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二甲基亞砜(DMSO):能與水、乙醇等溶劑任意混合,本品溶解范圍廣,具有皮膚給藥的促滲作用。對(duì)皮膚有刺激性。乙醇:乙醇也是常用的溶劑??膳c水、甘油、丙二醇以任意比例混合;具有較普遍的溶解性能。乙醇的毒性小。含乙醇20%以上即具有防腐作用,但乙醇本身具有藥理作用。丙二醇:丙二醇的性質(zhì)基本上同甘油相似,藥用丙二醇應(yīng)為1,2-丙二醇。丙二醇同樣可與水、乙醇、甘油以任意比例混合,能溶解諸多有機(jī)藥物,一定比例的丙二醇與水混合物可抑制某些藥物的水解,增加穩(wěn)定性。丙二醇水溶液對(duì)藥物在皮膚及黏膜上有促滲作用??蒲袑?shí)驗(yàn)中試劑取用應(yīng)注意事項(xiàng):取用少量的液體—使用膠頭滴管。Tris-HCl緩沖液(1.5mol/L,pH8.8)
淋巴細(xì)胞分離液:淋巴細(xì)胞分離液是一種根據(jù)細(xì)胞密度差異,借助離心產(chǎn)生的重力加速度,進(jìn)行細(xì)胞的分離純化的常用試劑。常用的淋巴細(xì)胞分離液有Ficoll淋巴細(xì)胞分離液、Percoll淋巴細(xì)胞分離液。Ficoll與Percoll分離單個(gè)核細(xì)胞的方法均為密度梯度離心法。分離原理:外周血中單個(gè)核細(xì)胞和單核細(xì)胞,其體積、形態(tài)和密度與其他細(xì)胞不同,淋巴細(xì)胞分離液是一種密度介于1.075~1.090之間而近似于等滲的溶液,用它做密度梯度離心,使一定密度的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布,從而將各種血細(xì)胞加以分離。淋巴細(xì)胞分離液Lymphocyte Separation Medium(human, Ficoll-Paque )是世界范圍內(nèi)用于體外研究分離人淋巴細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)室公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)。Kodak F-5定影液挑選ELISA檢測(cè)試劑盒的方法:靈敏度。反應(yīng)的是檢測(cè)試劑盒檢出被檢物質(zhì)的低量的才行。
試劑空白吸光度是反映試劑質(zhì)量的指標(biāo)之一。每種試劑都有一定的空白吸光度范圍,試劑空白吸光度的改變往往提示該試劑的變質(zhì);如利用Trinder反應(yīng)為原理的檢測(cè)試劑會(huì)因含酚類物質(zhì)被氧化為醌而變?yōu)榧t色。堿性磷酸酶、r一谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、淀粉酶等檢測(cè)試劑會(huì)因基質(zhì)分解出硝基酚或酚基苯胺而變黃。有些試劑久置后變渾濁。這些情況均可使空白吸光度升高。丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶等負(fù)反應(yīng),在放置過程中其試劑空白吸光度會(huì)因NADH自行氧化為NAD+而下降。原則上,吸光度上升的反應(yīng),其試劑空白吸光度越低越好,不能超過一個(gè)高限;相反,吸光度下降的反應(yīng),其試劑空白吸光度不能低于一個(gè)低限。因此,試劑空白吸光度限值,常作為程序參數(shù)輸入儀器,如經(jīng)核查超限,儀器會(huì)自動(dòng)報(bào)警,提示更換試劑。
檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)分析:洗板時(shí),每次洗液加入后,應(yīng)靜置1分鐘,使清洗更加徹底。沒有洗板機(jī)時(shí),倒去液體后,要將酶標(biāo)板在報(bào)紙或毛紙上用力拍干(報(bào)紙就免了吧?。?。洗液不夠時(shí),可用蒸餾水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸緩沖液,加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長(zhǎng)期保存(洗液先用現(xiàn)配不費(fèi)多少事的)。底物是光敏感的,要在臨用前現(xiàn)配(同前,避光?。?。檢測(cè)前,要打開酶標(biāo)儀,使之穩(wěn)定10分鐘以上。底物有一定的毒性,終止液對(duì)皮膚有腐蝕性,應(yīng)盡量避免接觸(終止液為硫酸,小心毀容)。待檢樣品要澄清,否則會(huì)影響結(jié)果。溫浴時(shí)間應(yīng)遵守檢測(cè)試劑盒規(guī)定。應(yīng)盡量做雙孔實(shí)驗(yàn),這樣才能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。固體試劑的取用:貼標(biāo)簽的一面必須朝向手心處【防止藥液灑出腐蝕標(biāo)簽】。
從滴瓶中取用少量試劑。瓶上裝有滴管的試劑瓶稱作滴瓶。滴管上部裝有橡皮頭,下部為細(xì)長(zhǎng)的管子。使用時(shí),提起滴管,使管口離開液面,用手指緊捏滴管上部的橡皮頭,以趕出滴管中的空氣,然后把滴管,伸入試劑瓶中,放開手指,吸入試劑。再提起滴管將試劑滴入試管或燒杯中。將試劑滴入試管中時(shí),可用無名指和中指夾住滴管,將它懸空地放在靠近試管口的上方,然后用大姆指和食指掐捏橡皮頭,使試劑滴入試管中。禁止將滴管伸入試管中。否則,滴管的管端將很容易碰到試管壁上面沾附了其他溶液。以致使試劑被污染。檢測(cè)試劑盒在沒有促凝劑和抗凝劑存在的狀況下,正常血液搜集后1/2~2h初步凝聚。LB Lennox培養(yǎng)基粉劑
磷酸緩沖鹽溶液可調(diào)整的適宜pH緩沖作用。Tris-HCl緩沖液(1.5mol/L,pH8.8)
用亞甲基藍(lán)溶液染色后,被染為深藍(lán)色的部分是(細(xì)胞核)亞甲基藍(lán)可以結(jié)合核酸,使細(xì)胞核呈藍(lán)色。 臺(tái)盼藍(lán)能使死細(xì)胞著色機(jī)理:正常的活細(xì)胞,胞膜結(jié)構(gòu)完整,能夠排斥臺(tái)盼藍(lán),使之不能夠進(jìn)入胞內(nèi);而喪失活性或細(xì)胞膜不完整的細(xì)胞,胞膜的通透性增加,可被臺(tái)盼藍(lán)染成藍(lán)色。通常認(rèn)為細(xì)胞膜完整性喪失,即可認(rèn)為細(xì)胞已經(jīng)死亡。因此,借助臺(tái)盼藍(lán)染色可以非常簡(jiǎn)便、快速地區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞。臺(tái)盼藍(lán)是組織和細(xì)胞培養(yǎng)中較常用的死細(xì)胞鑒定染色方法之一。Tris-HCl緩沖液(1.5mol/L,pH8.8)