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菠蘿蛋白酶檢測試劑盒(福林微板法)

來源: 發(fā)布時間:2024-01-14

使用方法:1, 固定細胞或組織樣品,經(jīng)過固定后,適當洗滌除去固定劑。如果需要進行免疫熒光染色,可先進行免疫熒光染色,染完畢后再進行染色。如果不需要進行其它染色,則直接進行染色。 2, 對于貼壁細胞或組織切片,加入少量染色液,覆蓋住樣品即可。對于懸浮細胞,至少加入待染色樣品體積 3 倍的染色液,混勻。 3, 室溫染色 5-10 分鐘。 4, 吸除染色液,生理鹽水洗滌 2-3 次,每次 3-5 分鐘。 5, 置于熒光顯微鏡下觀察,激發(fā)波長 360-400nm。 溶液注意事項: dapi 被普遍認為具有致性,操作時應戴手套,并避免交叉污染。 本產(chǎn)品需避光,并盡量避免反復凍融。熒光染料都存在淬滅問題,建議染色后盡量當天完成檢測。 為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光衰減封片劑。檢測試劑盒要留心避免出現(xiàn)嚴峻溶血。菠蘿蛋白酶檢測試劑盒(福林微板法)

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檢測試劑盒是經(jīng)過酶聯(lián)免疫吸附反響進行實驗來檢測特定物質(zhì)的檢測試劑盒,檢測試劑盒中會有不同濃度的規(guī)范樣品,在酶標條中經(jīng)過固相的抗原或抗體,酶標記的抗原或抗體,酶作用的底物反響可形成規(guī)范曲線,從而進行實驗樣品的測定。檢測試劑盒實驗的基本原理究竟是什么呢?抗原或抗體可經(jīng)過共價鍵與酶銜接形成酶結(jié)合物,而此種酶結(jié)合物仍能堅持其免疫學和酶學活性;抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體外表,可能是蛋白和聚苯乙烯外表間的疏水性部分相互吸附,并堅持其免疫學活性;酶結(jié)合物與相應抗原或抗體結(jié)合后,可根據(jù)參加底物的色彩反響來判定是否有免疫反響的存在,并且色彩反響的深淺是與標本中相應抗原或抗體的量成正比例的,因而,能夠按底物顯色的程度顯示實驗成果。強Tris鹽緩沖液(pH7.5)pH緩沖溶液有何用途:用以檢定pH計的準確性。

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hochest染色和DAPI染色有什么區(qū)別:1、每個染料有自己獨特的激發(fā)譜線和發(fā)射譜線.這也是以上兩個染料的主要區(qū)別. 另外Hoechest 33258 是膜透性的,因此在活細胞時候能輕松進入;DAPI是半透性的,有選擇性的進入.因此Hoechest 33258 一般用來染活細胞,可以長驅(qū)直入;DAPI一般是染固定細胞.2、兩者都可以用紫外看,參見以下的激發(fā)發(fā)射波長Hoechst 33258的較大激發(fā)波長為346nm,較大發(fā)射波長為460nm;Hoechst 33258和雙鏈DNA結(jié)合后,較大激發(fā)波長為352nm,較大發(fā)射波長為461nm。DAPI的較大激發(fā)波長為340nm,較大發(fā)射波長為488nm;DAPI和雙鏈DNA結(jié)合后,較大激發(fā)波長為364nm,較大發(fā)射波長為454nm。

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檢測試劑盒操作注意事項:檢測試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,這屬于正?,F(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。標準品稀釋液即可視為陰性對照或者空白;預處理后的樣本無需稀釋,直接取10μL加樣即可。嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。所有液體組分使用前充分搖勻。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。檢測試劑盒安全性:試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。淀粉水解試驗試劑

丁胺卡那霉素給藥說明:長期用藥可能導致耐藥菌過度生長。菠蘿蛋白酶檢測試劑盒(福林微板法)

殺滅曲線的建立:通過建立殺滅曲線(劑量反應曲線),確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細胞的較低濃度,從而篩選得到穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞株。建立殺滅曲線至少選擇5個濃度。1、按照20-25%的細胞密度將未轉(zhuǎn)化的細胞鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,CO2過夜培養(yǎng)(需要更高密度,可增加接種量)。2、根據(jù)細胞類型,設定合適的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例,可設定50,100,250,500,750,1000μg/mL。3、第2天換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養(yǎng)基,每個濃度做三個平行孔。4、接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。5、按照每2天進行活細胞計數(shù),來確定殺滅未轉(zhuǎn)染細胞的恰當濃度。通常7-10天內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細胞的較低濃度為篩選用的工作濃度。菠蘿蛋白酶檢測試劑盒(福林微板法)