行蛋白質(zhì)濃度測(cè)定的常見(jiàn)的方法之一。BCA蛋白定量的主要原理是:蛋白質(zhì)在堿性條件下,可以將二價(jià)Cu2+離子還原成一價(jià)Cu+離子。產(chǎn)生的一價(jià)Cu+離子可以與BCA(Bicinchoninicacid)試劑結(jié)合,終生成紫色的復(fù)合物。該復(fù)合物在562nm處有很強(qiáng)的吸收峰。復(fù)合物的多少與蛋白質(zhì)的濃度呈接近的線性關(guān)系。BCA蛋白檢測(cè)試劑盒有許多優(yōu)點(diǎn):檢測(cè)的靈敏度高,檢測(cè)的蛋白質(zhì)濃度下限可達(dá)20μg/mL。線性范圍廣,在20-2000μg/mL的范圍內(nèi),呈接近的線性關(guān)系。兼容性良好,產(chǎn)品可以兼容的化學(xué)物質(zhì)非常普遍。Glyceel封片劑