兩性霉素B溶液(10mg/ml):注意事項(xiàng):兩性霉素B作用原理在于其與菌類細(xì)胞膜上的Ergosterol結(jié)合導(dǎo)致細(xì)胞膜通透性發(fā)生變化,使菌類細(xì)胞內(nèi)鉀離子、氨基酸通透到到膜外,破壞菌類正常代謝,進(jìn)而使菌類細(xì)胞死亡。儲存條件:4℃,避光,12個(gè)月。兩性霉素B又稱廬山霉素,是從鏈霉菌(Streptomycesnodosus)的培養(yǎng)液中分離而得的一種多烯類克菌類,其抑菌機(jī)制是能與菌類細(xì)胞膜上的麥角甾醇結(jié)合,導(dǎo)致細(xì)胞膜受損,通透性提高,細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)外漏,破壞正常代謝而起抑菌作用。細(xì)菌因其細(xì)胞膜上不含麥角甾醇成分,故無效。兩性霉素B克菌類譜廣,幾乎對絕大部分菌類均有效,耐藥菌株少見,高濃度時(shí)呈殺菌作用。兩性霉素B溶液在室溫不穩(wěn)定,易被光、熱和酸破壞,在pH6.0~7.5下克菌作用很好。檢測試劑盒汲取液體時(shí)要選用量程和需求量接近的微量加樣器吸,減少差錯(cuò)。T4 DNA連接酶緩沖液(10×)
檢測試劑盒檢測原理:檢測試劑盒為雙抗體夾心法檢測抗原RBD蛋白,酶標(biāo)板采用高親和力抗RBD蛋白抗體作為包被物,檢測時(shí)酶標(biāo)板孔加入待檢樣品或標(biāo)準(zhǔn)品(哺乳動物重組表達(dá)RBD蛋白),再加入生物素化抗RBD蛋白抗體,反應(yīng)后加入鏈霉親和素HRP,后加入單組份TMB底物液。 如果待檢樣品中含有RBD蛋白,TMB底物液在HRP催化下顯色,加入終止液終止顯色后,在酶標(biāo)儀OD450/OD630讀取吸光值,吸光值大小與待檢測樣品中RBD蛋白濃度呈正相關(guān),根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品濃度/吸光值繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線,可計(jì)算出待檢樣品中RBD蛋白含量。亞甲基藍(lán)染色液(0.2%)檢測試劑盒要留心避免出現(xiàn)嚴(yán)峻溶血。
非變性PAGE蛋白上樣緩沖液(2X) (Native Gel Sample Loading Buffer,2X),, 是一種以溴酚藍(lán)為染料的2倍濃縮液的非變性PAGE蛋白上樣緩沖液,試劑中不含有SDS,DTT??捎糜诜亲冃缘牡鞍讟悠飞蠘蛹捌渌治?。使用說明:1)按照1份蛋白樣品加入1份非變PAGE蛋白上樣緩沖液(2X)即1:1的比例混合,即可上樣,電泳。2)通常電泳到當(dāng)溴酚藍(lán)染料到達(dá)膠的底端處附近即可停止電泳。注意事項(xiàng):1)SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(2X)中含少量DTT和巰基乙醇,有輕微刺激性氣味。2)SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(2X)必須完全溶解后再使用。3)為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
檢測試劑盒具有靈敏、特異、簡單、快速、穩(wěn)定及易于自動化操作等特點(diǎn),而且因?yàn)橐蝗罩畠?nèi)能夠檢查幾百乃至上千份標(biāo)本,因此在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的使用規(guī)模日益擴(kuò)展。在檢測試劑盒中一般有3次加樣步聚,即加標(biāo)本,加酶結(jié)合物,加底物。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在檢測試劑盒板孔的底部,防止加在孔壁上部,并注意不行濺出,不行產(chǎn)生氣泡。加標(biāo)本一般用微量加樣器,按規(guī)則的量參加板孔中。每次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴,以免發(fā)作交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加樣。固體試劑的取用:取用固體藥品時(shí)藥匙必須是干凈的。
淋巴細(xì)胞分離液:淋巴細(xì)胞分離液是一種根據(jù)細(xì)胞密度差異,借助離心產(chǎn)生的重力加速度,進(jìn)行細(xì)胞的分離純化的常用試劑。常用的淋巴細(xì)胞分離液有Ficoll淋巴細(xì)胞分離液、Percoll淋巴細(xì)胞分離液。Ficoll與Percoll分離單個(gè)核細(xì)胞的方法均為密度梯度離心法。分離原理:外周血中單個(gè)核細(xì)胞和單核細(xì)胞,其體積、形態(tài)和密度與其他細(xì)胞不同,淋巴細(xì)胞分離液是一種密度介于1.075~1.090之間而近似于等滲的溶液,用它做密度梯度離心,使一定密度的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布,從而將各種血細(xì)胞加以分離。淋巴細(xì)胞分離液Lymphocyte Separation Medium(human, Ficoll-Paque )是世界范圍內(nèi)用于體外研究分離人淋巴細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)室公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)。檢測試劑盒吸附性能好。巴氏染色液(Papanicolaou EA65)
注意事項(xiàng):盡注意無菌操作,避免污染。T4 DNA連接酶緩沖液(10×)
主要試劑配制:(1)PBS:PBS粉劑每袋加ddH2O定容至1000mL,調(diào)pH7.2,高壓滅菌,4℃保存?zhèn)溆?。?)RPIM-1640培養(yǎng)基:臨用前根據(jù)需要加15%胎牛血清,較后按1%體積分?jǐn)?shù)加入雙抗貯存液(青霉素+鏈霉素),使青霉素和鏈霉素的終濃度分別為100 U/mL和100 U/mL,置于4℃冰箱保存。(3)臺盼藍(lán)染液:稱取4g臺盼藍(lán),于研缽中用少量雙蒸水研磨,加雙蒸水至100mL,1500rpm離心15min,吸取上層液,即為4%水溶液。用前,用1.8%氯化鈉溶液稀釋1倍,即為2%臺盼藍(lán)染液。T4 DNA連接酶緩沖液(10×)